混灭威的液相色谱分析方法研究

吴晗，徐成辰，王坤，刘贝妮，唐慧敏

(江苏省农产品质量检验测试中心，南京 210000)

混灭威学名为混二甲苯基-N-甲基氨基甲酸酯[1]，是由3,5-二甲基苯基甲氨基甲酸酯(灭除威)和3,4-二甲基苯基甲氨基甲酸酯(灭杀威)2 种同分异构体混合而成。CAS 号2686-99-9，ISO 通用名称为dimethacarb[2]。工业品混灭威原油(含量88%~91%)为淡黄色至棕黑色黏稠的油状液体[2-3]。混灭威不溶于水，微溶于石油醚、汽油，易溶于乙醇、苯、丙酮、甲醇、甲苯等有机溶剂，遇碱或强酸易分解[1,3]。

混灭威具有强烈的触杀活性，作用迅速，但残效期短[2]。混灭威灭蚊效果显著，对稻飞虱、稻叶蝉和茶小绿叶蝉等有很好的防效，亦可防治棉铃虫[1,4-6]。闫莉等[7]发现混灭威与其他类型农药混配后，其残留量小于单剂农药卫生标准。

目前关于混灭威登记的农药产品有10 余种(中国农药信息网www.icama.org.cn/hysj/index.jhtml)，但现有混灭威的分析方法的研究甚少，导致混灭威长期处于监管盲区，产品质量也无法得到保障。基于此，本文采用液相色谱法对混灭威原药及50%混灭威乳油进行了分析研究，以期为该药剂产品质量控制及标准制定提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 样品

93.0%混灭威原药和50%混灭威乳油(江苏常隆农化有限公司)。

1.2 试剂和溶液

乙腈，色谱纯；水，超纯水或新蒸二次蒸馏水；混灭威标样，已知质量分数ω≥98.0%[沈阳农药质量检验中心(混灭威含量为灭杀威和灭除威2 个组分含量之和)]。

1.3 仪器设备

高效液相色谱仪1290(安捷伦科技有限公司)；XP-205 自动分析天平[梅特勒托利多科技(中国)有限公司]。

1.4 高效液相色谱分析条件

试样用乙腈溶解，以乙腈∶水=30∶70(体积比)为流动相(表1)，以C18为填料的不锈钢柱(150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm)和紫外检测器，在波长264 nm 下对试样中的混灭威进行反相高效液相色谱分离，外标法定量。流速：1.0 mL/min；柱温：室温(温度变化不大于2 ℃)；进样体积：10 μL。在此色谱条件下，灭杀威约13.3 min，灭除威约14.6 min(图1)。

图1 混灭威的高效液相色谱图

表1 流动相梯度

1.5 测定步骤

1.5.1 标样溶液的制备

称取0.10 g(精确至0.000 1 g)混灭威标样于50 mL容量瓶中，加入20 mL 乙腈，超声波振荡5 min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。

1.5.2 试样溶液的制备

称取含0.10 g(精确至0.000 1 g)混灭威的试样于50 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超声波振荡5 min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤。

1.5.3 测定

在上述仪器设置条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2 针混灭威峰面积相对变化小于1.2%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5.4 计算

将得到的2 针试样溶液及试样溶液前后2 针标样溶液中混灭威峰面积分别进行平均。试样的混灭威含量按公式⑴计算：

式中：ω1为试样中混灭威含量，以%表示；A2为试样溶液中混灭威峰面积的平均值；m1为混灭威标样的质量，单位为克(g)；ω为样中混灭威含量，以%表示；A1为标样溶液中混灭威峰面积的平均值；m2为试样的质量，单位为克(g)。

2 结果与分析

2.1 色谱条件

从混灭威的紫外光谱图(图2)可以看出，混灭威2 个峰的最大吸收波长264 nm，在该波长处干扰较少，灵敏度高，满足分析要求，因此确定检测波长为264 nm。

图2 混灭威[13.3 min(左)和14.6 min(右)]的紫外光谱图

依据混灭威物化性质和溶剂的紫外吸收波长，选定乙腈为溶剂溶解样品，并以乙腈和水作为流动相。将流动相按不同配比在液相色谱上进行试验，当乙腈与水比例为30∶70 时，杂质峰与混灭威完全分离，峰形较好，且峰纯度高，完全达到试验要求，因此选择乙腈∶水=30∶70(体积比)作为流动相，流速1.0 mL/min。

2.2 特异性试验

试验采用HPLC-DAD 峰纯度分析法来鉴别混灭威。混灭威标样、混灭威原药、50%混灭威乳油中的混灭威HPLC-DAD 峰纯度均大于990，有效成分处无其他物质干扰，符合定量分析要求。峰纯度色谱图见图3~5。

图3 混灭威标样HPLC-DAD 峰纯度色谱图

图4 混灭威原药HPLC-DAD 峰纯度色谱图

图5 50%混灭威乳油HPLC-DAD 峰纯度色谱图

图6 混灭威峰面积与质量浓度关系图

2.3 线性关系试验

按1.5.1 节标样溶液的制备方法配制5 个不同质量浓度的有效成分线性溶液，在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后测定，以混灭威质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。当混灭威质量浓度为953.44~3 059.70 mg/L 时，回归方程为y=1.02x-102.42，相关系数r=0.998。

2.4 方法精密度试验

按1.5.2 节试样溶液的制备方法配制5 个混灭威原药和5 个50%混灭威乳油精密度溶液。

以有效成分线性溶液STD3 为标样溶液，在上述色谱条件下，按标样溶液、精密度溶液、精密度溶液、标样溶液的顺序进行测定，结果见表2、表3。

表2 混灭威原药中混灭威精密度试验结果

表3 50%混灭威乳油中混灭威精密度试验结果

得到混灭威原药和50%混灭威乳油中混灭威质量分数测定结果的变异系数(RSD)分别为0.13%和0.21%，均小于修改的Horwitz 公式2(1-0.51ogC)×0.67=1.35 和1.48，表明有效成分分析方法的精密度结果满足质量控制的基本要求。

2.5 方法准确度试验

称取含0.05 g(精确至0.000 1 g)混灭威的50%混灭威乳油于50 mL 容量瓶中，再称取混灭威标样0.05 g(精确至0.000 1 g)，按1.5.2 节试样溶液的制备方法配制5 个有效成分准确度溶液。

以线性溶液STD3 为标样溶液，计算混灭威的回收率，结果见表4。50%混灭威乳油中混灭威平均回收率为100.34%，符合准确度要求。

表4 50%混灭威乳油回收率试验结果

3 结论

本研究结果表明，采用本分析方法测定混灭威原药、50%混灭威乳油的有效成分，检测结果符合性良好，精密度和准确度高，线性关系良好，分离效果佳，且方法操作简便、快捷。故本研究建立的混灭威液相色谱分析方法可以满足日常检测工作需要。