对畜禽水产中药物残留检测方法的探索研究

虞叶道

磺胺类、喹诺酮类药物（恩诺沙星）是人畜共用药物，近些年被广泛用于畜禽水产养殖行业。现在针对畜禽水产中磺胺类、喹诺酮类的检测方法较少，有些前处理步骤相对繁琐，有些还需要用到同位素内标，成本较高。本文采用MCX小柱净化-液相色谱/串联质谱法，测定畜禽水产中磺胺类等15种兽药残留。通过对萃取净化条件的优化，减少组分浸提损失；通过改变液相色谱/串联质谱法仪器条件，筛选最佳仪器条件，对磺胺类等兽药进行快速组分分离。结果表明，该方法具有普适性强、操作简单易上手、灵敏度好、经济实用等优点，可作为畜禽水产中兽药残留检测的备用方法。

一、材料与实验

1.主要仪器和试剂。（1）仪器。液相色谱-质谱联用仪，岛津LC30AD-LCMS8050；旋转蒸发仪，步琦B-100；旋涡混合仪，金坛区白塔金昌实验仪器JC2500；电子天平，梅特勒-托利多PL2002。（2）试剂。乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、氯化钠（优级纯）、盐酸（优级纯）、氨水（优级纯）、0.5%酸化乙腈（甲酸+乙腈：5+995）、MCX小柱（150mg，6mL）。（3）标准物质。农业农村部环境保护科研监测所所制的单标，磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹啉、磺胺噻唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺二甲异唑、恩诺沙星、盐酸环丙沙星，浓度均为100μg/mL。

2.液相色谱-串联质谱仪工作条件。（1）流动相组成。流动相A：0.1%甲酸，流动相B：乙腈+甲醇（6+4）；进样量：1.0μL，流速：0.2mL/min，柱温：35℃；色谱agilentC18 plus，色谱柱规格1.8μm×0.3×5cm。梯度洗脱程序如表1所示。

（2）质谱工作条件。离子源类型：ESI，离子源温度：300℃，离子源电压：4.0kV；加热气流量：10L/min，雾化气流量：3L/min，干燥气流量：10L/min；脱溶剂管温度：250℃，加热块温度：300℃；碰撞气压力：270kPa。监测离子对选择参数详见表2。

3.样品处理。（1）样品制備。选取普通市售的鸡肉、牛肉、淡水鱼、淡水虾各1000g，并分别取可食部分用制样机充分匀浆，备用。

（2）提取。称取5g均匀样品于50mL离心管中，先加3g氯化钠，再加0.5%酸化乙腈10mL，放入多孔位旋涡振荡仪3000r/min旋涡提取10min（或手动用力振摇5min），然后置于离心机3000r/min离心5min，吸取上清液于梨形瓶中。再次加入10mL酸化乙腈重复上述浸提步骤，并合并浸提液于同一梨形瓶。将梨形瓶置于旋转蒸发仪上，将浸提液旋转浓缩至约1mL。

（3）MCX小柱净化。先用5mL甲醇和0.1%盐酸活化MCX小柱（150mg，6mL），再将MCX小柱吹干。用3mL的0.1%盐酸复溶梨形瓶中浓缩液，将复溶液移入已活化的小柱中，用3mL的0.1%盐酸重复洗一次梨形瓶，一并移入小柱中。待小柱复溶液流尽后，用6mL甲醇分两次洗小柱，然后吹干。最后用20mL的10%氨化甲醇洗脱小柱，将洗脱液收集于梨形瓶中，再置于旋转蒸发仪上蒸干（中间可用甲醇溶液置换溶剂一至两次），然后用1mL乙腈+水（9+1）复溶，过0.22μm有机相滤头后，待液相质谱上机测试。

（4）空白样制备。同时按照相同的操作步骤，不加样品制备空白试样。

4.样品测定。（1）仪器准备。用岛津指定的调谐液对仪器作自动调节，使质谱仪各方面参数处于最佳匹配状态。

（2）色谱图。磺胺类及喹诺酮（恩诺沙星）等15种兽药残留谱图如图1所示。

（3）标准曲线。分别吸取浓度为100μg/mL的各个单标物质100μL到同一容量瓶中，用0.5%酸化乙腈定容至刻度，配制成1.0μg/mL的混标。用混标依次稀释配制浓度为1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.00μg/L、50.0μg/L的标准系列，用0.5%酸化乙腈定容至1mL。经分析测试后，相关系数均为0.995-0.999。

二、结果与讨论

1.方法的定量限测定。按照实验步骤，对市售的鸡肉、牛肉、淡水鱼、淡水虾等空白基质分别进行6平行加标测试，经计算取1.0μg/kg作为本方法定量限。

2.方法的准确度和精密度测试。对市售的鸡肉、牛肉、淡水鱼、淡水虾等空白基质，分别在定量限水平做6平行加标，以测试方法的准确度和精密度。测试结果详见表3。

综上所述，本文建立了MCX小柱净化-液相色谱/串联质谱法测定畜禽水产中磺胺类等15种兽药残留的分析方法。此方法操作相对简单、灵敏度高、净化效果好、基质适用性广，且检测成本相对较低，为开展畜禽水产中磺胺类等兽药残留的研究提供了有效的测试方法。

作者简介：虞叶道（1982-），男，汉族，江苏常州人，中级工程师，大学本科，研究方向为农药兽药残留检测。