顶空气相色谱法测定盐酸尼卡地平原料药的残留溶剂

高睿 于明 黄海

【摘要】目的：建立盐酸尼卡地平中多种有机溶剂残留量的测定方法。方法：采用顶空气相色谱内标法，色谱柱为DB-624毛细管柱（30 m×0.53 mm，3.0μm），载气为氮气，氢火焰离子化检测器，柱温程序升温（初始柱温40℃维持11 min，以40℃·min-1的速率升温至200℃，维持5 min。结果：7种组分甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯，在此条件下能有效分离，线性范围分别为149.82～898.92μg·mL1（r=0.9997）、264.50～1587.00μg·mL-1（r=0.9994）、252.90～1770.30μg·mL-1（r=0.9979）、250.00～ 1500.00μg·mL-1（r=0.9997）、251.56～1509.36μg·mL-1（r=0.9997）、6.534～22.869μg·mL-1（r=0.9995）、0.242～0.847μg·mL-1（r= 0.9998），平均回收率分别为90.48%（RSD%=3.38%），105.64%（RSD%=3.42%），103.55%（RSD%=3.95%），95.66%（RSD%= 3.83%），104.70%（RSD%=2.85%），94.61%（RSD%=3.59%），99.09%（RSD%=6.21%），（n=9），檢测限（LOD）分别为：0.15，0.026，0.015，0.25，0.25，3.27，0.12μg·mL-1。结论：该方法简单、准确、灵敏度高、重复性好，适合于盐酸尼卡地平中残留溶剂的检测。

【关键词】盐酸尼卡地平；顶空气相色谱法；残留溶剂

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.01.035

【基金项目】辽宁省自然基金资助计划（2019-MS-185）。

Determination of Residual Organic Solvents in Nicardipine Hydrochloride by Headspace GC

GAO Rui，YU Ming，HUANG Hai

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：Objective：To establish a headspace gas chromatography method for the determination of residual solvents in decitabi

ne.Methods：A headspace gas chromatography with an internal standard was used with a capillary column DB-624（30 m×0.53 mm，3.0μm），and with nitrogen as the carrier and an FID as the detector.The column temperature was programmed raising （ the initial temperature was 40℃，maintaining for 11 min，and rose to 200℃at the rate of 40℃·min-1，maintaining for 5 min.Results：The linear range for methanol，methyl formate，acetonitrile and methyl p-toluate was 149.82～898.92μg·mL-1（r=0.9997）、264.50～1587.00μg·mL-1（r=0.9994）、252.90～1770.30μg·mL-1（r=0.9979）、250.00～1500.00μg·mL-1（r=0.9997）、251.56～1509.36μg·mL-1（r=0.9997）、6.534～ 22.869μg·mL-1（r=0.9995）、0.242～0.847μg·mL-1（r=0.9998），respectively.The average recovery was 90.48%（RSD%=3.38%），105.64%（RSD%=3.42%），103.55%（RSD%=3.95%），95.66%（RSD%=3.83%），104.70%（RSD%=2.85%），94.61%（RSD%=3.59%），99.09%（RSD%=6.21%），（n=9），and the LOD were 0.15，0.026，0.015，0.25，0.25，3.27，0.12μg·mL-1，respectively.Conclusion：The method is simple，accurate，sensitive and reproducible.It can be used for the determination of various residual solvents in decitabine.

Key words：Nicardipine hydrochloride；headspace gas chromatography；residual solvents

盐酸尼卡地平是日本山之内制药株式会社开发的动脉血管扩张剂，用于缺血性脑血管疾病和原发性高血压患者。盐酸尼卡地平在制备工艺中使用有机溶剂有异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、苯、三氯甲烷、甲醇[1～2]，根据国际人用药品注册技术要求国际协会（ICH）对有机溶剂残留量测定的指导原则，应对此7种有机组分的残留进行控制，以确保人体的用药安全。本试验根据文献[3～7]建立了盐酸尼卡地平原料药中残留有机溶剂的顶空气相色谱测定方法。

1仪器与试药

岛津GC-2010Plus气相色谱仪、Satorius分析天平（0.0001 g）BSA224S-CW、7697A顶空进样器（美国安捷伦科技有限公司）。

无水甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170306，含量：≥99.5%）；乙醚（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170418，含量：≥99.5%）；丙酮（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20090630，含量：≥99.5%）；异丙醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170724，含量：≥99.7%）；乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司，批号：20160902，含量：≥99.5%）；三氯甲烷（国药集团化学试剂有限公司，批号：20170215，含量：≥99.0%）；苯（国药集团化学试剂有限公司，批号：20061108，含量：≥99.5%）；3批测试样品（Y201802002、Y201803001、Y201803002）。

2方法與结果

2.1色谱条件

DB-624毛细管柱（30 m×0.53 mm，3.0μm），FID离子化检测器，检测器温度250℃，进样器温度220℃，载气为氮气，分流比1，柱流速3.0 mL·mL-1，氢气流速40 mL·mL-1，空气流速400 mL·mL-1，柱温采用程序升温：初始柱温40℃维持11 min，以40℃·min-1的速度升温至200℃，维持5 min。顶空瓶的平衡温度70℃，平衡时间30 min。

2.2溶液的制备

1）空白溶液，精密量取DMF2 mL，置10 mL顶空瓶中，密封。

2）对照品贮备液，分别精密称取甲醇0.7491 g、乙醚1.3225 g、丙酮1.2645 g、异丙醇1.2500 g、乙酸乙酯1.2578 g，置50 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，分别制成上述各对照品贮备液。

精密称取三氯甲烷0.6534 g，置20 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，制成三氯甲烷对照品贮备液。

精密称取苯0.1209 g，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，制成苯对照品贮备液。

3）对照品溶液，取对照品贮备液各1.0 mL置100 mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取 2 mL，置10 mL顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

4）供试品溶液，精密称取盐酸尼卡地平样品0.4 g，置于10 mL顶空瓶中，精密加入DMF2 mL，振摇溶解，密封，作为供试品溶液。

2.3专属性与系统适用性试验

在上述色谱条件下，将对照品溶液和空白溶液分别进样。

结果表明：空白溶剂（见图1）对甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯的检测均无干扰，方法专属性符合要求；各组分均能完全分离（见图2）。

2.4线性关系考察

分别精密量取各对照品贮备液1 mL，2 mL，3 mL，5 mL，6 mL，7 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀；再分别精密量取线性对照溶液2 mL，置10 mL顶空瓶中，密封，测定：以浓度为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归。

结果表明：在浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系（见表1及图3）。

2.5重复性试验

分别精密量取各对照品贮备液4 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。精密量取2 mL，置10 mL顶空瓶中，密封按“2.2，步骤4）”项下方法平行制备6份对照品溶液，测定峰面积。

试验结果：甲醇、丙酮的RSD%分别为5.0%，2.86%（n=6），见表2，符合《中华人民共和国药典（2020年版）》残留溶剂重复性要求（RSD%≤5%）。

2.6检测限和定量限的测定

取对照品溶液用稀释剂逐级稀释，置顶空瓶中进样，重复测试3次，按信噪比（S/N）10和3，测得甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、苯的检测限结果见表3。

2.7回收率试验

分别精密量取“2.2，步骤2）”项下的对照品贮备液2 mL、4 mL、5 mL，置100 mL量瓶中，用DMF稀释至刻度，制成50%、100%、125%三个浓度的混合对照品溶液。精密称取已知残留溶剂量的盐酸尼卡地平（批号为130902）0.4 g，共9份，分别置10 mL顶空瓶中，密封，作为供试品溶液。检测并记录色谱图，计算回收率。甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、苯的平均回收率分别为：90.48%（RSD%=3.4%），105.64%（RSD% =3.4%），103.55%（RSD% =4.0%），95.66%（RSD% =3.8%），104.70%（RSD% =2.8%），94.61%（RSD% = 3.6%），99.09%（RSD%=6.2%），（n=9），均在80%～120%之间，符合残留溶剂准确度测定的要求。

2.8样品测定

按“2.2，步骤4）”项下方法制备供试品溶液，分别取每一份供试品溶液置顶空瓶中进样，各平行测试2次，计算样品中的有机溶剂残留量，含量均在规定限度范围之内。结果见表4。

3讨论

1）溶剂的选择。盐酸尼卡地平在水中几乎不溶，故以DMF为溶剂。

2）根据文献报道，经试验确定在中等极性色谱柱系统条件下，采用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近）为固定液的毛细管色谱柱，起始温度为40℃时，甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和苯能够有效分离。为保证混合对照品溶液中限度和检测灵敏度较低的苯和三氯甲烷能够有效检出，分流比设定为1，丙酮和异丙醇则因浓度较大不能达到基线分离，故将二者分离度定为不小于1.4；其他色谱峰的分离度均能满足ICH和《中国药典》中的规定[8～9]。试验证明，此条件下，分离效果较好，灵敏度高，重现性好。

3）盐酸尼卡地平分子结构中还有甲氧基，在较高顶空温度下有可能发生热裂解产生甲醇，进而影响样品中甲醇残留量的测定，故选择70℃平衡30分钟的顶空条件。

4小结

本试验采用顶空色谱法，对3批次盐酸尼卡地平原料药中有机溶剂残留物进行了检测，工艺中使用的有机溶剂检出甲醇和丙酮，其他有机溶剂均小于药典规定限度[8]，其他有機溶剂未检出。该方法简单、准确、灵敏度高、重复性好，适合于盐酸尼卡地平中残留溶剂的检测。

【参考文献】

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[9] ICH指导委员会.周海钧译.药品注册国际技术要求（质量部分）[M].北京：人民卫生出版社，2007：82-85.

【作者简介】

高睿，男，1983年出生，主管药师，研究方向为化学药品质量分析及标准起草工作。

（本稿审读：庞燕军）