血清miR-1246、HE4、YKL-40对浆液性卵巢癌级别的诊断价值及与预后的关系*

钱世庆,杨海萍,余 俊,杨玉坤

1.安徽省庐江县人民医院,安徽合肥 231500;2.六安市人民医院,安徽六安 237000;3.合肥诺森医学检验中心,安徽合肥 230000

浆液性卵巢癌是临床常见的卵巢癌病理类型之一,其中高级别的浆液性卵巢癌具有恶性程度高、侵袭性强、预后较差等特点。据统计,即使此类患者接受积极治疗,半年内期复发率仍高达25%左右,且5年生存率仅为31%[1-2]。因此,及早明确浆液性卵巢癌级别,寻找潜在的生物标志物,制订针对性的治疗方案以提高疗效具有重要意义。微小RNA(miRNA)miR-1246属于肿瘤促进因子,在结直肠癌、宫颈鳞癌等多种恶性肿瘤中呈高表达[3]。人附睾蛋白4(HE4)是一种分泌性糖蛋白,参与肿瘤发生、发展、迁移及侵袭过程[4]。甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)属于外壳质酶家族,与多种细胞的分化、增殖、细胞外组织重塑及血管形成等生物学行为联系紧密,在恶性肿瘤组织中存在特异性表达[5]。但关于三者对浆液性卵巢癌级别的诊断价值及与预后的关系的研究报道较少,故本课题组对此进行了探讨,旨在为临床诊断提供参考,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 将安徽省庐江县人民医院2019年1月至2020年7月收治的浆液性卵巢癌患者87例纳入研究。纳入研究的患者年龄40～72岁、平均(57.31±5.02)岁,体重指数(BMI)17～29 kg/m2、平均(24.88±1.16)kg/m2;FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期42例;其中有吸烟史18例,有饮酒史27例。根据病理检查确定的浆液性卵巢癌级别将纳入研究的患者分为低级别组(30例)与高级别组(57例)。两组年龄、BMI、吸烟史、饮酒史比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组FIGO分期比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2纳入及排除标准 纳入标准:(1)经病理检查确诊为浆液性卵巢癌;(2)初诊患者;(3)参与本研究前未接受任何抗肿瘤治疗;(4)患者及家属均知情同意并自愿签订知情同意书。排除标准:(1)合并内分泌疾病;(2)心、肝、肾、肺等重要器官功能异常;(3)伴有其他部位良/恶性肿瘤;(4)并发全身急慢性感染;(5)合并结缔组织疾病;(6)妊娠期、哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1标本采集 所有纳入研究者于入院当日清晨采集空腹静脉血4 mL,置入不加抗凝剂的离心管(购自鑫联城润生物技术有限公司),在室温条件下静置1 h,以3 000 r/min离心10 min,取上清液,于-80 ℃冰箱保存备用。

1.3.2血清miR-1246水平检测 采用RNA提取试剂盒(购自赛默飞公司)提取总RNA,行逆转录后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测,检测仪器为赛默飞公司的Applied Biosystems PCR仪,以U6为内参,采用2-ΔΔCt法计算miR-1246的相对表达水平。

1.3.3血清HE-4、YKL-40水平检测 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法检测血清HE-4、YKL-40水平,试剂盒购自瑞典康乃格公司,酶标仪购自Molecular Devices公司,所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.4随访 对纳入研究的患者进行2年随访。

2 结 果

2.1两组血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比较 高级别组血清miR-1246、HE4、YKL-40水平均高于低级别组(P<0.05),见表2。

表2 两组血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比较

2.2血清miR-1246、HE4、YKL-40与浆液性卵巢癌级别的关系 血清miR-1246、HE4、YKL-40均与浆液性卵巢癌级别呈正相关(r=0.625、0.714、0.703,P<0.05)。

2.3血清miR-1246、HE4、YKL-40单独及联合诊断浆液性卵巢癌级别的价值 以高级别组作为阳性样本,低级别组作为阴性样本,绘制ROC曲线,结果显示,血清miR-1246、HE4、YKL-40诊断浆液性卵巢癌级别的曲线下面积(AUC)分别为0.830(95%CI:0.735～0.902)、0.812(95%CI:0.714～0.888)、0.833(95%CI:0.738～0.905)。3项指标联合诊断浆液性卵巢癌级别的AUC为0.938(95%CI:0.865～0.979),约登指数为0.775,灵敏度为84.21%,特异度为93.33%,优于各血清指标单独诊断,见表3、图1。

注:A为3项指标单独诊断的ROC曲线;B为3项指标联合诊断的ROC曲线。

表3 血清miR-1246、HE4、YKL-40诊断浆液性卵巢癌级别价值

2.4不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存率 随访2年,失访4例。83例浆液性卵巢癌患者2年生存率为67.46%(56/83),见图2。生存曲线分析显示,血清miR-1246、HE4、YKL-40高水平患者2年生存率分别为53.49%(23/43)、52.50%(21/40)、56.60%(30/53),均低于低水平患者的82.50%(33/40)、81.40%(35/43)、86.67%(26/30),差异有统计学意义(P<0.05),见图3。

图2 浆液性卵巢癌患者生存曲线

图3 不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存曲线

3 讨 论

miRNA在生物转录后基因表达的负向调节方面发挥至关重要的作用,可经由下游信号通路及调节靶基因等途径产生抑癌基因或促癌基因的作用[6-7]。既往研究均指出,miRNA失调与卵巢癌发生、发展联系紧密[8-9]。其中,miR-1246在多种肿瘤中发现其呈高表达,被认为有促癌基因的作用[10]。楚丽等[11]报道显示,miR-1246能够加快肺上皮祖细胞增殖、分化,促进非小细胞肺癌进展。在此基础上,本研究发现,高级别组血清miR-1246水平高于低级别组,与浆液性卵巢癌级别呈正相关,可见miR-1246在浆液性卵巢癌发展过程中具有重要促进作用。分析原因,主要在于肿瘤细胞可选择性分泌富含miR-1246的外泌体,而这些外泌体会被周围巨噬细胞吞噬,促使巨噬细胞转化为与肿瘤相关的巨噬细胞,从而改变肿瘤细胞内部微环境,加快肿瘤细胞增殖、分化、侵袭及转移,提高肿瘤恶性程度[12]。同时,一项体外实验证实,miR-1246可以显著提高SKOV3卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡,促进卵巢癌进展[13]。本研究还发现,血清miR-1246高水平患者2年生存率低于低水平患者,提示miR-1246表达异常升高还会对浆液性卵巢癌患者生存预后产生影响,可作为靶向治疗的靶点,以延长生存期,改善预后。

HE4属于抑蛋白酶家族,最早是在人附睾上皮细胞中被发现,大量临床实践证实,HE4是一种生殖相关、附睾特异性的蛋白[14-15]。既往研究表明,HE4在正常卵巢组织中不表达或处于低表达状态,在卵巢癌组织中呈高表达趋势,可作为临床诊断卵巢癌的生物学标志物[16-17]。本研究结果显示,高级别浆液性卵巢癌患者血清HE4水平明显高于低级别浆液性卵巢癌患者,说明HE4不仅参与卵巢癌发生过程,还能促进卵巢癌发展。结合LIU等[18]报道考虑为HE4具有调节肿瘤细胞增殖、分化、转移及凋亡作用,异常高表达能显著提高肿瘤细胞侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡,从而增加肿瘤组织恶性程度,加快卵巢癌病情进展。本研究结果表明,血清HE4与浆液性卵巢癌级别呈正相关,可为临床准确评估病理级别提供有效参考依据。同时,本研究还发现,HE4显著升高表达会明显降低浆液性卵巢癌患者2年生存率,提示临床可将其作为生存预后判断的重要辅助指标。

YKL-40是哺乳动物18糖蛋白家族中的成员之一,相关报道证实,其在炎症、细胞外基质重塑、肿瘤血管形成、恶性肿瘤细胞增殖浸润等多种生理病理过程中具有重要作用[19]。杨华等[20]、HAO等[21]研究报道证实,YKL-40在子宫内膜癌、膀胱癌中呈高表达。本研究在此基础上发现,高级别组血清YKL-40水平高于低级别组,与浆液性卵巢癌级别呈正相关,可见血清YKL-40可作为临床评估浆液性卵巢癌级别的血清学指标。究其原因,主要是由于YKL-40具有肿瘤生长因子作用,可有效促进肿瘤新生血管形成,加快肿瘤细胞浸润、侵袭,从而发挥加速肿瘤病情进展的作用,同时,中性粒细胞、巨噬细胞等间质细胞也会不同程度表达YKL-40,随着卵巢恶性肿瘤组织浸润、侵袭及转移的范围更为广泛,其肿瘤间质成分还会增加,导致YKL-40被过多表达,进一步促进卵巢癌发展[22-23]。本研究结果还表明,血清YKL-40高水平患者2年生存率低于低水平患者,可见YKL-40高表达会提高浆液性卵巢癌死亡风险,提示临床可通过监测其血清水平变化为评估生存预后提供有效信息。

此外,本研究发现,血清miR-1246、HE4、YKL-40单独诊断浆液性卵巢癌级别的价值欠佳,难以单独应用于临床诊断中。为此,本研究探讨了血清miR-1246、HE4、YKL-40联合诊断的价值,结果发现联合诊断的效能优于三者单独诊断,可以为临床及早准确评估浆液性卵巢癌级别提供新思路及可靠的数据支持。

综上可知,血清miR-1246、HE4、YKL-40与浆液性卵巢癌级别呈正相关,联合诊断价值较高,而且与生存预后联系紧密,可为临床诊治提供有效信息。本研究的不足之处:受临床资料收集和时间限制,仅随访并统计了患者2年的生存情况,今后应延长随访时间,以得出更全面可靠的结论。