纤支镜组织病理联合免疫细胞化学在肺癌病理分型诊断中的应用价值研究

王 艺，吴永丽，王 军，陈宽塘，薛兴荣

灌云县人民医院呼吸科，江苏 连云港 222200

肺癌系临床常见恶性肿瘤，具有极高患病率和死亡率，是目前威胁人类生命健康的疾病之一［1］。随着医疗技术水平不断提高，肺癌的临床诊疗逐渐精细化，治疗前通过有效方式做出准确病理分型，据此为患者提供更具针对性的治疗方案，从而实现患者治疗效果的有效提升［2］。纤支镜组织病理检查是临床诊断肺癌常用方法，精准度较高，但受细胞重叠、细胞丢失、细胞退变等因素影响，单独采用该检查行肺癌病理分型易引发误诊，从而对患者早期治疗方案的制定造成影响［3］。免疫细胞化学技术是采用被标记的抗原或抗体对细胞相应抗体或抗原进行定向、定位或定量检测的检测技术，通过染色处理可将癌变细胞背景清晰显现出来，不仅便于识别细胞类型，还有利于保存样本［4］，且该技术在子宫颈癌筛查、乳腺癌基因状态检测、子宫内膜癌筛查中的作用价值已得到临床证实［5-7］。为寻求一种肺癌病理分型精准度更高的诊断方式，本研究对纤支镜组织病理联合免疫细胞化学在肺癌病理分型诊断中的应用进行研究分析，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年8 月—2021 年7 月灌云县人民医院接受病理检查肺部病变的63例患者作为研究对象，所有患者均采取纤支镜组织病理检查和免疫细胞化学检验进行肺部病理分型诊断。其中，男性34例，女性29例；年龄38～75岁，中位年龄58岁。

1.2 方法

1.2.1 纤支镜组织病理检查 嘱咐患者受检前禁食4 h 以上，向其讲解检查流程。受检时取患者仰卧位，采用2%利多卡因行雾化吸入麻醉，另向患者鼻孔喷入适量2%利多卡因，随后将Olympus BF-170 型（日本奥林巴斯）纤支镜经患者鼻腔插入，如果鼻孔太小，则可通过口腔插入，插入过程中，根据实际情况行气道内利多卡因局麻，利多卡因使用总量应＜400 mg。纤支镜插入后，依照先健侧后患侧、自上而下的顺序，对患者声门、气管、隆突、支气管等位置进行观察，发现病变后经活检孔，使用活检钳取出标本并行组织病理学检查。完成组织病理学检查后，制作液基薄片，晾干待检。

1.2.2 免疫细胞化学检验 （1）试剂与仪器。第一抗体：p40、p63、CD56、Syn、TTF-1及NapsinA，北京奥维亚生物技术有限公司提供；第二抗体：罗氏OptiView DAB Detect kit 显色系统，配套缓冲液、清洗液、免疫组化抗原修复液、苏木素染色液及返蓝染色液；仪器：Benchmark XT全自动免疫组化仪，瑞士罗氏集团生产。（2）染色方法。取检测试剂和辅助试剂置于全自动免疫组化仪试剂架，根据不同第一抗体修复时间、孵育时间、温度等参数，于计算机中设置相应染色方案。通过计算机输入第一抗体名称，借助Ebar条码打印机打印相应信息标签，并将其粘贴于相应玻片。取玻片置于全自动免疫组化仪，根据计算机程序提示滴加第一抗体，其余步骤由仪器自行完成。染色后取出玻片，洗净缓冲液，选用95%乙醇和二甲苯行脱水透明处理后封片待检。（3）结果判读。未着色为阴性细胞，着棕黄色为阳性细胞。依照阳性细胞占全部肿瘤细胞比 例 判 定 结 果，+ ：占 比＜5%；++ ：占 比5%～25%；+++：占比26%～50%；++++：占比＞50%。

1.3 观察指标

观察单独纤支镜组织病理诊断和纤支镜组织病理联合免疫细胞化学诊断结果与常规病理活检的差异性。

1.4 统计学方法

采用Foxtable 2019 软件和SPSS 26.0 软件行数据录入与分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 纤支镜组织病理与常规病理活检诊断结果

单独行纤支镜组织病理诊断，可分型49 例（77.78%），其中鳞癌22 例，腺癌14 例，小细胞癌13 例，对比常规病理活检结果，鳞癌、腺癌及小细胞癌诊断符合率分别为72.00% （18/25）、73.33% （11/15）及84.62%（11/13），见表1。

表1 纤支镜组织病理与常规病理活检诊断结果 例

2.2 纤支镜组织病理联合免疫细胞化学与常规病理活检诊断结果

联合行纤支镜组织病理和免疫细胞化学诊断，可分型60 例（95.24%），其中鳞癌27 例，腺癌19 例，小细胞癌14例，对比常规病理活检结果，鳞癌、腺癌及小细胞癌诊断符合率分别为92.00%（23/25）、100.00%（15/15）及100.00%（13/13），见表2。

表2 纤支镜组织病理联合免疫细胞化学与常规病理活检诊断结果 例

2.3 两种诊断方式诊断符合率统计学情况

基于常规病理活检，单独行纤支镜组织病理诊断鳞癌、腺癌及小细胞癌符合例数分别为18例、11例及11例，合计可分型诊断符合40 例（75.47%）；联合诊断鳞癌、腺癌及小细胞癌符合例数分别为23 例、15 例及13 例，合计可分型诊断符合51 例（96.23%），差异有统计学意义（χ2=7.766，P＜0.05）。

3 讨论

纤支镜组织病理检查在肺癌占位病变诊断中发挥作用突出，相比常规纤支镜镜下检查，纤支镜组织病理检查能在前者见不到肿物或黏膜易出血以致无法有效取到病理活检标本的情况下实现组织病理检测，因而得到临床广泛应用。此外，经纤支镜取病理组织，相比传统穿刺活检对患者造成创伤更小，且利用纤支镜取出的病理组织，基于液基细胞学理论制作液基薄片，能有效解决传统涂片黏液多、血液多、涂片薄厚不均、细胞结构不清晰、细胞退变等问题，从而可一定程度上提高检测阳性率［8］。但由于鳞癌和腺癌部分细胞学形态相互叠加，易出现核仁明显、染色质增粗、细胞核型不规则等不良情况，导致部分患者采用纤支镜组织病理检查时，难以从细胞形态学角度对其病理分型进行有效区分，进而影响诊断结果。此时，则需要在免疫组织化学技术的帮助下做进一步诊断。

免疫细胞化学是一种用于抗原定性、定位及定量测定的新型技术手段，该技术通过使用带显色剂标记的特异性抗体，在组织细胞原位，借助抗原抗体反应和组织化学呈色反应，实现对相应抗原的定性、定位及定量。目前，该技术已在组织病理学领域得到广泛应用，且有大量研究证实了该技术的临床诊断价值，任美英等［9］在非小细胞癌恶性胸腔积液诊断中运用免疫细胞化学技术，ROC 曲线分析结果表明，免疫细胞化学能对良恶性胸腔积液进行有效鉴别。宋方彬等［10］在子宫颈癌筛查中运用免疫细胞化学技术，结果显示，该技术可辅助CT 检查进行诊断分级，能有效提高子宫颈癌筛查准确率。但是临床上有部分患者无法取到组织学标准，例如尚未形成肿块的早期病变患者，对于此类患者仅能通过刷检的方式进行诊断，且有部分患者存在刷检时细胞量过少而无法制成细胞块的现象，导致其仅能通过细胞学对其作出最终诊断和分型。因此，对细胞学涂片或液基薄片标本的免疫组织化学诊断进行探讨分析是极具临床实际意义的。现阶段，细胞学涂片或液基薄片通常采取人工操作的方式实现免疫组织化学染色，而这种染色方式极易受到人为、外界温差、环境等多方面因素的影响，增加假阳性或假阴性发生率的同时，还需要耗费大量的人力物力，工作效率低，为避免人工染色带来的种种影响，本研究采用罗氏OptiView DAB Detect kit 显色系统进行自动染色，其不仅可实现标准化染色，还能有效提高检测结果的客观性。

纤支镜组织病理检查联合免疫细胞化学用于肺癌病理分型诊断，一方面可保证细胞抗原完整性，另一方面免疫细胞化学检测几乎所有操作均由仪器自行完成，有效避免人工操作带来的误差，从而能有效提高诊断准确性。本研究对单独纤支镜组织病理和纤支镜组织病理检查联合免疫细胞化学检测在肺癌病理分型诊断中的价值进行对比分析，结果显示，鳞癌、腺癌及小细胞癌诊断符合率分别为72.00%、73.33%及84.62%。有报道显示［11］，纤支镜病理组织分型诊断鳞癌、腺癌及小细胞癌的符合率分别为68.8%～95.6%、84.9%～95.6%及70.7%～100.0%，除腺癌诊断符合率未达到以往研究标准之外，其余病理分型的诊断符合率均与既往报道相符，而腺癌诊断符合率较低则可能与遭受外界人为因素影响有关。相比单独纤支镜组织病理检查，联合检查可确保更多病理标本实现准确分型，本研究结果提示，联合诊断在肺癌病理分型诊断中作用更加突出。研究指出［12］，人工滴加抗体带来的实验误差，以及手工修复过程中产生的脱片、着色不均匀等现象均可对检测结果造成影响，而在本研究采用的罗氏OptiView DAB Detect kit 显色系统具有较高的自动化程度，在确保取材良好的基础上，可在免疫细胞化学染色时，有效避免纤支镜组织病理检查过程中人工操作造成的误差，减少外界因素对检测结果造成的影响，从而有效提高诊断准确率。

综上所述，在纤支镜组织病理检查基础上行免疫细胞化学检测，可有效提高肺癌病理分型诊断准确性，对患者早期治疗方案制定具有重要意义。