海南地区癫痫儿童HLA-B*1502基因与芳香族抗癫痫药物治疗后皮肤型药物不良反应的相关性研究

钟莉莉, 陈 君, 王榆雅, 洪绵慧, 张 泷

(海南省人民医院/海南医学院附属海南医院, 1. 药学部, 2. 儿科, 海南 海口, 570311)

癫痫在儿童中较为常见, 其根治难度大,患儿病情易反复发作。癫痫主要由脑细胞群异常超同步化放电所致,导致脑功能处于紊乱状态,症状表现为全身肌肉阵挛性、强直性抽搐,伴有意识改变,病情反复发作可导致患儿精神行为异常、智力减退,严重情况下可致死[1]。目前,抗癫痫药物是治疗该病的主要方式,常用药物为芳香族抗癫痫药物(AEDs), 包括奥卡西平、苯巴比妥、拉莫三嗪、卡马西平等[2]。癫痫治疗是一个较长的过程,长期使用AEDs会引起诸多不良反应,常见表现为药物超敏综合征、斑丘疹等,严重反应为Stevens-Johnson综合征(SJS)、药物超敏综合征(DHS)等,临床将这类反应称之为皮肤型药物不良反应(cADRs), 轻度者通常在停药后能够自行缓解,但需更换药物治疗,严重者则可能导致死亡[3]。目前, cADRs的发生机制尚未彻底明确,有研究[4]认为与人类白细胞抗原基因B(HLA-B)多态性有关。HLA-B*1502基因作为HLA-B的一员,也参与了cADRs的发生[5], 但其与cADRs的具体关系还有待研究。本研究纳入100例癫痫儿童进行观察,分析HLA-B*1502基因与芳香族AEDs治疗后cADRs的相关性,现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2020年1月—2022年7月收治的100例癫痫儿童为研究对象,均使用芳香族AEDs治疗,并根据是否发生cADRs分成cADRs组(n=32)与非cADRs组(n=68)。纳入标准: ① 符合《临床诊疗指南: 癫痫病分册》[6]中的诊断标准,经脑电图检查结合症状表现证实者; ② 年龄≤14岁者; ③ 使用芳香族AEDs治疗者; ④ 均为海南本地患儿; ⑤ 有监护人陪同者,且对研究知情同意。排除标准: ① 近2个月内使用过非芳香族AEDs治疗者,因其他药物引起cADRs; ② 合并肝、肺、肾、心等脏器疾病者; ③ 存在免疫系统、血液系统以及精神类疾病者; ④ 存在糖尿病、甲状腺异常等遗传代谢性疾病者; ⑤ 合并肿瘤疾病者。2组患儿基线资料比较,差异无统计学意义(P>0.05), 见表1。本研究方案已获得伦理委员会同意。

表1 2组患儿基线资料比较

1.2 检测方法

采集受试者静脉全血3 mL, 置于抗凝管[含乙二胺四乙酸(EDTA)]行抗凝处理,存放于4 ℃环境中。在处理样本前,上下颠倒充分混匀; 取血样200.0 μL以及氯化铵1.2 mL, 充分混匀,室温下放置5 min; 3 000转/min离心5 min, 弃上清液,取生理盐水1.0 mL加入,使白细胞悬浮; 3 000转/min离心5 min, 弃上清液,取核酸纯化试剂30.0～50.0 μL加入,充分吹打混匀,在室温下放置30 min; 最终获取白细胞混悬液,并经数字荧光染色原位杂交法测定HLA-B*1502基因表达。取白细胞混悬液1.8 μL加入测序反应通用试剂内,颠倒混匀,根据录入样本信息位置依次置于荧光检测仪内。本研究包括HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB这2个检测位点,记录HLA-B*1502基因分型与等位基因频率,HLA-B*1502TA位点包括CC、GC、GG基因型,HLA-B*1502TB位点包括CC、CT以及TT基因型,分析HLA-B*1502基因与cADRs的相关性。HLA-B*1502基因型频率=等位基因数/(总例数×2)。

1.3 诊断标准与亚分组

诊断标准[7]: ① 轻微反应。轻度的斑丘疹无需特殊处理,停药后2～3 d症状缓解。② SJS与中毒性表皮坏死松解症(TEN)。这类为重型药疹,皮肤可见大疱,伴有广泛黏膜损伤,可累及消化道、咽喉部、口腔、呼吸道、肛周、外阴等部位。若表皮剥脱面积占皮肤表面积的比率<10%, 则提示为SJS型; 若表皮剥脱面积占皮肤表面积的比率为10%～30%, 则提示为TEN与SJS重叠型; 若表皮剥脱面积占皮肤表面积的比率>30%, 则提示为TEN型。③ DHS。此类属于重型药疹,主要特点为发热、皮疹、内脏损害,皮肤可见红斑丘疹,主要好发于躯干、面部与上肢部位,丘疹颜色逐渐变暗,待消退后可见色素沉着,维持时间达数月或者数年。根据cADRs患儿的反应程度,将轻微反应者纳入轻微组, SJS、TEN以及DHS者纳入重型组。

1.4 统计学分析

采用SPSS 20.0软件导入数据信息,以[n(%)]描述计数资料,比较行χ2检验,基因分型比较自由度为2, 等位基因频率比较自由度为1。以均数±标准差描述计量资料(呈正态分布),比较行t检验。采用Logistic回归方法分析HLA-B*1502基因与cADRs的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2组HLA-B*1502不同位点的基因分型比较

cADRs组HLA-B*1502TB位点的CT型比率高于非cADRs组,CC型比率低于非cADRs组,差异有统计学意义(P<0.05); 2组HLA-B*1502TA位点的基因型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 2组HLA-B*1502不同位点的基因分型比较[n(%)]

2.2 2组HLA-B*1502基因的等位基因频率比较

cADRs组HLA-B*1502TB位点的T等位基因频率为37.50%, 高于非cADRs组的18.38%, 差异有统计学意义(P<0.05); 2组HLA-B*1502TA位点的等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 2组HLA-B*1502基因的等位基因频率比较

2.3 轻微组与重型组HLA-B*1502基因分型比较

在32例发生cADRs的患儿中,轻微组20例,重型组12例。轻微组与重型组HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB位点的基因分型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 轻微组与重型组HLA-B*1502基因分型比较[n(%)]

2.4 轻微组与重型组HLA-B*1502基因的等位基因频率比较

轻微组与重型组HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB位点的等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05), 见表5。

表5 轻微组与重型组HLA-B*1502基因的等位基因频率比较

2.5 患儿HLA-B*1502基因型与cADRs发生风险的相关性分析

鉴于cADRs组与非cADRs组HLA-B*1502TA位点的基因型差异无统计学意义(P>0.05), 故此处无需将其纳入风险分析。结果显示,HLA-B*1502TB位点的CT基因分型及T等位基因会增加癫痫儿童芳香族AEDs治疗后cADRs的发生风险,差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

表6 患儿HLA-B*1502基因型与cADRs发生风险的相关性分析

3 讨 论

芳香族AEDs是治疗癫痫的常用药物,但这类药物容易引起不良反应,包括血液系统不良反应、中枢神经不良反应、代谢异常、cADRs等,其中以cADRs最为常见,轻者停药后症状可消失,而一旦出现SJS、TEN、DHS等重型反应,对身体影响较大,会耽误癫痫治疗进程[8]。AEDs治疗后cADRs的发生机制比较复杂,可能与免疫反应、易感基因等因素有关[9]。张祥等[10]发现HLA-B类基因与抗癫痫药物所致的重症药疹存在相关性,其中HLA-B*40:01可能对预防重症药疹有保护作用。民福利等[11]指出,HLA-B*13:01基因与汉族人群AEDs治疗后引起的交叉过敏反应存在关联,是诱发交叉过敏反应的一种危险基因型。由此可见,HLA-B类基因在cADRs发生过程中发挥了重要的调控作用,且基因类型不同,对疾病的影响也不同。HLA-B*1502作为HLA-B类基因的亚型,与cADRs发生也有关联[12]。但现阶段对于海南地区癫痫患儿HLA-B*1502基因与cADRs的关系尚未彻底明确,通过了解该地区患儿cADRs的发生机制,有望为后续治疗提供依据。

本研究结果显示, cADRs组HLA-B*1502TB位点的CT型比率增高, CC型比率下降, T等位基因频率显著上调,提示HLA-B*1502TB位点携带CT基因型及T等位基因的患儿更容易发生cADRs。SARGENT B等[13]认为,在实施卡马西平治疗前,针对高危人群进行HLA-B*1502基因检测很有必要,对于预防TEN有一定的作用,也提示HLA-B*1502基因与药疹发生有关。HLA-B*1502的CT基因分型及T等位基因参与cADRs的机制尚未明确,可能与药物-免疫受体机制相关, AEDs以及代谢物能与HLA-B*1502基因结合的多肽进行非共价结合,形成药物-免疫受体机制,即药物及其代谢产物与多肽、蛋白共价结合,经细胞处理后传至主要组织相容性复合体分子,导致HLA特异性T细胞激活,介导毒副作用的发生[14]。因此,临床要尤为重视对癫痫儿童HLA-B*1502基因的检测,预估cADRs的发生风险,以便给予针对性的治疗。

SJS、TEN以及DHS是较为严重的cADRs类型,其中SJS与TEN可以共存,患者的前驱症状包括腹泻、头痛、发热、关节疼痛等,随之突然发生皮肤黏膜受损,表现为丘疹、大疱、水泡、红斑等,随着红斑扩大,可造成典型的靶形损害,红斑融合成片,伴有紫癜[15]。重型反应者的黏膜损害波及范围非常广,包括肛周、口腔、咽喉部、消化道、呼吸道等,以口腔黏膜受损最为常见,可导致张口困难,对进食造成较大的影响[16]。本研究中,轻微组与重型组HLA-B*1502基因分型与等位基因频率比较无显著差异,提示HLA-B*1502基因可能与cADRs严重程度无关联,但本研究纳入样本量较少,还有待后续的进一步论证。本研究结果显示,HLA-B*1502TB位点的CT基因分型与T等位基因频率可导致海南地区癫痫儿童AEDs治疗后cADRs的发生风险增高,证实HLA-B*1502基因与cADRs发生风险具有相关性。皮肤反应的发生机制主要与免疫反应相关,这类患者皮损部位大多能检测出自然杀伤细胞、毒性T细胞以及炎症细胞[17]。HLA-B*1502基因能促进药物-免疫受体机制的形成,对毒副反应有诱导作用,容易引起皮肤过敏反应。本研究结果显示,i导HLA-B*1502TA位点的基因分型及等位基因频率与海南地区癫痫儿童芳香族AEDs所致的cADRs发生无关。基于此结果,在海南地区癫痫儿童治疗前,通过检测HLA-B*1502TB位点,能为临床干预提供依据,有利于尽早预测cADRs发生风险,采取预防措施。