2020—2022 年临沂市河东区鸡新城疫免疫抗体监测与分析

王秀英

(临沂市河东区畜牧发展促进中心，山东临沂 276000）

新城疫(Infection with Newcastledisease virus，newcastle disease，ND)，俗称“鸡瘟”，是由新城疫病毒引起禽的一种急性、败血性、高度接触性传染病。该病主要以高热、呼吸困难、神经紊乱、下痢、黏膜和浆膜出血为特征，具有较高的发病率和死亡率，是危害养禽业的主要传染病之一。新城疫一年四季均可发生，春秋季发病率相对较高，且感染不分日龄，各年龄段的鸡均易感。该病传播速度快，鸡场内一旦发生本病，可于4～5d 内波及全群，严重威胁鸡群健康，造成巨大的经济损失。国家新城疫防治指导意见(2017—2020 年）规定，各地要继续对鸡实施全面免疫，根据当地实际和监测情况对其他家禽开展免疫，及时制定实施新城疫免疫方案，做好免疫效果评价。

1 材料与方法

1.1 实验样品

2020—2022 年从河东区各街道乡镇(芝麻墩街道、梅家埠街道、相公街道、太平街道、汤头街道、凤凰岭街道、朝阳街道、八湖镇、汤河镇、郑旺镇）等县区采集样品中，选取采样记录完整、分类清楚的样品，共计2135 份。样品采集方法是采用鸡翅下静脉采血，室温静置自然凝固后，再经1800r/min 离心5～8min，分离血清得到。

1.2 实验仪器

恒温培养箱、分析天平、高压灭菌器、超纯水机、烧杯、量筒、玻璃棒、96 孔血凝板、冰箱、离心机、微量振荡器、微量移液器 (20～100μL）、8 道微量移液器(20～100μL）、微量吸头(200μL、1mL）、一次性注射器、一次性手套、加液槽等。

1.3 实验用试剂的配制备

PBS 缓冲液的配制：称取NaCl 8g、Na2HPO43.582g、NaH2PO41.561g，加超纯水定容至1000mL，然后调节pH 值至7.2，备用。

1%鸡红细胞悬液的制备：无菌取3.8%的枸橼酸钠溶液，从非免疫鸡翅下静脉无菌采血，然后用适量的PBS 缓冲液稀释后以3000r/min 离心5～10min，弃去上清液，按上述方法重复洗涤三次，然后用PBS 缓冲液配制成1%的红细胞悬液，备用[1]。1%红细胞制备好后，置于2～8℃冰箱保存，使用时充分混匀。

鸡新城疫血凝抑制试验抗原：抗原规格为2.0mL/瓶，试验时将使用剂量的抗原无菌吸出现配现用，使用抗原专用稀释液稀释，剩余抗原放回冰箱保存。

1.4 实验方法

1.4.1 检验依据

按照农业部《新城疫诊断技术规范》 (GB/T 16550-2020）所规定方法进行[2]。

1.4.2 检测方法

血凝(HA）试验：在96 孔V 型微量反应板中，每孔加入25μL PBS 缓冲液，为了准确起见，做两排重复孔。第1 孔加入25μL 配制好的抗原，依次做25μL 倍比稀释至第11 孔弃去(如此抗原的稀释倍数分别为21、22、23……211），第12 孔不加抗原为红细胞对照；每孔依次加入25μL PBS 缓冲液；然后每孔加入25 μL 1% (V/V）鸡红细胞悬液，微量振荡1min 混合均匀，室温下静置30min，观察记录结果。

结果判断方法，将96 孔板倾斜45° 观察，观察到沿着倾斜面向下呈线状流动的为红细胞沉淀，表示红细胞未被病毒凝集或者未完全被病毒凝集；如果倾斜后红细胞不流动，平铺在孔底凝成均匀薄层，说明红细胞被病毒凝集，做好试验结果记录。

血凝试验：首先配制4 单位抗原，4 单位抗原即一个血凝单位的稀释度的4 倍浓度。以能完全凝集的抗原最高稀释倍数作为终点，该倍数除以4 即为含有4 单位的抗原稀释倍数。按该倍数用抗原专用稀释液稀释，抗原现配现用。

对抗原每孔加入25 μL PBS 缓冲液：第1 孔加入25 μL 血清，再反应板中将血清作横向倍比稀释至第10 孔(如此血清的稀释倍数分别为21、22、23……210），第11 孔与12 孔空白；第1～10孔分和12 孔别加入25 μL 的4 单位抗原，11 孔不加作为红细胞沉淀对照孔；混匀后室温下静置20min；每孔加入25 μL 1% (V/V）鸡红细胞悬液，混匀后室温下静置30min。当对照组的红细胞出现较为明显形状时即可进行结果判断。

1.4.3 试验结果判定

能够使4 单位抗原凝集鸡红细胞的作用完全被抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的抗体效价，以2 的指数表示。第11 孔不含抗原，为红细胞对照，第12 孔不含血清为抗原对照。结果判定，第11 孔红细胞对照孔全部沉降，第12孔抗原对照孔全部凝集，该试验成立。被检鸡血清HI 效价≤1∶4 判为阴性；血凝≥1∶16 时判为阳性，抗体合格；血凝=1∶8 时，认为可疑，需要重检一次。

2 结果与分析

河东区2020—2022 年新城疫免疫抗体检测结果显示，2020—2022 年合格率分别为88.71%、91.04%、94.99%，平均合格率为91.66% (见表1）。其中2020 年最低为88.71%，但也超过了国家农业部规定的70%的标准。分析上述数据可见，通过每年春秋两次全面免疫，河东区新城疫抗体趋于稳定，合格率超出了国家标准，总体来说免疫效果可以，并有逐年升高的趋势。

表1 2020—2022 年河东区新城疫免疫抗体合格率

2020—2022 年春、秋季节的血清样品进行检测对比，其中春季样品786 份，秋季样品922份，共计1708 份。由表1 可知，从2020—2022年春季抗体合格率分别为92.07%、92.30%、95.97%，平均合格率为93.51%。由表1 可知，秋季抗体合格率分别为89.54%、90.74%、92.84%，平均合格率为91.11%。分析以上数据可知，被检春季和秋季样品数量不同，合格数也有差别，但是鸡群春季免疫抗体平均合格率差异不明显，均达到了90%以上的水平，春季略高于秋季。

2020—2022 年共采集血清样品2135 份，涉及规模场12 个，样品数为1537 份，散养户23户，样品数为598 份。由表1 可知，规模场新城疫免疫抗体合格率为95.71%，散养户抗体合格率较低为81.27%，规模场和散养场平均抗体合格率为91.66%。散养户合格率相对规模场较低，平均合格率低14.5%。由此可见，规模场对新城疫的免疫足够重视，免疫效果较好，散养户需要规范新城疫免疫程序，加强免疫，进一步提高鸡群对新城疫病毒的抵抗能力，避免疾病的暴发。

由表1 可知，2020—2022 年种鸡场抗体合格率处于较高的水平，分别为98.10%、98.89%、99.24%，平均合格率为98.78%。由此可见，河东区种鸡场新城疫免疫抗体处于较高的水平，基本做到了免疫无疫。

3 讨论

通过分析检测数据可以发现，虽然各养殖场、各散养户经过新城疫疫苗免疫，虽然鸡群的抗体合格率处于较高水平，但仍然存在少量抗体较低的个体，从而导致免疫失败的现象发生，这也增加了新城疫暴发的风险。分析原因可能由以下几种：第一，雏鸡的母源抗体的影响，由于种鸡的免疫抗体水平存在个体差异，从而新孵出的雏鸡的母源抗体水平也有高有低。母源抗体高的雏鸡进行新城疫首免时，会被母源抗体中和掉，不能产生有效的免疫应答。母源抗体低的雏鸡，又按照常规来进行首免，那么在收到强度侵入时，可能导致新城疫疫情的发生[3,4]。第二，疫苗保存和运输存在问题。有的防疫员在预防注射的过程中无冷藏设备，部分养殖户没有按要求注射，造成疫苗效价降低或者失效。另外可能免疫接种时，注射剂量不足，免疫密度偏低，或不按免疫程序免疫，都会造成免疫失败[5]。第三，免疫抑制问题，鸡场中非传染性因素和传染性因素(一些免疫抑制病的影响如：鸡传染性法氏囊病、鸡马立克氏病、鸡传染性贫血、禽白血病以及网状内皮细胞增殖症等）都会对新城疫的免疫形成免疫抑制。另外应激因素、日粮中缺乏某种维生素，饲料中霉菌毒素含量高等多种因素也可导致免疫抑制[6]。

此外，从业者的饲养管理水平、饲养密度、卫生条件、消毒频次及饲料的质量等都会影响鸡群的健康以及机体的免疫功能，从而造成机体的抗体水平和抗体持续时间不均匀。当新城疫病毒侵袭时，一般抗体水平低的鸡会先发病，随后在较短时间内传播给其他鸡群。

4 改进措施

目前评价新城疫疫苗免疫效果的重要依据仍然是抗体水平的监测，抗体滴度是指导疫病防治工作的重要指标。结合本次调查分析结果，河东区养鸡业新城疫的防控应该采取以下措施：首先提高从业者的综合素质以及对新城疫病毒的深入了解，让广大养殖场户深刻的认识到新城疫病毒防控的紧迫性及持续做好流行病学调查与抗体水平监测等工作的重要性。提高养殖场的应急处置能力，从而把风险和损失降至最低。其次，要制定科学规范的免疫程序，根据抗体水平监测结果及时更新和调整相应的免疫程序，尽可能提高疫苗的免疫效果。最后，加强饲养管理，饲料补给方面，以满足长势营养需求为主，注意补充硒元素和各种维生素，确保不同阶段的鸡的营养需求。同时要注意饲养环境的管理，加强通风管理，确保舍内空气清洁卫生，注意防控各类不良应急，可尝试用电解多维等，达到抗应激的目的[7]。另外，规模鸡场尽量做到全进全出，对于鸡场新城疫防控来说也是一项十分有效的举措。

5 小结

通过对2020—2022 年河东区鸡新城疫免疫抗体合格率、不同高发季节抗体合格率、规模场和散养户以及种鸡场的免疫抗体水平监测及分析来看，养鸡场户经过每年春秋两次新城疫的全面免疫，免疫抗体合格率虽有高有低，但基本处于较高水平，超过了国家农业部规定的70%以上的标准[8]。另外从规模场和散养户的对比数据来看，规模场抗体合格率高出散养场14.5%，可见规模场免疫工作做得更加细致到位，散养户虽然养殖条件方面相对差，但也应该强化思想认识，做到规范免疫，尽量提高抗风险能力。从河东区种鸡场抗体合格率来看三年来稳定在98%以上，基本做到了免疫无疫。