凤丹皮的质量标准研究

钱世兵,朱月辉,方凌,陈郝,项琪琪,方荣 （.安徽省铜陵市药品不良反应监测中心,安徽 铜陵 44000;.安徽省铜陵市食品药品检验中心,安徽 铜陵 44000）

凤丹皮为毛茛科植物凤丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。秋季采挖根部，除去细根和泥沙，剥取根皮，晒干；或刮去粗皮，除去木心，晒干[1]。凤丹皮主要产于安徽铜陵凤凰山地区，为铜陵市的道地药材，始载于《神农本草经》[2]。凤丹皮，苦、辛，微寒，归心、肝、肾经。具有清热凉血、活血化瘀的功效，用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、跌扑伤痛、痈肿疮毒。凤丹皮在中药处方中应用非常广泛，《中华人民共和国药典》和中药部颁标准中收录了很多含有凤丹皮的复方制剂。目前也有较多文献报道了凤丹皮药材的质量控制指标，但对凤丹皮的质量标准研究较少[3-9]。本实验对来自安徽铜陵凤凰山的10批次凤丹皮进行了牡丹皮对照药材、丹皮酚对照品以及没食子酸对照品的薄层鉴别，并测定了其水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和丹皮酚的含量，为凤丹皮质量标准的制定提供了实验依据。

1 仪器、试药与材料

1.1 仪器 赛默飞世尔U3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技(中国）有限公司）；AB135-S电子天平（十万分之一）（梅特勒托利多公司）；LT12/15/C450箱式电阻炉（纳博热(上海)工业炉有限公司）；FD115电热恒温鼓风干燥箱（德国宾德公司）；Good look-2000卡玛薄层色谱数码成像系统（上海科哲生化科技有限公司）Linomat 5卡玛半自动点样仪（上海持互电子有限公司）。

1.2 试药 薄层层析用硅胶G板（青岛海洋化工有限公司）；甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水；牡丹皮对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121490-201603，供薄层色谱鉴别使用）；丹皮酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110708-201908，供含量测定使用）；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110831-201906，供含量测定使用），其余为分析纯。

1.3 材料 10批凤丹皮药材均购自道地产地安徽铜陵凤凰山，并经安徽中医药大学中药鉴定教研室刘守金教授鉴定为毛茛科植物凤丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的干燥根皮。见表1。

表1 凤丹皮药材收集编号表

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别取本品粉末2g，加水l0ml，超声处理15分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液。取牡丹皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。另取丹皮酚和没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各4-10μl，对照品溶液3μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以1%三氯化铁乙醇溶液，在105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。薄层照片见图1。

图1 10批凤丹皮样品的薄层色谱图。3-12为凤丹皮F1-F10，1为丹皮酚对照品，2为牡丹皮对照药材，13为没食子酸对照品

2.2 水分检查 按照中国药典收载的水分测定方法（《中国药典》2020年版四部通则0832 第四法）对10批凤丹皮样品进行了水分的测定，结果见表2。

表2 凤丹皮药材检查项和含量测定结果(%)

2.3 灰分检查 按照中国药典收载的灰分测定方法（《中国药典》2020年版四部通则2302）对10批凤丹皮样品进行了总灰分和酸不溶性灰分的测定，结果见表2。

2.4 浸出物检查 按照中国药典收载的浸出物测定方法（《中国药典》2020年版四部通则2201）项下的热浸法，用乙醇作溶剂，对10批凤丹皮样品进行了浸出物的测定，结果见表2。

2.5 含量测定

2.5.1 色谱条件 色谱柱：大连依利特C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45∶55），流速为每分钟1.0ml；柱温30℃；检测波长为274nm；理论塔板数按丹皮酚峰计算应不低于5000。

2.5.2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5.3 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.5.4 线性关系考察 将浓度为0.02116mg/ml的丹皮酚对照品溶液进行稀释，分别制备成0.04232μg/ml、0.08464μg/ml、0.16928μg/ml、0.2116μg/ml、0.3174μg/ml、0.4232μg/ml的对照品溶液，分别精密吸取上述6份对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，对照品溶液浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，得丹皮酚的线性回归方程y=3307.8x+1.498（r=0.9999，n=6）。结果表明，丹皮酚在0.04232-0.4232μg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5.5 精密度试验 取0.02116mg/ml的丹皮酚对照品溶液，精密吸取10μl连续进样6次，丹皮酚峰面积的RSD为1.3%，结果表明，该方法的精密度良好。

2.5.6 重复性试验 取编号为F1的凤丹皮样品6份，依法制备供试品溶液，测定供试品中丹皮酚的峰面积，RSD为1.3%，结果表明，该方法的重复性良好。

2.5.7 稳定性试验 取编号为F1的同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、16h、24h进样，共测定6次，测得丹皮酚峰面积的RSD为1.2%，结果表明，该方法在24h内的稳定性良好。

2.5.8 加样回收率试验 取已知含量的F1样品约0.25g，精密称定，共6份，分别加入7.35mg/ml的丹皮酚对照品溶液1ml，依法测定，计算，得丹皮酚的平均回收率为104.58%，RSD为4.5%。结果见表3。

表3 丹皮酚加样回收率试验结果(n＝6)

2.5.9 样品含量试验 取10批凤丹皮药材样品约0.5g，精密称定，依法制备供试品溶液，测定丹皮酚的峰面积，代入回归方程计算样品中丹皮酚的含量。结果见表2。样品和丹皮酚的HPLC图谱见图2、图3。

图2 凤丹皮样品的HPLC图谱

图3 丹皮酚对照品的HPLC图谱

3 结论

3.1 薄层色谱的结果 薄层色谱结果表明，采用该方法可以检出10批凤丹皮药材在薄层色谱中与牡丹皮对照药材、丹皮酚对照品以及没食子酸对照品在相应的位置上显示相同颜色的斑点，且斑点清晰，方法简便、快速、可行，故此方法可作为凤丹皮药材的定性鉴别依据。

3.2 10 批凤丹皮药材的检查项和含量测定结果 10批样品的各项试验结果差异不大，各项指标的平均值为：水分11.23%，总灰分4.53%，酸不溶性灰分0.52%，浸出物27.43%，丹皮酚含量2.33%。参照试验结果，根据药典委员会的要求，并考虑到凤丹皮为根皮类药材的实际情况以及药典中牡丹皮的质量标准，故建议规定凤丹皮药材的水分不得超过13.0%，总灰分不得超过5.0%，酸不溶性灰分不得超过1.0%，浸出物不得少于15.0%，丹皮酚的含量不得少于1.2%。凤丹皮药材中有药理活性的成分较多，但含量参差不齐，通过前期研究和查阅文献得知，丹皮酚的含量比较稳定，一般都在1%以上[10]，所以笔者以丹皮酚为指标，采用高效液相色谱法测定凤丹皮的丹皮酚含量，建立相应的质量控制方法。

3.3 本实验建立了凤丹皮的定性定量分析方法，方法简便、快速、专属性强、重现性好，可为凤丹皮药材的质量控制方法提供依据。