生脉金刺梨饮对慢性疲劳综合征小鼠的影响

齐庆文 陈大琳 郝家翔 曾庆赟 徐林跃 刘杨 曹峰

【摘 要】

目的：通過小鼠体内实验，观察生脉金刺梨饮及金刺梨缓解慢性疲劳综合征小鼠的作用效果。方法：通过剥夺睡眠、负重游泳的方法建立慢性疲劳综合征小鼠模型。将50只已成功建立CFS模型的雄性KM小鼠随机分成模型组、生脉金刺梨饮高浓度组、生脉金刺梨饮中浓度组、生脉金刺梨饮低浓度组、金刺梨组，以10只未造模小鼠为空白对照组，然后持续灌胃15 d。观测小鼠体重变动以及自主活动的程度变化，并检测肝糖原、血乳酸和血尿素氮水平。结果：与空白组相比，造模各组小鼠体重、活动次数、站立次数显著降低（P<0.05）；与模型组相比，生脉金刺梨饮高、中剂量组全血乳酸含量显著降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组相比，生脉金刺梨饮高、中、低剂量组尿素氮含量均明显低于模型组（P<0.01，P<0.01，P<0.05）；金刺梨组肝糖原含量显著高于模型组（P<0.05）。结论：生脉金刺梨饮可以提高小鼠活动能力，通过降低血乳酸、血尿素氮含量，缓解小鼠慢性疲劳；金刺梨具有增加慢性疲劳综合征小鼠肝糖原储备的功效。

【关键词】

慢性疲劳综合征；生脉金刺梨饮；金刺梨；缓解疲劳

【中图分类号】R285.5   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）05-0019-04

Effects of Shengmai Jincili Yin on Chronic Fatigue Syndrome Mice

QI Qingwen CHEN Dalin HAO Jiaxiang ZENG Qingyun XU Linyue LIU Yang CAO Feng*

Guizhou University of Chinese Medicine，Guiyang 550025，China

Abstract：

Objective To observe the effects of ShengMaiJinCiLiYin on relieving chronic fatigue syndrome on mice through in vivo experiments. Methods A mouse model of chronic fatigue syndrome was established by wake-up therapy and weight-loaded swimming test. 50 male KM mice that had successfully established the CFS model were randomly divided into 5groups，namely， the model group， the high concentration group on ShengMaiJinCiLiYin，the medium concentration group on ShengMaiJinCiLiYin， the low concentration group on Shengmai Jincili Yin， and the group on rosa sterilis var. leioclada. 10 mice that had not established the model were used as a blank control group with continuous intragastric administration for 15 days. Results Compared with the blank control group， the weight， times of activities and standing were significantly lower in the mice model groups （P<0.05）; compared with the model group， the content of lactic acid in whole blood specimens was significantly lower in the high and medium dose groups on Shengmai Jincili Yin（P<0.05，P<0.01）; the content of blood urea nitrogen was significantly lower in the high， medium and low dose groups onShengmai Jincili Yin（P<0.01，P<0.01，P<0.05）; the content of hepatic glycogen in the group on rosa sterilis var. leioclada was significantly higher than that in the model group （P<0.05）. Conclusion Shengmai Jincili Yincan improve the activity of mice and relieve chronic fatigue by reducing the content of blood lactic acid and blood urea nitrogen; rosa sterilis var. leioclada has the effect of increasing the reserve of liver glycogen on mice with chronic fatigue syndrome.

Keywords：

CFS；Shengmai Jincili Yin；Rosa Sterilis；Relieve Fatigue

1988年美国疾病控制中心（CDC）首次提出慢性疲劳综合征（chronic fatigue syndrome，CFS）。CFS是在长期生活节奏加快、压力不断增加的社会生活下逐渐形成的以疲劳、无力、低热甚至关节疼痛，并伴有认知能力下降等身心疲劳为主要表现的临床综合征［1-2］。CFS在中医学中属于“虚劳”范畴，以肢体倦怠、少气懒言、面色苍白或萎黄、心虚惊悸、食欲减退等气血亏虚、脏腑功能不足之症为多见［3-4］。

无籽刺梨（Rosa sterilis）又名金刺梨，具有健脾开胃、养阴生津等功效。据研究［5］证实，其中富含 VC、VB2、SOD，以及多酚、黄酮、角鲨烯、甾醇、羽扁豆醇等活性物质，可以有效调整机体免疫、延缓衰老、抑制肿瘤、抗疟疾等。由人参、麦冬、五味子组成的生脉散是自金元起便广为流传和应用的良方佳剂，对气阴两虚相关病症疗效极佳；《医学启源》言其有“生津益气，敛阴止汗”的效用。金刺梨是性味酸甘的新型保健水果，生脉金刺梨饮使用金刺梨代替生脉饮中不属于药食同源目录药品的五味子，使其既保留生脉饮益气养阴的功效，也兼具酸敛之功，同时符合食品的要求。

本研究将无籽刺梨和中医方剂相结合，从小鼠活动情况、血乳酸堆积、肝糖原含量及尿素氮4个方面综合评价生脉金刺梨饮对小鼠抗疲劳的作用。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 60只雄性SPF级KM小鼠，4～6周龄，体重（25±2）g，购自重庆解放军第三军医大学实验动物中心，许可证号为SCXK （军） 2012-0011。

1.1.2 实验药品 无籽刺梨原液（批号：TC 0001S，贵州天赐贵宝有限公司）；人参9 g（批号：170401）、麦冬9 g（批号：170401），均购自北京同仁堂集团有限公司；煎煮两药前预先浸泡35min，再大火煮沸继用小火煎煮35min，反复两次后合并药液，经过滤并浓缩为1 mL药液含生药1 g，置于4℃冰箱中备用。

1.1.3 实验仪器与试剂 Thermo Fisher Multiskan FC 酶标仪（美国Thermo公司）、ZZ-6 小鼠自主活动仪（成都泰盟科技有限公司）、HH-4数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）、离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），乳酸（LD）试剂盒（批号：20170703）、肝糖原测试盒（批号：20170622）和尿素氮（BUN）测试盒（批号：20170525）均从南京建成生物工程研究所购买。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 造模前将小鼠置于适宜的温度、湿度条件下喂养1周，使之适应实验环境，观察其状态稳定后采用随机数字分组法将小鼠分为6组，分别命名为空白对照组、CFS模型组及生脉金刺梨饮高、中、低浓度组和金刺梨组。

1.2.2 动物模型 建立模型组，生脉金刺梨饮高、中、低浓度组，金刺梨原汁组采用力竭游泳和剥夺睡眠法，隔天交替进行建立CFS小鼠模型。单日进行力竭游泳：以小鼠体重4%的铅皮对小鼠负重，并置于温度为（15±3）℃、水深15 cm的游泳箱中做自由游动训练，直至小鼠鼻部浸水10 s不能抬起，视为达到力竭标准；双日进行剥夺睡眠：每晚9点将小鼠放入水深2～3 cm（约身高五分之二）、水温（15±3）℃的无垫料鼠笼中，至次日早晨7点，使其不能入睡，并隔日进行；在4周内完成CFS小鼠模型的建立。在造模开始前和完成后分别称测小鼠体重，并用小鼠自主活动仪测量其行为活动情况。

1.2.3 给药方法和取材 CFS小鼠模型建立后，以小鼠与人体表面积折算小鼠的等效用药量，设置用药比为1∶2∶4的低、中、高浓度组，给予每组小鼠相同剂量（0.3 mL）不同浓度的水煎液，按照预设浓度將浓缩的水煎液分别稀释，并与金刺梨原汁等体积混合；金刺梨组用生理盐水与金刺梨原汁等体积混合；空白组则给与等体积生理盐水；生脉金刺梨饮低浓度组每日给予浓度为50 mg/20 g的水煎液灌胃；生脉金刺梨饮中浓度组每日给予浓度为100 mg/20 g的水煎液灌胃；生脉金刺梨饮高浓度组每日给予浓度为200 mg/20 g的水煎液灌胃。连续灌胃15 d。给药结束后采用麻醉剂4%的戊巴比妥钠腹腔注射，成功麻醉后摘取眼球取血1～2 mL用于血乳酸和血尿素氮的测定。取血后打开胸腔取出各组小鼠肝脏用于肝糖原含量测定。

1.3 统计学分析 使用IBM的SPSS 26.0软件包实现数据处理和分析。计量资料以平均数加减标准误（x-±s）表示，假设检验采用t检验和单因素方差分析（One-Way ANOVA），以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 造模前后小鼠体重变化 造模前各组小鼠体质量均无统计学差异；造模4周后，5个造模组小鼠体质量均明显低于空白组（P<0.05）。详见表1。

2.2 小鼠活动情况的变化 造模结束后，各造模组小鼠活动次数与站立次数均显著低于空白组（P<0.05）；各组小鼠活动次数与站立次数，生脉金刺梨饮高浓度组小鼠活动次数显著高于模型组（P<0.05）。详见表2。

2.3 小鼠肝糖原测量结果 与模型组相比，金刺梨组肝糖原含量显著高于模型组（P<0.05），与空白组相比（P>0.05）；与模型组相比，生脉金刺梨饮高、中、低剂量组肝糖原变化无统计学意义。详见表3。

2.4 小鼠血乳酸测量结果 与模型组相比，生脉金刺梨饮高、中剂量组全血乳酸含量显著低于模型组（P<0.05，P<0.01）。详见表3。

2.5 小鼠尿素氮测量结果 生脉金刺梨饮高、中、低剂量组尿素氮含量均明显低于模型组（P<0.01，P<0.01，P<0.05）。详见表3。

3 讨论

CFS是以慢性持续性的体力与精神极度疲劳反復数月至半年以上为主要特点的症候群。其病因复杂多样，常见因素有过度劳累、生活压力、精神刺激、睡眠障碍等，因此造模方法也十分综合，常用方式有睡眠剥夺法、游泳负重法、慢性束缚法、夹尾应激法、免疫诱导法等。其中负重游泳可以诱导小鼠疲劳，引发小鼠绝望情绪；剥夺睡眠可以诱导小鼠抑郁、焦虑、愤怒等负面情绪［6］。本实验通过负重游泳和剥夺睡眠的方法造模后，小鼠体重、活动次数、站立次数显著低于空白组（P<0.05），提示小鼠造模成功。在实验中，造模成功的小鼠经过给药后，生脉金刺梨饮高浓度组活动次数显著高于模型组（P<0.05），提示生脉金刺梨饮可以缓解小鼠的慢性疲劳，但可能存在浓度依赖关系。

乳酸是细胞经无氧呼吸代谢葡萄糖的产物，乳酸含量的升高致使机体PH下降，降低其能量代谢水平，导致疲劳和运动能力的下降，乳酸浓度可以较为敏感地反应机体疲劳程度，常被用作评估机体疲劳的高效指标［7］。在实验中，生脉金刺梨饮高、中浓度组血乳酸浓度明显低于模型组，提示生脉金刺梨饮可以通过清除血液中乳酸含量，提高机体的抗疲劳能力。乳酸脱氢酶（LDH）是乳酸代谢过程中的重要活性物质，可以加速乳酸和丙酮酸的代谢，增加糖酵解过程中的ATP生成和乳酸清除。因此推测生脉金刺梨饮能够增加LDH的活性，从而达到缓解慢性疲劳的功效。肝糖原为机体内糖储备的主要形式之一，肝糖原能够维持疲劳状态时的血糖稳定，可长时间为机体供能，缓解疲劳，常作为检测药品食品抗疲劳作用的重要指标［8］。在本实验中，金刺梨组肝糖原含量显著高于模型组，达到与空白组肝糖原相近的水平，提示金刺梨可以通过增加肝糖原储备，提升运动耐力，从而达到缓解疲劳的作用。血液尿素氮主要是蛋白质的代谢物质，疲劳运动时，机体无法利用糖类和脂类的分解得到充足热能时，就会增加对蛋白质和氨基酸的分解代谢，从而导致了血液和组织中氨浓度的增加，通过尿素循环使氨转化为血浆尿素。因此尿素氮含量升高，进而影响肌肉力量，降低运动能力，是评价疲劳程度的常用指标［9-10］。在本实验中，生脉金刺梨饮高、中、低组血尿素氮含量均明显低于模型组，表明生脉金刺梨饮可降低血尿素氮含量，缓解疲劳。

当前西医对CFS的治疗方法以补充维生素、运动认知治疗为主［11］。许多学者希望从中医药中寻找到更好的方法，CFS的中医药研究也逐渐受到关注，但相应的研究成果较少［12］。本研究表明，生脉金刺梨饮能显著增强小鼠活动能力，通过降低血乳酸含量，增加肌肉力量，可加速慢性疲劳综合征小鼠血清尿素氮清除，降低蛋白质和氨基酸的消耗，从而达到缓解小鼠慢性疲劳的作用。此外，金刺梨可以通过增加肝糖原储备而达到缓解小鼠慢性疲劳的作用。且金刺梨增加肝糖原储备的功能优于生脉金刺梨饮，但清除血乳酸和血尿素氮的效果不明显。综上所述，生脉金刺梨饮可以通过减少乳酸堆积、清除血尿素氮而缓解小鼠慢性疲劳，但其更多机制尚需进一步研究探索。金刺梨可以有效增加慢性疲劳综合征小鼠的肝糖原储备，显示出其极佳的功效，有继续研究与开发的价值与意义。

参考文献

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（收稿日期：2022-07-02 编辑：陶希睿）