液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中10 种农药残留

◎ 梁美艳，钟水桥

（梧州市食品药品检验所，广西 梧州 543000）

液相色谱-质谱法具有抗干扰能力强，灵敏度、精密度、准确度高等特点，已被广泛应用于蔬菜、水果、茶叶、肉类和中药材等产品的农药残留检测中[1-3]。近年来，新发展起来的Captiva EMR-Lipid固相萃取柱，通过空间位阻和亲水性的协同作用，对于C5 及以上碳链化合物具有极强的选择性吸附，可以在去除干扰脂质的同时不吸附目标物，因而具有良好的净化效果。该净化技术主要用于兽药残留检测，应用于肉类中农药残留检测研究较少[4-7]。本研究以Captiva EMRLipid 为净化手段，并用液相色谱质谱联用仪对鱼肉中10 种农药残留进行了快速筛查和定量分析。该方法的净化效果好、灵敏度高，能够满足鱼肉中多种农药筛查确证工作的需要。

1 材料与方法

1.1 材料

鱼肉，采购于当地农贸市场。

1.2 试剂

乙腈（HPLC 级），德国Merck 公司；无水乙酸钠，国药集团化学试剂有限公司；EMR-Lipid（3 mL/300 mg），安捷伦科技有限公司；速灭威、恶霜灵、敌敌畏、残杀威、甲磺隆、克百威、氯磺隆、甲萘威、甲拌磷亚砜和阿特拉津（纯度＞95.0%），德国Dr．Ehrenstorfer 公司。

1.3 仪器与设备

LC-1290/QQQ-6490 液相色谱质谱联用仪，安捷伦科技有限公司；XA205DU 电子分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；BSA3202S 电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；T18 digital均质器，德国IKA 公司；AllegraX-15R 高性能通用台式离心机，美国贝克曼公司。

1.4 试验方法

1.4.1 标准溶液制备

（1）标准储备溶液的配制。分别精密称取10 种农药标准品适量，加入少量丙酮振荡溶解后，用乙腈定容，配制成浓度为1.0 mg·mL-1的10 种农药单标储备液。

（2）混合工作液配制。准确量取上述储备液适量，用乙腈逐级稀释，制备成浓度为6.7 ～111.8 ng·mL-1的混合标准工作液，4 ℃保存。

1.4.2 样品前处理

称取5 g 试样，精确至0.01 g，于50 mL 离心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均质5 min，加入2 g 无水乙酸钠、4 g 无水硫酸镁，振荡2 min，8 000 r·min-1离心5 min，取上清液2 mL 过EMR-Lipid 净化柱，收集洗脱液，再用2 mL 乙腈淋洗，收集洗脱液，合并洗脱液，40 ℃氮吹吹至近干，用20%乙腈定容至2 mL，0.22 μm 滤膜过滤，供LC-MS/MS 测定。

1.4.3 仪器条件

（1）色谱条件。色谱柱：Agilent SB-C18（2.1 mm×100 mm，2.7 μm）；进样量：1 μL；柱温：35 ℃；流动相：0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）（A 相）和乙腈（B 相）；梯度洗脱程序：0 ～1.50 min，20% B；1.50 ～8.00 min，20% →90% B；8.00 ～10.00 min，90% B；后运行时间：3 min；流速：0.30 mL·min-1。

（2）质谱参数。电喷雾离子源（ESI）；动态多反应检测DMRM 模式；碎裂电压380 V。离子对参数见表1。

表1 测定10 种农药的质谱参数条件表

2 结果与分析

2.1 线性范围及定量限、检出限

选取阴性鱼肉作为空白基质，分别称取7 份（每份5 g），按照样品前处理方法进行操作，氮吹近干后分别加入混合工作液10 μL、20 μL、40 μL、80 μL、160 μL、200 μL 和400 μL，并用20%乙腈定容至2 mL进行分析，以峰面积（Y）对其质量浓度（z）作标准曲线。结果表明，在相应质量浓度范围内，各农药的响应值与其质量浓度的线性关系良好（R＞0.996）。

以10 倍信噪比对应的浓度为方法定量限（S/N=10），以3 倍信噪比对应的浓度为方法检出限（S/N=3），各农药的检出限（LOD）及定量限（LOQ）分别为0.011 ～1.864 μg·kg-1和0.034 ～4.188 μg·kg-1。结果见表2。

表2 10 种农药的线性范围、相关系数、检出限、定量限、回收率表（n=3）

2.2 回收率及精密度

在鱼肉空白样品中添加约1 倍、2 倍、5 倍LOQ的10 种农药混合标准溶液，按“1.4.2”项下的方法进行前处理，每个浓度做3 个平行样，得到方法平均回收率及精密度结果见表2。10 种农药残留的平均回收率为81.9%～100.9%，RSD 为0.6%～5.5%。

2.3 讨论

2.3.1 色谱条件的优化

本试验对常用流动相甲醇-0.2%甲酸水、甲醇-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）、乙腈-0.2%甲酸水和乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）进行了考察。结果发现，使用乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸铵）溶液体系作为流动相时，各成分洗脱效果好、峰形对称，灵敏度明显提高，故选择乙腈-0.2%甲酸水（含5mmol·L-1甲酸铵）溶液作为流动相进行梯度洗脱。

2.3.2 质谱条件的优化

由于DMRM 模式可以智能化地分配离子扫描时间，并且能够同时兼顾灵敏度与数据采集质量，适用于高通量、多组分化合物的分析，本试验采用动态多反应监测模式（Dynamic Multiple Reaction Monitoring，DMRM）进行检测。

2.3.3 样品提取方法优化

样品提取液用0.2%甲酸乙腈进行均质提取，在酸性提取环境中有利于各农药成分的稳定。试验分别考察了2 mL、5 mL 上清液过EMR-Lipid 净化柱对结果的影响，发现2 mL 提取液经柱层析纯化后采用动态多反应监测进行检测，各成分回收率稳定且在允许范围内，而5 mL 提取液经柱层析纯化后的部分成分的回收率达到120%以上，故选2 mL 上清液过柱。

3 结论

本文采用Captiva EMR-Lipid 作为净化手段，结合液相色谱质谱联用仪对鱼肉中10 种农药残留进行了快速筛查和定量分析。结果表明，该方法不仅具有前处理简单、操作方便、净化除脂效果好等优点，还具有分离效果好、分析快速、检出限低、灵敏度和精密度高等特点，适用于对鱼肉中10 种农药残留的检测。