三参养胃胶囊质量标准及初步稳定性考察

2023-06-27张明赵贤媚张育勤金伟华易荣浦志强刘林森阮美凤于波涛

中国民族民间医药·上半月 2023年3期

张明赵贤媚张育勤金伟华易荣浦志强刘林森阮美凤于波涛

【摘要】

目的：考察三参养胃胶囊质量可控制指标，并对初步稳定性进行研究。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中丹参、延胡索、甘草、柴胡进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中芍药苷进行含量测定。结果：TLC斑点清晰、分离度好、专属性强；芍药苷进样浓度16.30～163.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.999），平均回收率为99.38%，RSD=1.18%（n=9）。三参养胃胶囊2年内稳定可靠。结论：本方法简单、易行，适用于三参养胃胶囊的质量控制，有效期暂定为2年。

【关键词】

三参养胃胶囊；质量控制；初步稳定性；芍药苷；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2023）05-0032-06

Quality Standard of Sanshenyangwei Capsules and Study on Its Stability

ZHANG Ming1 ZHAO Xianmei1 ZHANG Yuqin1 JIN Weihua1 YI Rong1

PU Zhiqiang1 LIU Linsen1 RUAN Meifeng2 YU Botao1*

1.Department of Pharmacy， The General Hospital of Western Theater Command PLA， Chengdu 610083，China；

2.North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，China

Abstract：

Objective To establish the quality standard of Sanshenyangwei capsules and to investigate its stability so as to determ its validity duration. Method TLC method was applied to the identification of Salvia miltiorrhiza、Corydalis yanhusuo、Glycyrrhiza uralensis Fisch and Bupleuri Radix .HPLC method was adopted to determine the contents of Paeoniflorin. Result TLC spots were clear， well-separated and spectific. The linear range of Paeoniflorin was 16.30-163.00μg/mL （r=0.999）with an average recovery of 99.38%，RSD=1.18%（n=9）.The validity duration of Sanshenyangwei Capsules was tentatively set as 2 years. Conclusion The established method is simple and feasible，and it can be used to the quality control Sanshenyangwei capsules.

Keywords：

Sanshenyangwei Capsules；Quality Standard；Stability；Paeoniflorin；HPLC

三參养胃胶囊为西部战区总医院临床经验方，早期被制成胃病康颗粒剂在临床使用多年，其功效补中益气，活血化瘀，滋养胃阴，临床用于慢性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃及十二指肠溃疡等［1］，患者反映疗效准确、携带方便，但因该颗粒剂中含原生药粉，患者服用时口感不佳，难以下咽。笔者参照2020年中国药典要求，结合该方药材理化性质，将其首次制成胶囊剂，同时参考胃病康颗粒剂近年来质控提高［2］，建立该胶囊质量标准，并初步考察其稳定性。

1 仪器与材料

1.1 仪器高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1200 series）；AL-204分析天平（梅特勒-托利多仪器上海市有限公司）；HU-3120B型超声波清洗器（功率240 W，频率40KHZ，天津市恒奥科技发展有限公司）；HH-824S型恒温水浴锅（上海君竺仪器制造有限公司）；101-2B型电热鼓风干燥箱（上海市实验仪器总厂）；ZF-20D型三用紫外灯（上海市安亭电子仪器厂）；薄层色谱硅胶预制板（青岛海浪硅胶干燥剂厂）；ZB-1D型崩解时限检查仪（天津天光光学仪器厂）。

1.2 材料三参养胃胶囊由西部战区总医院药剂科制剂中心提供（批号依次：191009、191010、191011）；延胡索对照药材（批号：181215）、丹参对照药材（批号181120）；甘草对照药材（批号180509）、芦丁对照品（批号：181201）、芍药苷（批号：181010）对照药品均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈、正丁醇、三氯甲烷为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别［3］

2.1.1 丹参的TLC鉴别取本品2g，研细，加入乙醇25mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，加入乙醇5mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（2020版《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。结果如图1所示。

2.1.2 延胡索的TLC鉴别取本品5mL，加三氯甲烷20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材0.5 g，加三氯甲烷10mL，同法制成1mL对照药材溶液。取除延胡索的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照TLC法试验，吸取上述4种溶液适量，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果如图2所示。

2.1.3 甘草的TLC鉴别取本品2 g，研细，加入三氯甲烷50mL，加热回流1 h，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水10mL 搅拌湿润，加水饱和正丁醇100mL，超声处理30 min，滤过，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1 g，加入三氯甲烷20mL，同法制成1mL对照药材溶液。取除甘草的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法［2020版《中国药典》四部通则0502］试验，吸取上述溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（ 15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。结果如图3所示。

2.1.4 柴胡的TLC鉴别取本品10g，研细，加入甲醇30mL，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1mL含4 mg的溶液，作为对照品溶液。取除柴胡的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2020版《中国药典》四部通则0502）试验，吸取上述溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热30 min挥干乙醇后，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果如图4所示。

2.2 芍药苷含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成163 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备随机选取样品，混合并研碎，选约0.1 g，精密称重，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率240 W，频率40 kHz）20 min，放冷，补足并称定重量，摇匀，离心，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方量取除白芍外的其余药材，按制剂工艺及“2.2.2”方法制成阴性样品溶液。

2.2.4 色谱条件色谱柱：Agilent C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）∶0.12%磷酸（B）（15∶85）；检测波长：230 nm；体积流量：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10 μL。理论塔板数不低于3000，分离度不低于1.5。色谱图如图5所示。

2.2.5 标准曲线的制备精密量取“2.2.1”项下不同体积对照品溶液，添加甲醇定容，得到芍药苷浓度为163.00μg/mL、130.4.00μg/mL、97.8.00μg/mL、65.200μg/mL、32.60μg/mL、16.30μg/mL的对照品溶液，依次进样分析，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=11.19X+24.27，r=0.9999。数据显示，芍药苷在16.30～163.00μg/mL浓度范围内有良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验［4］精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液10 μL，重复进样6次，测得峰面积，峰面积RSD为0.94％，结果表示仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验［5］取同一批号样品适量，共6份，分别按“2.2.2”方法平行制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量。结果，芍药苷含量的RSD为1.25％。结果表示此法可重复性佳。

2.2.8 稳定性试验［6］取同一批号供试品溶液适量，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样10 μL，测定峰面积，RSD为1.06％（n=6），表明供试品溶液（避光）至少在24 h内稳定。

2.2.9 加樣回收率［7］取已知含量样品（批号：191009）适量，共9份，每份约0.05 g，再分别加入芍药苷0.5mL、0.5mL、0.5mL、1mL、1mL、1mL、2mL、2mL、2mL，按“2.2.2”方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，并计算加样回收率。结果见表1。

2.2.10 样品测定取供试品3批，精密称取样品适量，按照按“2.2.2”方法，按上述色谱条件测定。结果见表2。

3 稳定性考察

3.1 样品包装及考察条件取样品（批号：191009）以临床试验用包装（包装材料—铝塑的质地与结构相当于上市药品包装）于室温下放置，连续考察12个月。

3.2 考察项目及方法依据按2020年版中国药典中胶囊剂稳定性重点考察项目［7］操作，包括性状、含量、水分、崩解时限、装量。

3.3 影响因素试验

3.3.1 高温试验取样品（批号：191009）适量，除去外包装，置适宜的开口容器中，于60℃放置10 d，分别于0 d、5 d、10 d时取样，按“3.2”项下要求检测。结果见表3。

3.3.2 高湿试验取样品适量，置恒湿密闭容器中，在25℃相对湿度为90%±5%条件下放置10 d，分别于0 d、5 d、10 d时取样，按“3.2”项下要求检测。结果见表3。

3.3.3 强光照试验取样品（批号191009）开口，于照度为（4500±500）lX条件下放置10 d，分别于0 d、5 d、10 d时取样，按“3.2”项下要求检测。结果见表3。

3.4 加速试验取样品（批号191009）适量，按上市包装，于温度（40±2）℃、相对湿度75%±5%的条件下放置6个月，分别于第0个月、1个月、2个月、3个月、6个月末取样1次，按3.2项要求检测。结果见表4。

3.5 长期试验取样品（批号191009）适量，按上市包装，于温度（25±2）℃、相对湿度为60%±5%的条件下放置24个月，分别于第0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月末取样1次，按3.2项要求检测。结果见表5。

3.6 考察结论三参养胃胶囊样品为期24个月的质量考察结果表明，该品种在24个月内质量稳定，所以本品有效期定为2年。

4 讨论

本制剂由党参、当归、丹参、延胡索等中药制成颗粒剂型，在临床应用多年，疗效确切，因该制剂有原生药粉直接入药，患者服用过程中口感欠佳，且携带、储存皆有不便。笔者将三参养胃颗粒剂改为三参养胃胶囊剂，同时增加TLC、HPLC检验，并初步考察了稳定性。方中白芍具有抗炎镇痛、抗血栓、降血脂、改善心肌肥厚、保肝作用［8-12］；丹参具有养血安神、活血化瘀、凉血消肿等功效［13］，在保护血管内皮细胞、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、促进微循环等方面发挥药理作用［14-16］。

4.1 丹参TLC鉴别本实验复核人员重复试验时，发现斑点颜色不稳定，试验重现性不理想。分析原因为丹参酮ⅡA性质较不稳定，随着展开后薄层板放置时间的延长，斑点颜色逐渐变淡，通过增加点样量至8 μL，室温点板，薄层板取出晾干后立即检视，并覆盖保鲜膜，结果斑点清晰明确。

4.2 延胡索TLC鉴别试验中，发现延胡索分离效果不佳，薄层板中上对照品与样品的蓝色和黄色荧光斑点互有干扰，通过加长薄层板长度，减少点样量，提取残渣用无水乙醇溶解后，各斑点面积均变小，干扰的两斑点完全分离。

4.3 甘草的TLC鉴别试验中，发现甘草斑点易出现拖尾和背景干扰，不同的试验人员操作后，重现性差，分析原因发现，在进行“105℃加热至斑点显色清晰”步骤时，复核试验人员未对烘烤时间精确把控，烘烤时间不够时斑点未能显色完全，烘烤时间过多时，薄板易出现黄黑色杂质干扰显色斑点。经过笔者多次验证，严格将电烤箱温度维持在（105±1）℃时将样板放入35min后取出观察，显色斑点清晰，分离度好，未出现背景干扰。本文精密度、重复性、稳定性、回收率均符合要求，可用于三参养胃胶囊的质量控制，初定本品每胶囊（0.25 g）含芍药苷不得少于5.09 mg。

4.4 药物稳定性药物稳定性涉及多方面影响，笔者所处医院为我国西南地区，阴冷、潮湿天气较为多见，原颗粒剂由于含原生药粉，成品除菌、存储方面存在诸多难点。依照2020版药典要求，按照中药胶囊剂要求，设计质量测定方法、着重考察稳定性方案。根据影响因素试验、加速试验、长期试验考察结果分析可知，该制剂性状、鉴别、含量、水分、装量等各个考察指标在有效期内均检测合格。

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