奶香木生药学研究

曾业达，杨 丽，张丹雁，班梦梦，范紫颖

（广州中医药大学 中药学院，广东 广州 510006）

奶香木别名“奶沉”“蜜香木”，来源于桑科假鹊肾树属植物假鹊肾树Pseudostreblus indicusBureau倒地陈化形成的芳香木材，分布于中国的云南、广西、海南等省区及老挝[1-2]，木材行业又将假鹊肾树称为“水坡垒”“香坡垒”[3-4]。因散发特殊的奶香气，在香业市场常被制成熏香材料或文玩工艺品。《中国药用植物志》[5]记载假鹊肾树在我国西南地区民间常以树皮入药，药名为“滑叶跌打”“青树跌打”，具有散淤消肿、止痛、活血止血等功效，可治疗内外出血、跌打损伤及风湿痹痛等，该树皮以“滑叶跌打”中药名收录于1974 年版和1996 年版《云南省药品标准》，相关书籍与文献[6-12]均有药用记载及研究，“滑叶跌打”还是云南红药散的配方组成之一[13]。然而目前未见奶香木在药用方面的研究报道，奶香木是否与树皮一样具有药用价值，尚待研究。为探究奶香木的药用价值，本文初步研究奶香木的外观性状、显微组织及化学成分，为开发假鹊肾树药用植物新资源提供科学依据。

1 材料

1.1 供试样品

共收集20 批不同产地的奶香木样品，批号S1、S2 为对照样品，收集的实验样品经广州中医药大学张丹雁教授鉴定为来源于假鹊肾树Pseudostreblus indicusBureau 的茎、根部木材及树皮。样品保存于广州中医药大学中药鉴定实验室。样品信息见表1。

表1 奶香木样品信息Tab.1 The sample information of Naixiangmu

1.2 仪器

Canon PowerShot SX 70HS 型数码相机（日本佳能株式会社）；JJ-12J 型脱水机、JB-P5 型包埋机（武汉俊杰电子有限公司）；RM2016 型切片机（上海徕卡仪器有限公司）；B302 型生物显微镜（重庆奥特光学仪器有限责任公司）；DFY-300 型多功能高速粉碎机（温州顶历医疗器械有限公司）；CAMAGATS4 型全自动点样器（瑞士卡玛公司）；WFH-201B 型紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）；Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）。

1.3 试剂

50% FAA 固定液（批号：20210310，福州飞净生物科技有限公司）；水合氯醛（批号：C10107964，上海麦克林生化科技有限公司）；甲醇（批号：2021100208）、浓硫酸（批号：20210305）、盐酸（批号：20190503）、石油醚（沸程 60 ～ 90℃，批号：20210401）、三氯化铁（批号：2014120107）、三氯甲烷（批号：2021030103），均购于广州化学试剂厂；乙酸乙酯（批号：2020041039）、无水乙醇（批号：2020060149）、氢氧化钠（批号：2019102008）、甘油（批号：20180220）、冰醋酸（批号：2018101012）、二甲苯（批号：20200407），均购于天津市致远化学试剂有限公司；氯化铝（批号：20171114，天津市永大化学试剂有限公司）；苦味酸（批号：20170102，天津市大茂化学试剂厂）；邪蒿素（纯度 ≥ 96.5%，批号：NO3GB166576，上海源叶生物科技有限公司）；布拉易林（纯度 ≥ 98%，批号：OK210211D，北京沃凯生物科技有限公司）；滨蒿内酯（纯度 ≥ 98%，批号：201112，成都植标化纯生物技术有限公司）；佛手苷内酯（纯度：98%，批号：BD14410-0.25，上海毕得医药科技有限公司）；7-羟基香豆素（纯度：98%，批号：FY00B6109）、东莨菪内酯（纯度：98%，批号：FY1155B1218），均购于南通飞宇生物科技有限公司。甲醇（色谱级，批号：0212220402，上海麦克林生化科技有限公司）。

2 方法

2.1 性状鉴定

采用眼看、手摸、鼻闻及口尝等性状鉴定法观察奶香木外观形态，总结记录其鉴别特征。

2.2 显微鉴定

2.2.1 三向切面鉴定 采用常规石蜡切片法制备奶香木茎、根部三切面，显微装片，镜检。

2.2.2 粉末鉴定 取适量奶香木粉末（过5 号筛），制片完成后镜检观察。

2.3 薄层色谱鉴别

取表1 中供试与对照样品粉末（过2 号筛），置100 mL 带塞锥形瓶中，加入甲醇15 mL，40 kHz 超声辅助提取30 min，滤过得供试品溶液。另精密称取邪蒿素、布拉易林、滨蒿内酯、佛手苷内酯、伞形花内酯及东莨菪内酯对照品适量，加甲醇定容制成0.5 mg/mL 的对照品溶液。分别吸取供试品与对照品溶液3 μL，点于硅胶G 薄层板上，展开系统为石油醚∶乙酸乙酯（3 ∶2），展开完成后取出晾干，置365 nm 紫外光下检识。

2.4 指标成分含量测定

2.4.1 溶液制备 供试品溶液制备：取表1 中供试与对照样品共19 份（无S2），粉碎过5 号筛，精密称取0.2 g，置于具塞锥形瓶中，加入30 mL 甲醇，用封口膜封口，室温40 kHz 超声辅助提取30 min，充分摇匀，过滤，再经0.22 μm 有机微孔滤膜过滤，备用。每份供试品平行制备3 份。

对照品溶液制备：各取邪蒿素、布拉易林适量，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度为1 mg/mL 的母液。然后将邪蒿素母液逐级稀释成220、180、140、100、60、20 μg/mL 的对照品溶液，将布拉易林母液逐级稀释成120、100、80、60、40、20 μg/mL 的对照品溶液。

2.4.2 色谱条件 色谱柱为安捷伦Extend-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速为1 mL/min；柱温为30℃；邪蒿素检测波长为292 nm；布拉易林检测波长为257 nm；进样量为10 μL；流动相为水 （A）和甲醇（B），梯度洗脱：0 ～ 10 min，5%→35%B；10 ～25 min，35%→85%B；25 ～ 35 min，85%→95%B。

2.4.3 方法学考察 （1）线性关系 分别进样测定邪蒿素与布拉易林对照品溶液的色谱峰面积与保留时间，以峰面积（Y）对质量浓度（X，μg/mL）作线性回归方程。

（2）精密度试验 取220 μg/mL 邪蒿素对照品溶液，连续进样6 次，测定邪蒿素峰面积并计算RSD 值。

（3）重复性试验 按“2.4.1”项下方法平行制备奶香木供试品（批号4-1）溶液6 份，进样测定邪蒿素与布拉易林峰面积并计算RSD 值。

（4）稳定性试验 按“2.4.1”项下方法制备奶香木供试品（批号2-1）溶液，在0、3、6、9、12、24 h 进样测定邪蒿素与布拉易林峰面积并计算RSD 值。

（5）加样回收率试验 精密吸取“2.4.3（3）”项下已知质量浓度的6 份供试品溶液各100 μL，精密加入220 μg/mL 邪蒿素对照品溶液50 μL 与100 μg/mL 布拉易林对照品溶液50 μL，得200 μL混合供试品溶液。依照方法对6 份混合供试品溶液进行峰面积检测，计算回收率与RSD 值。

2.4.4 含量测定 取“2.4.1 ”项下的供试品溶液，依法进样，记录邪蒿素与布拉易林的峰面积与保留时间。

3 结果

3.1 性状鉴定

奶香木表面及断面见纵向及横向木纤维纹，黄白色、黄色及灰黑色，横切面偶见深浅不一的同心环纹，纵切面可见色泽深浅不一的条状纹理，表面及断面偶见白霜析出，具浓郁奶香气，味淡，木质坚硬，色深者香气更浓，质地更加致密。燃烧冒黑烟，体轻易浮水。见图1。

图1 奶香木性状特征图Fig.1 The macroscopical characteristics of Naixiangmu

3.2 显微鉴定

3.2.1 三向切面鉴定 茎部横切面：木射线组织径向排列，较密，宽窄不一，遇导管处常弯曲，宽多数1 ～ 3 列，少数4 列，射线细胞类长方形，胞腔较宽，可见纹孔。导管类圆形，多数2 ～ 3 个复管状或单个散在。木纤维呈类圆形或多角形，排列密集，壁厚。轴向薄壁组织整体成翼状、环管状或离管带状，离管薄壁细胞1 ～ 6 列。

茎部弦切面：木射线组织长梭形或纺锤形，宽1 ～ 4 列细胞，高4 ～ 33 个细胞，射线细胞类圆形或长椭圆形，非叠生。具缘纹孔导管长管状，两端平截或稍偏斜，纹孔密集。木纤维长梭形，排列紧密，壁厚且胞腔小。木薄壁细胞长楔形或长方形，一端平截或稍尖，部分细胞壁呈连珠状增厚。

茎部径切面：木射线排列成横向带状，高4 ～ 33个细胞，与木纤维、木薄壁细胞群垂直相交；射线细胞异形，呈横卧式或长方形，壁呈连珠状增厚。木薄壁细胞与木射线细胞偶含草酸钙方晶，余同弦切面。根部三切面显微与茎部相似。见图2 。

图2 奶香木茎部三切面显微图Fig.2 The microscopic characteristics of tri-directional section of Naixiangmu trunk

根部三向切面显微特征与茎部相似。横切面木射线组织径向排列，射线细胞类长方形；导管多复管状；轴向薄壁组织为翼状、环管状或离管带状。弦切面木射线组织宽1 ～ 4 列细胞，高4 ～ 30 个细胞；具缘纹孔导管，管腔稍大；木薄壁细胞为长楔形或长方形。径切面木射线组织高4 ～ 30 列细胞。见图3。

图3 奶香木根部三切面显微图Fig.3 The microscopic characteristics of tri-directional section of Naixiangmu root

3.2.2 粉末鉴定 奶香木粉末黄色。木纤维成束，黄棕色，长梭形，壁厚，胞腔小，外侧包围着含草酸钙方晶的薄壁细胞形成的晶鞘纤维。导管常破碎，具缘纹孔清晰呈短缝状，排列紧密。木薄壁细胞呈长楔形或长方形，一端平截或稍尖，部分壁微厚，具单纹孔，偶含方晶。木射线细胞长方形、类圆形或长椭圆形，壁有连珠状增厚，可见单纹孔。色素块黄棕色，呈不规则块状，大小不一。草酸钙方晶散在。见图4。

图4 奶香木粉末显微特征图Fig.4 The microscopic characteristics of powder from Naixiangmu

3.3 薄层色谱鉴别

薄层色谱图见图5，供试品与对照品在相应位置上显相同颜色斑点。初步检识出奶香木含邪蒿素（Rf≈ 0.62 ～ 0.7）、布拉易林（Rf≈ 0.37 ～ 0.43）及滨蒿内酯（Rf≈ 0.27 ～ 0.33），可能含有佛手苷内酯等香豆素类成分。假鹊肾树树皮含有佛手苷内酯、7-羟基香豆素（伞形花内酯）与东莨菪内酯。故选取邪蒿素与布拉易林作为奶香木的指标成分进行含量测定。

图5 奶香木薄层色谱图Fig.5 The thin layer chromatography of Naixiangmu

3.4 指标成分含量测定

3.4.1 方法学考察 （1）线性关系 邪蒿素线性回归方程为Y= 209.35X+ 415.24，R2= 0.999 4，在20 ～ 220 μg/mL 范围内线性关系良好，平均保留时间为25.430 min；布拉易林线性回归方程为Y= 156.05X-385.99，R2= 0.999 7，在20 ～ 120 μg/mL 范围内线性关系良好，平均保留时间为22.987 min。

（2）精密度试验 连续进样6 次测定的邪蒿素峰面积RSD 值为0.1%，表明仪器精密度良好。

（3）重复性试验 6 份供试品溶液的邪蒿素峰面积RSD 值为0.49%，布拉易林峰面积RSD 值为1.23%，表明该方法重复性良好。

（4）稳定性试验 不同时间段进样测定供试品溶液邪蒿素峰面积RSD 值为0.24%，布拉易林峰面积RSD 值为0.19%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

（5）加样回收率试验 6 份混合供试品溶液的邪蒿素平均回收率为100.11%，RSD 值为1.18%，布拉易林平均回收率为99.46%，RSD 值为0.69%。

3.4.2 含量测定 采用外标法并根据线性回归方程，将峰面积换算成供试品中邪蒿素与布拉易林的含量。供试品与对照品液相色谱图见图6，供试品含量测定结果见表2。

图6 供试品与对照品溶液高效液相色谱图Fig.6 The high performance liquid chromatogram of test and reference solutions

表2 供试品含量测定结果（mg/g，±s，n = 3）Tab.2 Content determination results of test sample（mg/g，±s，n = 3）

表2 供试品含量测定结果（mg/g，±s，n = 3）Tab.2 Content determination results of test sample（mg/g，±s，n = 3）

批号邪蒿素布拉易林1-1 32.7 ± 0.424.3 ± 0.3 1-2 31.7 ± 0.527.1 ± 0.6 1-3 26.2 ± 0.521.6 ± 0.5 1-4 42.8 ± 0.326.5 ± 0.5 2-1 7.2 ± 0.225.3 ± 0.7 2-2 28.4 ± 0.428.5 ± 0.2 2-3 11.0 ± 0.126.8 ± 0.3 2-4 18.7 ± 0.326.2 ± 0.3 3-1 27.4 ± 0.630.2 ± 0.7 3-2 15.7 ± 0.316.2 ± 0.3 3-3 22.7 ± 0.343.6 ± 0.2 3-4 34.0 ± 0.232.5 ± 0.6 4-1 35.1 ± 0.225.2 ± 0.4 4-2 34.3 ± 0.335.4 ± 0.5 4-3 31.1 ± 0.352.5 ± 0.4 5-1 20.9 ± 0.260.1 ± 0.6 5-2 18.7 ± 0.344.1 ± 0.3 5-3 7.8 ± 0.249.0 ± 0.4 S1 28.4 ± 0.120.3 ± 0.1

4 讨论

奶香木具有丰富的纤维纹、同心环纹及奶香气等性状特征。显微鉴别特征为具缘纹孔导管，木射线组织宽1 ～ 4 列细胞，高4 ～ 33 个细胞，射线细胞异形，非叠生，木薄壁细胞长楔形或长方形，木薄壁细胞与射线细胞均具单纹孔且壁有连珠状增厚现象，可见草酸钙方晶与色素块。根据预试验并结合相关文献[10-11]发现香豆素类成分可作为奶香木薄层色谱的鉴别成分，经前期实验筛选出适宜的薄层色谱条件，该薄层方法简便高效、分离度好，适用于奶香木的鉴别。

六个对照品均为文献[10-11]报道从假鹊肾树树皮中分离出的活性成分，其中，邪蒿素与布拉易林为奶香木薄层斑点的主要成分，因具有多种药理活性，可作为奶香木的指标成分并通过高效液相色谱进行含量测定。紫外全波长扫描确定邪蒿素最大吸收波长为292 nm，布拉易林最大吸收波长为257 nm。液相色谱条件筛选过程中，以两个指标性成分的分离效果为指标，分析检测时间与色谱图基线是否平稳，考察了不同有机相（甲醇、乙腈）与水相（0.1%甲酸、0.1%磷酸-水溶液及超纯水）对色谱峰的影响，最终选用甲醇与超纯水作为流动相体系，综合考量指标成分保留时间与各成分分离度后，筛选出适宜的流动相配比与时间梯度。该色谱条件下，供试品指标成分的保留时间与对照品吻合，分离度与稳定性良好，同时方法学考察RSD 值均小于3%，说明该分析设备与检测条件具备可行性，适用于奶香木指标成分的含量测定。由测定结果可知，不同产地奶香木的邪蒿素含量为7 ～ 43 mg/g，布拉易林为15 ～ 60 mg/g，两成分的平均含量较高。产地气候条件与自然陈化过程是否对邪蒿素与布拉易林含量产生影响，尚待研究。

5 结论

本研究鉴定了奶香木的性状与显微组织特征，建立了薄层与液相色谱鉴别方法，分析发现奶香木含多种香豆素类活性成分，为奶香木进一步开发应用奠定基础。