血清miR-29c、miR-17 与老年急性脑梗死后血管性认知障碍的相关性

吕康 孔伟丽 付广

急性脑梗死为临床常见的急性危重病，具有高发病率、高致残率和高死亡率等特点，是国内成年人群尤其是老年人群致残和死亡的重要原因［1］。血管性认知障碍（Vascular cognitive impairment，VCI）是脑血管内供血不足和认知功能衰退疾病，是急性脑梗死后常见的严重并发症，患者认知功能障碍病情不一，且部分患者的认知功能损害并未达到影响日常生活的程度，VCI 是可预防且通过干预进行延迟甚至逆转的［2］。因此，早期进行急性脑梗死后VCI 的判断和及时干预有助于指导老年急性脑梗死后VCI 的有效防治。微小RNA参与多种临床疾病的发生发展，其中的miR-29c、miR-17 均被证实在脑缺血神经损伤中具有重要作用，因而可能参与脑缺血患者认知功能障碍的形成和发展［3-4］。为进一步明确miR-29c、miR-17 与急性脑梗死后VCI 的关系，本研究分析了126 例老年急性脑梗死患者的血清miR-29c、miR-17 水平，确定其对患者VCI 发生状况的影响及两者联合检测的老年急性脑梗死后VCI 预测效能，旨在为急性脑梗死后VCI 防治提供实验室依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年1 月至2022 年6 月收治的老年急性脑梗死患者126 例为研究对象，根据VCI 评估结果将患者分为VCI 组（n=87）和非VCI 组（n=39）。纳入标准：①符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的诊断标准［5］，经头颅CT 或MRI 检查；②VCI 组符合《2016 中国血管性认知障碍诊疗指导规范》诊断标准［6］，蒙特利尔认知评估量表（Montreal Cognitive Assessment MOCA，MoCA）评分［7］＜26分且Hachinski 缺血指数量表（Hachinski Ischemia Index Scale，HIS）评分［8］＞7 分；③发病14d 内进行研究指标检查；④60 岁～80 岁；⑤在患者病情平稳和意识清晰情况下进行量表评价；⑥检查完善其资料齐全。排除标准：①存在明显视听障碍或语言障碍者；②合并颅内占位病变、帕金森病、老年痴呆等可能影响认知功能疾病者；③合并严重心脏或肝肾疾病者；④合并严重脑外伤者；⑤合并一氧化碳中毒者；⑥合并酒依赖者；⑦合并严重精神疾病者。本研究所有患者家属均鉴属知情同意书。并经伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 一般资料

收集比较两组的性别、年龄、吸烟、饮酒、既往脑梗死病史、梗死部位等基本资料。

1.2.2 量表评估

MoCA 量表：包括注意与集中、执行功能、记忆等11 个项目，总分为30 分，其中≥26 分为认知功能正常。HIS 量表：包括急性起病、阶梯性恶化、波动性病程等13 个项目，每个项目分是1 分或2 分和否（0 分）两个选项，总分分值范围0～18 分，小于4 分为变性病性痴呆Alzheimer 等，4～7 分为混合性痴呆，大于7 分为血管性痴呆。

1.2.3 实验室方法

采用实时荧光定量聚合链式反应（Real-time fluorescence quantitative polymerization chain reaction，qRT-PCR）法检测两组血清miR-29c、miR-17水平，两组发病14 d 内均取空腹静脉血3 mL，以5 000 r/min 转速、3 cm 半径离心10 min 分离血清并在-20℃冰箱冷藏待测。取待检测血清样本0.1 mL，经Trizol 试剂盒常规进行RNA 提取，逆转录形成cDNA，采用定量PCR 仪进行miR-29c、miR-17 扩增，以U6 为内参。引物序列如下：miR-29c 上游引物5′-CCAGCGTGTAGCACCATTT-3′，下游引物5′-AGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-17 上游引物5′-GCAGGAAAAAAGAGAACATCACC-3′，下游引物5′-TGGCTTCCCGAGGCAG-3′；U6 上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。采用10 μL反应体系，包括5 μL 的Script SYBR Green Mix、0.5 μL 的10 μmol/L 上游引物、0.5 μL 的10 μmol/L 下游引物、1 μL 的50 ng/μL cDNA 及3.0 μL 的双蒸水。反应条件为95℃预变性30 s、95℃变性10 s、60℃退火35 s、72℃延伸30 s，共40 个循环。通过2-ΔΔCt法进行miR-29c、miR-17 相对表达量分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21 软件进行数据统计分析。计数资料以n（%）表示，行χ2检验；计量资料均符合正态分布，以（）表示，用t检验。采用Logistics 回归模型分析血清miR-29c、miR-17 水平对老年急性脑梗死后VCI 的影响；采用Pearson 相关法进行线性相关分析；采用ROC 曲线分析血清miR-29c、miR-17 水平联合检测的老年急性脑梗死后VCI 评估价值。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基本资料和血清miR-29c、miR-17水平比较

VCI 组血清miR-29c、年龄、饮酒率和既往脑梗死合并率均高于非VCI 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；血清miR-17 水平则低于非VCI 组，差异有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 两组基本资料和血清miR-29c、miR-17 水平比较［n（%），（）］Table 1 Comparison of basic data and serum miR-29c and miR-17 levels between the two groups［n（%），（）］

表1 两组基本资料和血清miR-29c、miR-17 水平比较［n（%），（）］Table 1 Comparison of basic data and serum miR-29c and miR-17 levels between the two groups［n（%），（）］

2.2 老年急性脑梗后VCI 的影响因素分析

采用Logistics 回归模型进行分析，非VCI 赋值1，VCI 赋值2，纳入表1 差异有统计学意义变量进行分析，结果显示，血清miR-29c、miR-17 水平均为老年急性脑梗后VCI 的影响因素（P＜0.05）。见表2。

表2 老年急性脑梗后VCI 的影响因素分析Table 2 Analysis of influencing factors of VCI after acute cerebral infarction in the elderly

2.3 老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其VCI 病情的关系

Pearson 相关分析显示，老年急性脑梗死患者血清miR-29c 与其MoCA 评分呈负相关（r=-0.859，P＜0.05），与其Hachinski 评分则呈正相关（r=0.904，P＜0.05）。患者血清miR-17 水平与其MoCA 评分呈正相关（r=0.893，P＜0.05），与其Hachinski 评分则呈负相关（r=-0.866，P＜0.05）。

2.4 血清miR-29c、miR-17 水平对老年急性脑梗死后VCI 的预测效能

ROC 曲线分析显示，血清miR-29c、miR-17 水平对老年急性脑梗死后VCI 均具有显著的预测价值，其中两者联合检测的老年急性脑梗死后VCI预测效能更高。见表3 和图1。

图1 ROC 曲线Figure 1 The ROC curve

表3 血清miR-29c、miR-17 水平对老年急性脑梗死后VCI的预测效能Table 3 The predictive capacity of serum miR-29c and miR-17 levels on VCI after acute cerebral infarction in the elderly

3 讨论

急性脑梗死是多年来临床上非常重视的脑血管疾病，但多数研究关注的是其造成的躯体功能障碍恢复以及死亡率的降低方面，关于其相关认知功能障碍未予以足够的重视，导致患者认知情感方面恢复不理想［9］。VCI 是脑血管病引发的认知损害，患者出现执行功能损害为主的神经心理学改变，其早起症状较为轻微可不明显影响患者生活，容易被忽视，部分患者可进一步发展为痴呆，且可能增加患者的住院率和死亡率［10-11］。对急性脑梗死后VCI 需予以重视。本研究的126 例老年急性脑梗死患者中，约70%的患者均存在不同程度的VCI，老年急性脑梗死后VCI 发生率较高，可严重危害患者身心健康，因此对老年急性脑梗死后VCI 进行防治具有重要意义。

VCI 的发生涉及多个病理生理过程及其相关因子。微小RNA 是含22～24 个核苷酸的内源性保守非编码RNA，通过与靶基因特异性结合影响关键蛋白的合成从而调控细胞的增殖、分化、凋亡等，从而参与脑血管病等多种疾病过程［12］。miR-29c是在神经系统高度表达的微小RNA，参与脑损伤等多种神经系统疾病发生发展，与VCI、阿尔茨海默病均具有一定的关系［3，13］。因此，miR-29c 亦可能参与VCI 发生发展，可能用于老年急性脑梗死后VCI 早期评估，为探讨这一推论，本研究结果提示血清miR-29c 可能参与老年急性脑梗死及其VCI 过程，进一步Logistics 回归模型证实了血清miR-29c 是老年急性脑梗死后VCI 发生的危险因素，而ROC 曲线确定了血清miR-29c 在老年急性脑梗死后VCI 早期预测价值较高，可能作为老年急性脑梗死后VCI 早期预测参考指标。

miR-17 是重要的生物学因子，可促进细胞增殖、减少细胞凋亡、诱导血管生成，且参与机体免疫代谢过程［14］。其中的miR-17-92 簇可在生理和病理条件下进行神经发生调控和促进血管生成，从而进行神经血管的修复［15］。因此，miR-17 在VCI 和血管性痴呆中均具有重要作用，其水平的降低与VCI 和血管性痴呆发生发展密切相关。本研究中亦检测了老年急性脑梗死患者的血清miR-17水平呈现高表达，其原因可能是急性脑梗死患者出现血管狭窄闭塞神经细胞凋亡，而miR-17 通过进行神经血管修复途径促进患者恢复。相对于无VCI 发生的患者，老年急性脑梗死后VCI 患者具有更低水平的血清miR-17，提示血清miR-17 降低可能与患者VCI 发生密切相关，进一步的Logistics 回归模型证实了血清miR-17 水平是老年急性脑梗死后VCI 的保护因素，而ROC 曲线分析确定了其在老年急性脑梗死后VCI 早期预测中具有一定的价值，可能作为老年急性脑梗死后VCI 早期预测参考指标，且血清miR-29c、miR-17 水平联合检测的老年急性脑梗死后VCI 早期预测效能更佳。本研结果发现老年急性脑梗死患者血清miR-29c、miR-17水平与其MoCA 评分和Hachinski 评分均密切相关，因此，血清miR-29c、miR-17 水平的联合检测可能用于老年急性脑梗死后VCI 早期判断和病情评估，指导老年急性脑梗死后VCI 的有效防治。

综上所述，miR-29c 在老年急性脑梗死患者的表达上调而其miR-17 表达下调，miR-29c、miR-17 与老年急性脑梗死后VCI 的发生风险和严重程度密切相关，两者联合检测可早期进行老年急性脑梗死后VCI发生风险和病情评估，指导其早期有效干预。