铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠环核苷酸-内分泌-免疫系统的影响

郭琳琳　刘尧　陈亚文　乐娜　朱映黎　张建军　李振皓　赵晋燕　王林元

摘要 目的：通过建立气阴两虚证小鼠模型，探讨铁皮枫斗颗粒的益气养阴功效与作用机制。方法：将60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、玉屏风颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组，每组10只，连续给药30 d。实验采用单日限制饮食，双日负重力竭游泳运动，结合灌胃左甲状腺素钠片构建小鼠气阴两虚证模型。动态观察小鼠一般状态，测定小鼠体质量、脏器指数、四肢抓力和力竭游泳时间；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定小鼠血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、白细胞介素-6（IL-6）、补体成分3（C3）、皮质醇（CORT）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、促甲状腺激素（TSH）、雌二醇（E2）和睾酮（T）相关指标，采用实时聚合酶链反应（Real-time PCR）观察下丘脑组织中蛋白激酶A（PKA）和cAMP反应元件结合蛋白（CREB）、信使核糖核酸（mRNA）表达水平。结果：与模型组比较，各给药组均可改善小鼠的一般状态，实验第30天，铁皮枫斗颗粒高、中剂量组均可增加小鼠体质量（P<0.01）。铁皮枫斗颗粒高剂量组可以增大小鼠胸腺指数、脾脏指数和四肢抓力，延长负重游泳力竭时间（P<0.05，P<0.01），降低血清cAMP、cAMP/cGMP、T3、E2、E2/T和IL-6水平（P<0.05，P<0.01），升高血清T、C3水平（P<0.01），降低下丘脑组织PKAmRNA表达水平（P<0.01）。铁皮枫斗颗粒中剂量组可以升高血清中TSH水平（P<0.01），低剂量组可以降低下丘脑组织中CREBmRNA的表达水平（P<0.05）。结论：铁皮枫斗颗粒可以改善气阴两虚证小鼠的一般状态，通过调节环核苷酸、内分泌和免疫系统这一网络机制，上调PKA/CREB信号通路，起到益气養阴的功效。

关键词 铁皮枫斗颗粒；气阴两虚证；益气养阴；环核苷酸；内分泌系统；免疫功能；PKA/CREB信号

Effect of Tiepi Fengdou Granules on Cyclic Nucleotide-endocrine System-immune System of Mice with Qi and Yin Deficiency

GUO Linlin1，LIU Yao1，CHEN Yawen1，YUE Na1，ZHU Yingli1，ZHANG Jianjun1，LI Zhenhao2，ZHAO Jinyan3，WANG Linyuan1

（1 Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 Zhejiang Shouxiangu Pharmceutical Co.，Ltd，Wuyi 321200，China; 3 Beijing Institute for Drug Control，NMPA Key Laboratory for Safety Research and Evaluation of Innovative Drugs）

Abstract Objective：To explore the effect and mechanism of Tiepi Fengdou Granules（TPFD） for replenishing qi and nourishing yin by establishing a mouse model of qi and yin deficiency.Methods：A total of 60 male ICR mice were randomly divided into blank group，model group，Yupingfeng Granules group，and TPFD high-，medium-and low-dose groups，with 10 in each group，and were administered for 30 consecutive days.In the experiment，a mouse model of qi and yin deficiency was established by providing the mice time restricted eating on odd days and weight-bearing exhaustive swimming on even days in combination with levothyroxine sodium tablets（ig）.The general state of the mice was dynamically observed，and the body weight，organ index，limb grip strength and exhaustive swimming time were determined.The related indexes of cyclic adenosine monophosphate（cAMP），cyclic guanosine monophosphate（cGMP），interleukin-6（IL-6），complement component 3（C3），cortisol（CORT），adrenocorticotropic hormone（ACTH），corticotropin releasing hormone（CRH），triiodothyronine（T3），thyroxine（T4），thyroid-stimulating hormone（TSH），estradiol（E2） and testosterone（T） in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The mRNA expressions of protein kinase A（PKA） and cyclic-AMP response element binding protein（CREB） in hypothalamus were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）.Results：Compared with the model group，the administration groups had improved general state.On the 30th day of the experiment，the body weight in both TPFD high-and medium-dose groups was increased（P<0.01）.High-dose TPFD increased the thymus index，spleen index and limb grip strength of the mice，prolonged the exhaustive swimming time（P<0.05，P<0.01），reduced the serum levels of cAMP，cAMP/cGMP，T3，E2，E2/T and IL-6（P<0.05，P<0.01） and the mRNA expression of PKA in hypothalamus（P<0.01），and increased the serum levels of T and C3（P<0.01）.TPFD up-regulated the serum level of TSH at a medium dose（P<0.01） while down-regulated the mRNA expression of CREB in hypothalamus at a low dose（P<0.05）.Conclusion：TPFD improves the general state of mice with qi and yin deficiency.It up-regulates the PKA/CREB signaling pathway by regulating the cyclic nucleotide-endocrine system-immune system network，to exert the effect of replenishing qi and nourishing yin.

Keywords Tiepi Fengdou Granules; Syndrome of qi and yin deficiency; Replenishing qi and nourishing yin; Cyclic nucleotide; Endocrine System; Immune function; PKA/CREB signaling pathway

中圖分类号：R289.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.004

增强免疫力保健产品在已批准产品中数量排名第一，其中配方中含有中药的产品约占其总数的2/3［1］，体现了中医药在维护生命健康中的优势。但是其针对的人群仅标注了免疫力低下者，在实际应用中无法根据先天禀赋不同和后天诸多因素造成的个体体质、证候差异进行有针对性应用，一定程度上影响了增强免疫力作用的发挥。因此，需要综合考虑药-方-证之间的作用关系，基于证候探讨产品的中医药功效内涵。

铁皮枫斗颗粒由铁皮石斛、灵芝和西洋参配方而成，方中铁皮石斛为君药，灵芝和西洋参为臣药。铁皮石斛滋阴润肺补虚但性味偏凉，西洋参同为凉性中药，增加性平补益的灵芝，全方既清又补，药性平和，凉而不寒，可滋阴而不抑阳。本研究依据中医药理论“药证相关”“方证相应”原则，借鉴现代药理学研究基础构建气阴两虚证候小鼠模型［2］，通过“以方测证”“证效相关”探讨评价铁皮枫斗颗粒益气养阴增强免疫力作用机制，为中药复方保健产品增加中医药功效和人群适宜证候属性提供实验依据，以期更好地发挥产品的精准保健、个性保健和辨证保健的优势。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康美国癌症研究所（Institute of Cancer Research，ICR）雄性4～6周龄小鼠60只，体质量18～22 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK（京）2016-0006，饲养于北京中医药大学北京中医药研究院动物实验室，无特定病原体（Specific Pathogen Free，SPF）级，自由饮水，以标准普通饲料喂食。实验经过北京中医药大学医学与实验动物伦理委员会审查批准（伦理审查号：BUCM-4-2021052405-2040）。

1.1.2 药物 铁皮枫斗颗粒（浙江寿仙谷医药股份有限公司，批号：20210501）、玉屏风颗粒（国药集团广东环球制药有限公司，批号：210120）、左甲状腺素钠片（默克雪兰诺有限公司，批号：G00F60）。

1.1.3 试剂与仪器 环磷酸腺苷（Cyclic Adenosine Monophosphate，cAMP）试剂盒（批号：202107），环磷酸鸟苷（Cyclic Guanosine Monophosphate，cGMP）试剂盒（批号：202107），三碘甲状腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）试剂盒（批号：202107），甲状腺素（Thyroxine，T4）试剂盒（批号：202107），皮质醇（Cortisol，CORT）试剂盒（批号：202107），促肾上腺皮质激素（Adrenocorticotrophic Hormone，ACTH）试剂盒（批号：202107），促肾上腺皮质激素释放激素（Corticotropin Releasing Hormone，CRH）试剂盒（批号：202107），促甲状腺激素（Thyroid Stimulating Hormone，TSH）试剂盒（批号：202107），雌二醇（Estradiol，E2）试剂盒（批号：202107），睾酮（Testosterone，T）试剂盒（批号：202107），补体成分3（Complement3，C3）试剂盒（批号：202107），以上试剂盒购自江苏科特生物科技有限公司；白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司，批号：BA07231187）；Trizol试剂（Invitrogen公司，美国，批号：50382661），M-MLV逆转录酶（宝生物工程（大连）有限公司，批号：AK20447A），脱氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNaseI）（Fermentas公司，美国，批号：00103452），核糖核酸酶抑制剂（RNase Inhibitor（Fermentas公司，美国，批号：00805716），6×Loading Dye（Fermentas公司，美国，批号：00504694）。自制玻璃游泳箱（规格：75 cm×55 cm×40 cm）、台式离心机（上海安亭科学仪器厂，型号：TGL-16c）、冷冻离心机（力康生物医疗科技控股有限公司，型号：neofuge 15R）、酶标分析仪（伯腾仪器有限公司，美国，型号：Epoch2C）、电子天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司，型号：BSA2245］、大小鼠抓力测试仪（北京众实迪创科技发展有限责任公司，型号：ZS-ZL）、2720型实时聚合酶链反应（Real-time PCR）仪（ABI公司，美国，型号：2720）、Roche LightCycler 480Ⅱ实时荧光定量PCR系统（Roche公司，瑞士，型号：LightCycler480Ⅱ）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 选取60只雄性ICR小鼠，适应性喂养7 d后，按体质量随机分为空白组、模型组、玉屏风颗粒组（2.25 g/kg）、铁皮枫斗颗粒高剂量组（1.0 g/kg，相当于人推荐量30倍）、铁皮枫斗颗粒中剂量组（0.33 g/kg，相当于人推荐量10倍）、铁皮枫斗颗粒低剂量组（0.16 g/kg，相当于人推荐量5倍），每组10只。造模方法：1）单日限制饮食，双日喂饲足量饲料，自由饮水。2）负重游泳力竭运动：双日灌胃给药结束1 h后进行负重游泳力竭运动，在小鼠尾根部各负荷其体质量6%的铅块作为重物，放入玻璃游泳箱内，水温（20±5）℃，以力竭（小鼠鼻尖没入水面3～5 s）或四肢动作失调为度，及时捞起，擦干毛发。3）实验第15天开始，每天下午给予空白组小鼠生理盐水，其余组给予左甲状腺素钠片（150 μg/kg），灌胃剂量为0.1 mL/10 g，1次/d，连续14 d。

1.2.2 给药方法 空白组、模型组小鼠每天给予生理盐水，其余组给予相应浓度药物，根据体质量变化调整灌胃量，连续给药30 d。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 一般状态与体质量的变化记录 观察记录各组小鼠的饲养情况、精神状态、皮毛色泽及行为活动等。在给药的第0天、10天、20天、30天进行各组小鼠称重，记录各组小鼠体质量的变化。

1.2.3.2 脏器指数 小鼠解剖分别取胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液后称重，按公式，脏器指数＝脏器重（mg）/体质量（g）分别计算胸腺指数和脾脏指数。

1.2.3.3 四肢抓力和力竭游泳时间 第29天给药1 h后进行小鼠四肢抓力测定。待小鼠在抓力仪上适应并且确定小鼠四只爪子都抓牢后，抓住小鼠尾巴末端用力向后拉，测取记录抓力。每只小鼠测定3次抓力（g），取平均值。第30天给药1 h后进行负重游泳实验，及时记录每只小鼠负重游泳时间。

1.2.3.4 生化指标检测 小鼠摘眼球取血，静置2 h，3 000 r/min，離心半径6 cm，离心15 min，吸取血清，根据酶联免疫吸附试验试剂盒方法分别检测cAMP、cGMP、IL-6、C3、CORT、ACTH、CRH、T3、T4、TSH、E2和T水平，并计算cAMP/cGMP比值和E2/T比值。

1.2.3.5 实时PCR法检测下丘脑组织中蛋白激酶A（Protein Kinase A，PKA）和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein，CREB）mRNA表达量 取各组小鼠下丘脑组织约200 mg，经过RNA的提取、DNase I消化样品RNA中的DNA、RNA琼脂糖凝胶电泳、RNA反转录为cDNA后、PCR检测和REAL TIME PCR数据检测。以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参基因，计算各目的基因2-△△Ct，以空白组为基线计算各观察组基因的相对表达水平。引物序列见表1，PKA、CREB和β-actin引物均由北京天一辉远生物科技有限公司合成。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量数据用均值±标准差（±s）表示。组间差异采用单因素方差分析，方差齐性采用最小显著性差异法（Least—Significant Difference，LSD），方差不齐性采用Dunnett′s T3法进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠一般状态变化 模型组小鼠出现体质量增长缓慢，毛无光泽，游泳耐力下降，行为活泼好动，易怒不易抓取等现象，符合临床气阴两虚证症状。玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组能够缓解或改善上述症状。空白组未见异常。

2.2 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠体质量的影响 实验第10天、20天、30天，与空白组比较，模型组小鼠体质量显著减轻（P<0.01）。实验第10天，与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠体质量显著增加（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。实验第20天，与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠体质量显著增加（均P<0.05）。实验第30天，与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠体质量显著增加（均P<0.01）。见表2。

2.3 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠脏器指数的影响 与空白组比较，模型组小鼠胸腺指数和脾脏指数均显著下降（P<0.01）；与模型组比较，铁皮枫斗颗粒中、低剂量组小鼠胸腺指数均显著上升（P<0.05，P<0.01），铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组小鼠脾脏指数均显著上升（P<0.01，P<0.05，P<0.05）。见表3。

2.4 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠四肢抓力和力竭游泳时间的影响 与空白组比较，模型组小鼠四肢抓力显著降低（P<0.05）；与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组小鼠四肢抓力均显著增加（P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05）。与空白组比较，模型组小鼠力竭游泳时间显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组小鼠力竭游泳时间均显著增加（均P<0.01）；与玉屏风颗粒组比较，铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠力竭游泳时间均显著增加（P<0.01，P<0.05）。见表4。

2.5 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠血清环核苷酸水平的变化 与空白组比较，模型组小鼠血清cAMP水平显著上升（P<0.01）；与模型组比较，铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠血清cAMP水平均显著降低（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组小鼠血清cAMP/cGMP水平显著上升（P<0.05）；与模型组比较，玉屏风颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组小鼠血清cAMP/cGMP水平均显著降低（均P<0.01）。见表5。

2.6 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠免疫功能的影响 与空白组比较，模型组小鼠血清C3水平显著降低（P<0.01）；与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组小鼠血清C3水平均有上升趋势（均P<0.01）；与玉屏风颗粒组比较，铁皮枫斗颗粒中剂量组小鼠血清C3水平显著上升（P<0.05）。与空白组比较，模型组小鼠血清IL-6水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组小鼠血清IL-6水平均有下降趋势（均P<0.01）。见表6。

2.7 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠神经内分泌系统的影响

2.7.1 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠CORT、CRH和血清ACTH水平的影响 与空白组比较，模型组小鼠血清CORT、CRH水平显著上升（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，玉屏风颗粒组小鼠血清CRH水平显著下降（P>0.05）。各组小鼠血清ACTH水平差异均无统计学意义（均P>0.05）。见表7。

2.7.2 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠T3、T4和血清TSH的影响 与空白组比较，模型组小鼠血清T3、T4水平显著上升（P<0.01）。与模型组比较，玉屏风颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠血清T3水平均有下降趋势（P<0.01），各给药组小鼠血清T4水平差异均无统计学意义（均P>0.05）。与空白组比较，模型组小鼠血清TSH水平差异无统计学意义（均P>0.05）；与模型组比较，铁皮枫斗颗粒中、低剂量组小鼠血清TSH水平有上升趋势（P<0.01）。见表8。

2.7.3 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠E2、T、E2/T水平的影响 与空白组比较，模型组小鼠血清E2、E2/T水平显著上升（P<0.01，P<0.05），T水平显著降低（P<0.05）。与模型组比较，玉屏风颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中剂量组小鼠血清E2水平均有下降趋势（P<0.01）；各给药组T水平均显著上升（P<0.01），各给药组小鼠血清E2/T水平均有下降趋势（P<0.01）。与玉屏风颗粒组比较，铁皮枫斗颗粒中剂量组小鼠血清E2水平下降（P<0.05），铁皮枫斗颗粒低剂量组小鼠血清T水平上升（P<0.01）。见表9。

2.7.4 铁皮枫斗颗粒对气阴两虚证小鼠下丘脑组织PKA和CREB蛋白mRNA表达的影 与空白组比较，模型组小鼠下丘脑组织中PKA和CREB表达水平显著下降（P<0.01）；与模型组比较，玉屏风散颗粒组、铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量组均能明显增加小鼠下丘脑组织中PKA表达水平（均P<0.01），玉屏风颗粒组和铁皮枫斗颗粒低剂量组能明显增加小鼠下丘脑组织中CREB表达水平（P<0.05）；与玉屏风颗粒组比较，铁皮枫斗颗粒高剂量组PKA表达水平显著升高（P<0.05）。见表10。

3 讨论

《素问·举痛论》曰：“劳则气耗。”《灵枢·五味》云：“谷不入半日则气衰，一日则气少矣。”通过反复力竭游泳使动物疲劳和限制饮食导致气衰可造成气虚动物模型［3-4］。甲状腺激素致虚热模型是最常用的制备肾阴虚方法［5］。甲状腺激素可引起机体代谢亢进和交感神经兴奋，表现出中医“热”证候，当其释放过多时则易耗伤阴液，从而表现与阴虚对症的症状。本研究结合气阴两虚证候的病因病机，通过限食结合负重力竭游泳和灌胃左甲状腺素钠片的方法构建小鼠气阴两虚证模型［6］，以玉屏风颗粒为阳性对照，从小鼠的一般状态、体质量、环核苷酸水平、内分泌-免疫系统探讨铁皮枫斗颗粒的益气养阴功效与作用机制。

脾胃气虚，则水谷精微运化失调，又气血生化乏源，可致形体消瘦，体质量的变化可以反映小鼠的消瘦情況；“气虚则四肢肌肉失养，周身倦怠乏力；气虚则清阳不升、清窍失养而精神萎顿。”四肢抓力和负重游泳力竭时间可以反映小鼠的乏力和神疲情况［7-8］。造模结束后，模型组小鼠出现消瘦、体质量减轻、乏力、游泳耐力减弱等症状，符合气阴两虚证的气虚临床表现，提示实验造模成功。实验结果表明，铁皮枫斗颗粒可增加小鼠体质量，增加小鼠肌力、耐力和抗疲劳，从而达到益气功效。

cAMP和cGMP是一对相互拮抗的物质，介导多种细胞反应，是机体阴虚或者阳虚的客观判断指标，被认为是“阴”“阳”的物质基础［9］。研究表明在阴虚体质下cAMP水平升高或cAMP/cGMP比值升高，反之则为阳虚［10］。本实验结果表明，模型组的cAMP水平和cAMP/cGMP比值均有升高，铁皮枫斗颗粒可以降低cAMP水平和cAMP/cGMP比值至相应正常水平，对甲状腺激素所致肾阴虚具有一定的养阴功效。研究证实下丘脑-垂体-靶腺轴功能亢进或者抑制与机体呈现阴虚或者阳虚状态之间存在着相关性，机体在甲状腺功能亢进状态下，肾上腺功能和甲状腺功能表现亢进，基础代谢增加，从而造成血清CRH、ACTH、CORT、T3、T4水平上升，TSH水平下降；中医脏象学说认为“肾藏精，主纳气生殖”，性腺是调节生殖功能的主要单位，下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱，从而造成血清E2、E2/T水平上升，T水平下降，由此可得肾阴虚与下丘脑-垂体-性腺轴密切相关［11-13］。由实验研究结果得，模型组小鼠CRH、CORT、T3、T4、TSH、E2、E2/T水平上升，T水平下降，铁皮枫斗颗粒组可以改善缓解相关指标，T4这一指标的异常，可能与本实验造模药左甲状腺素钠片主要成分是T4有关［5］。cAMP/PKA通路与炎症免疫反应相关，CREB是该通路下游重要的信号蛋白，cAMP/PKA/CREB信号通路的激活也可以促进多巴胺神经元的存活，从而调控神经-内分泌-免疫系统［14-15］。由本实验结果模型组PKA、CREB表达显著下调，铁皮枫斗颗粒组可以上调相关指标，通过调节神经-内分泌-免疫系统从而起到养阴功效。

中医认为“百病从虚而入”“邪之所凑，其气必虚”“气阴不足，则诸病蜂起”，现代医学认为免疫力低下是指机体呈现不抵抗状态，也即中医的虚证可以引起机体的免疫功能下降而致病。脾脏和胸腺是人体至关重要的免疫器官，脾脏是免疫细胞发生免疫应答的场所，胸腺是机体胸腺依赖淋巴细胞分化、发育、成熟的场所，因此脾脏和胸腺指数的变化可以反映机体的免疫功能变化，免疫抑制会使脏器萎缩，从而脏器指数下降［16］。补体系统是先天性免疫防御的重要组成部分，具有免疫调节和免疫黏附等作用，C3在免疫应答的多环节中发挥作用［17］，也有研究认为C3可作为肾阴虚诊断的客观指标［18］。IL-6为机体炎症介质，参与炎症反应，在免疫调节中发挥着重要的作用［19］。在本研究中，模型组小鼠脏器指数下降、血清C3水平下降和IL-6水平升高，铁皮枫斗颗粒可以提升脏器指数，增加血清C3水平和降低IL-6水平而增加免疫蛋白水平及免疫细胞生长分化、减少炎症等，通过对证候的改善发挥益气养阴功效而表现出增强免疫力的作用。“气能生津，津能载气”，气虚和阴虚互为因果、互相影响；“环核苷酸-内分泌-免疫”系统各部分也相互作用、彼此制约［20-21］，神经内分泌系统通过神经递质、分泌激素来调节免疫功能，免疫系统通过分泌细胞因子反馈神经内分泌系统［17］，胸腺可以产生和分泌胸腺激素和细胞因子，其中以cAMP作为第二信使，发挥着免疫调节作用，且均与气阴两虚证候密切相关［22］。

4 小结

综上所述，本研究通过构建气阴两虚证小鼠模型，从环核苷酸水平、内分泌系统和免疫功能及与益气养阴之间的关系研究产品中医功效。“辨证保健”理论是现代中医学发展的产物，是“精准保健”“科学保健”“个性保健”的指导原则，铁皮枫斗颗粒作为已上市产品，基于“证候-功效”的动物实验研究可以为将要进行的益气养阴中医功效人体随机对照试验以及多种证候对比的人体大样本研究奠定基础。

利益冲突声明：无。

参考文献

［1］萨翼，陈广耀，王进博，等.已批准增强免疫力功能的中药类保健食品现状及监管建议［J］.中国中药杂志，2019，44（5）：885-890.

［2］王林元，王淳，张睿，等.中医辨证保健概念的提出及理论探讨［J］.中华中医药杂志，2020，35（3）：1056-1061.

［3］陈进成，刘建勋，林成仁，等.基于“劳则气耗”理论研究气虚证动物模型的建立方法［J］.中国中药杂志，2018，43（11）：2177-2183.

［4］徐宇杰.通过控制饲料量建立“气虚证”动物模型的实验研究［J］.中华中医药学刊，2011，29（8）：1909-1911.

［5］白茹，刘欣欣，李凤金，等.阴虚证动物模型的造模方法［J］.中华中医药学刊，2020，38（2）：69-71.

［6］乐娜，吐尔逊·热依拉，赵凡，等.芝斛方对气阴两虚证小鼠环核苷酸、免疫及代谢水平的影响［J］.北京中医药大学学报，2021，44（10）：899-907.

［7］冯玄超，郭淑贞，武志黔，等.慢性心力衰竭模型大鼠气虚血瘀证相关信息的评价［J］.中华中医药杂志，2014，29（5）：1563-1567.

［8］甘加宽，樊憬懿，王冬芝，等.睡眠剥夺诱导小鼠气虚证模型的方法研究［J］.世界科学技术-中医药现代化，2016，18（10）：1801-1806.

［9］马露，王俊峰.基于cAMP、cGMP分布和比值探析六经辨证阴阳量化指标［J］.中医临床研究，2017，9（27）：4-6.

［10］潘向军，楼百层，朱延涛.肾阴虚模型制备方法及肾阴虚证研究进展［J］.新中医，2019，51（3）：23-27.

［11］付海尔，李建民，刘玉红.左归丸对肾阴虚模型大鼠神经-内分泌-免疫功能的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2017，23（22）：155-159.

［12］张嘉妮，李玉星，杨梦琳，等.六味地黄汤及“补泻”药对对肾阴虚模型小鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能的影响［J］.中国现代应用药学，2017，34（1）：25-29.

［13］张凡，徐珊，刘蓬蓬，等.黄柏不同炮制品对甲亢型肾阴虚模型大鼠甲状腺和肾上腺皮质功能的影响［J］.中国药房，2017，28（1）：27-30.

［14］王雅娟，高华武，朱和平，等.健脾补肺方对幼龄哮喘大鼠cAMP/PKA/CREB信号通路的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2021，27（19）：88-96.

［15］石芸.5-HT4受体拮抗剂通过肠-脑轴加剧帕金森病小鼠神经病理的作用研究［D］.无锡：江南大学，2021.

［16］汤如莹，张建军，费文婷，等.破壁灵芝孢子粉对虚热证和虚寒证小鼠环核苷酸水平及免疫功能的影响［J］.环球中医药，2019，12（7）：982-988.

［17］錢旻.免疫学原理与技术［M］.北京：高等教育出版社，2011：113-128.

［18］全建峰，吴晓康，孙晓红.肾阴虚证患者的血清免疫球蛋白G、A、M及补体C3、C4相关性研究［J］.现代中医药，2004，24（5）：53-54.

［19］YAO X，HUANG J，ZHONG H，et al.Targeting interleukin-6 in inflammatory autoimmune diseases and cancers［J］.Pharmacol Ther，2014，141（2）：125-139.

［20］ASHLEY NT，DEMAS GE.Neuroendocrine-immune circuits，phenotypes，and interactions［J］.Horm Behav，2017，87：25-34.

［21］王蕾蕾，高学敏，贾岚，等.青钱柳对阴虚型2型糖尿病大鼠内分泌-免疫-环核苷酸系统的影响［J］.中华中医药杂志，2021，36（2）：736-740.

［22］曹梦醒，周蒙恩，李勇.加味芪榔方治疗气阴两虚型药物依赖性便秘临床疗效［J］.中国实验方剂学杂志，2022，28（24）：145-152.

（2022-11-15收稿 本文编辑：吴珊）

基金项目：国家重点研发计划（2018YFC17068003）作者简介：郭琳琳（1995.10—），女，硕士研究生在读，研究方向：中药产业化及产品开发，E-mail：grl15131951718@163.com通信作者：王林元（1961.10—），男，硕士，教授，博士研究生导师，研究方向：中医药基本理论与中药新技术，E-mail：wangly@bucm.edu.cn；赵晋燕（1979.11—），女，硕士，主管药师，研究方向：药理毒理学研究，E-mail：jinyanzhao1979@163.com