高效液相色谱法测定烧烤食品中苯并芘含量

2023-07-09李秋雨

食品安全导刊 2023年15期

李秋雨

（贵州检测技术研究应用中心，贵州贵阳 550014）

年轻人越来越喜欢烧烤食品，烧烤味道浓郁、种类繁多、物美价廉。在高温加热过程中，食品会产生丙烯酰胺，温度越高，就会产生越多的致癌物质[1]。动物实验证明，丙烯酰胺对动物有致癌作用，但对人体是否有害目前还没有定论。烧烤食品在熏烤中各种脂肪、蛋白质、糖类的降解及其产物之间发生了复杂的化学反应，产生了特殊的味道，形成一种比丙烯酰胺致癌性更强的物质——苯并芘[2]。《食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016）中采用液相色谱法测定苯并（a）芘，烧烤食品成分复杂，苯并（a）芘的加标回收率低，结果难以重现，因此本文创建了一种可有效快速检测烧烤食品中苯并（a）芘含量的方法[3-5]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

烧烤肉制品，市售；正己烷、二氯甲烷，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；乙腈（色谱纯），上海安谱实验科技股份有限公司；苯并芘标准品（100 mg·L-1），上海安谱实验科技股份有限公司；固相萃取仪，美国安捷伦科技有限公司；柱子（Bap分子印迹小柱，500 mg/6 mL），上海月旭科技公司；微孔滤膜（0.22 μm），上海月旭科技公司。

1.2 仪器与设备

SQP-Secura225D-1CN 型电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SH250HP 型超声机，上海科导超声仪器有限公司；Agilent 1260 Infinity II 高效液相色谱仪、B100250 型多管涡旋混合器，上海月旭科技公司；Auto EVA-30Plus 型平行浓缩仪，睿科集团股份有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制

配制1.0 μg·mL-1苯并芘标准中间液，吸取0.1 mL 的苯并芘标准品（100 mg·L-1），用乙腈定容至10 mL，避光保存，保存期1 个月。配制苯并芘标准工作液，分别吸取1.0 μg·mL-1的苯并芘标准中间液0.005 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.500 mL，用乙腈定容至10 mL，得到0.5 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1和50.0 ng·mL-1的标准曲线溶液，现用现配[6]。

1.3.2 苯并（a）芘含量的测定

称取1 g（精准至0.001 g）已打碎均匀的烧烤食品于15 mL 离心管中，加入6 mL 正己烷，40 ℃下超声提取15 min，待净化。依次用5 mL 二氯甲烷、5 mL正己烷活化苯并芘专用小柱（BAP），加入待净化液，再将2 mL 正己烷加入样品中，涡旋1 min，将上清液加入BAP 柱子中，用5 mL 正己烷淋洗BAP 柱子，弃去所有废液，然后加入6 mL 二氯甲烷洗脱，收集洗脱液到15 mL 试管中，将洗脱液在45 ℃氮气下氮吹至近干。准确吸取1 mL 乙腈涡旋1 min，过0.22 μm微孔滤膜到进样瓶中待测[7-8]。

1.3.3 仪器条件和参数

色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 mm）；柱温：35 ℃；流动相：乙腈加水=80+20；荧光检测器：激发波长为384 nm，发射波长为406 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL[6]。

1.3.4 回收率与精密度实验

用烧烤肉制品作为实验样品，称取样品1 g，平行称6 组，加入1.0 μg·mL-1的苯并(a)芘标准溶液10 μL、15 μL、20 μL，再加入5 mL 正己烷溶液，超声15 min。分别用5 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化苯并芘专用小柱（BAP），倒入待净化液，将2 mL 正己烷加入样品中，涡旋1 min，投入BAP 柱子，弃去全部液体，用5 mL 正己烷溶液淋洗，加入6 mL 二氯甲烷洗脱，收集洗脱液，再抽干，45 ℃氮吹至近干。用1 mL 乙腈定容，过膜上机，根据上机结果计算样品回收率和精密度[9-10]。

1.3.5 仪器重复性测试

取浓度为5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1、20.00 ng·mL-1的标准溶液分别进样测试6 次，计算相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）。

2 结果与分析

2.1 色谱条件分析

研究乙腈加水为95+5、85+15、80+20 时的分离效果，当乙腈加水为80+20 时，苯并芘的峰和样品基质有很好的分离效果，且色谱峰峰形好，成正态分布，苯并芘的出峰时间为8.537 min。在不同流动相的不同比例下，苯并芘的出峰色谱图见图1。

图1 苯并芘的出峰色谱图

2.2 样品前处理方法分析

2.2.1 提取时间的选择

选择了超声5 min、10 min、15 min 提取，按照1.3.2 对样品进行处理，通过加标回收选择提取时间，结果见表1。加标回收率提取15 min ＞提取10 min＞提取5 min，因此选择提取15 min。

表1 不同提取时间提取苯并芘的回收率

2.2.2 定容试剂的选择

选择乙腈、乙腈加水（80+20）、甲醇3 种定容试剂定容，按照1.3.2 对样品进行前处理，通过加标回收这3 种定容试剂，结果见表2。加标回收率乙腈＞乙腈+水（80+20）＞甲醇，因此选择乙腈作为定容试剂。

表2 不同定容试剂中苯并芘的回收率

2.3 线性关系、检出限及定量限

将配制好的苯并芘标准溶液进行色谱分析，根据预先设置好的色谱条件上机测定，得到不同浓度点下的色谱图。根据图2，得到苯并芘标准溶液的浓度X与峰面积Y之间的关系。结果显示，苯并芘在10 min 内就可以完成检测，且在0.5 ～50.0 ng·mL-1的标准浓度范围内存在良好的线性关系，线性方程为y=185 480x-8 160.65，相关系数为0.999 9，信噪比S/N=3、S/N=10，苯并芘的检出限为0.2 μg·kg-1，定量限为0.5 μg·kg-1[11]。