冠心病病人血清lncRNA TUG1和miR-140-3p水平与血清炎性因子、斑块稳定性指标的相关性

孙 静,石丽媛,康美丽

冠心病是一种缺血性心脏病,近年来发病率呈升高趋势,在临床实践中,冠心病主要预防措施包括改变生活习惯、药物干预、手术及定期检测相关指标等[1-2]。长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long non-coding RNA taurine up-regulated gene 1,lncRNA TUG1)及微小RNA-140-3p(microRNA-140-3p,miR-140-3p)与冠心病有密切联系,且二者之间存在调控关系[3-5]。流行病资料表明,全身炎症增加与心血管事件风险增加存在一致的关系,心血管疾病病人斑块炎症严重程度与斑块稳定性密切相关[6]。本研究探讨冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平与炎性因子、斑块稳定性指标的相关性,以期为冠心病的治疗及发病机制的探讨提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年9月—2021年8月我院收治的140例冠心病病人为研究对象,其中稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP)病人(SAP组)68例,男32例,女36例,年龄40～76(52.64±10.53)岁;不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)病人(UAP组)72例,男38例,女34例,年龄42～74(52.77±10.81)岁。同期选取66名健康体检者为对照组,男35名,女31名,年龄40～74(51.98±10.84)岁。

纳入标准：冠心病诊断符合SAP和UAP的诊断标准[7-8],并经冠状动脉CT血管成像检查证实;劳累或休息时有明显的心绞痛等冠心病临床症状;病历资料完整。排除标准：合并恶性肿瘤;近期有抗炎、抗凝治疗史或既往有冠状动脉介入等治疗史;合并严重肝、肾功能障碍疾病;合并感染、自身免疫系统疾病。

1.2 方法

1.2.1 血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平检测 抽取健康体检者体检时及冠心病病人确诊后24 h内静脉血,静置30 min,以3 000 r/min离心10 min后收集上层血清,置于-80 ℃冰箱待检。按照Trizol试剂盒(沈阳万类生物科技有限公司)说明书对血清总RNA进行提取,检测其浓度和纯度,质检合格后按照逆转录试剂盒(上海研卉生物科技有限公司)说明书对总RNA进行逆转录操作(逆转录为cDNA),之后采用7500型实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)仪器检测血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平,以GAPDH及U6为内参,软件设计引物后由北京鼎国生物科技有限公司合成,引物序列见表1。血清lncRNA TUG1、miR-140-3p相对表达水平采用2-△△CT法计算,各样本均重复进行3次。qRT-PCR反应条件：95 ℃ 5 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,45个循环。详见表1。

表1 qRT-PCR引物序列(5′-3′)

1.2.2 血清炎性因子及斑块稳定性指标检测 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎性因子白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、IL-18、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)及斑块稳定性指标正五聚素-3(pentraxin 3,PTX3)、脂蛋白相关磷脂酶-A2(lipoprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)、成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor-23,FGF23)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)水平。IL-6、IL-1β、IL-18试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司,CRP、TNF-α、sICAM-1试剂盒均购自武汉益普生物科技有限公司,PTX3试剂盒购自上海富雨生物科技有限公司,Lp-PLA2、FGF23、MMP-9试剂盒均购自上海瓦兰生物科技有限公司。采用高频探头(频率7～15 MHz)的AU5彩色多普勒超声诊断仪(德国百胜公司)测量健康体检者及冠心病病人颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉及分叉处的内膜-中层厚度(intima-media thickness,IMT)。

2 结 果

2.1 3组血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平比较 UAP组血清lncRNA TUG1水平高于SAP组和对照组,miR-140-3p水平低于SAP组和对照组(P<0.05);SAP组血清lncRNA TUG1水平高于对照组,miR-140-3p水平低于对照组(P<0.05)。详见表2。

表2 3组血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平比较(±s)

2.2 3组血清炎性因子水平比较 UAP组血清炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1水平均高于SAP组和对照组(P<0.05);SAP组血清炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1水平均高于对照组(P<0.05)。详见表3。

表3 3组血清炎性因子水平比较(±s)

2.3 3组斑块稳定性指标比较 UAP组斑块稳定性指标IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9均高于SAP组和对照组(P<0.05);SAP组斑块稳定性指标IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9均高于对照组(P<0.05)。详见表4。

表4 3组斑块稳定性指标比较(±s)

2.4 冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平与炎性因子、斑块稳定性指标的相关性 Pearson法分析结果显示,SAP、UAP病人血清lncRNA TUG1与miR-140-3p水平均呈负相关(r值分别为-0.522,-0.586,P<0.001),且炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1及斑块稳定性指标IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9与lncRNA TUG1均呈正相关(P<0.001),与miR-140-3p均呈负相关(P<0.001)。详见图1、图2和表5、表6。

图1 SAP病人血清lncRNA TUG1与miR-140-3p水平的相关性分析散点图

图2 UAP病人血清lncRNA TUG1与miR-140-3p水平的相关性散点图

表5 SAP病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平与炎性因子、斑块稳定性指标的相关性

3 讨 论

冠心病是常见的心脏疾病,根据心肌缺血程度不同分为SAP、UAP及急性心肌梗死,其发病机制复杂,血小板聚集、血管炎症反应及血管内皮损伤等均参与冠心病动脉粥样硬化[9]。冠心病特点是脂质和免疫细胞在冠状动脉内皮下空间或动脉管壁中积聚,这一过程涉及血管内皮的炎症反应[10]。尽管冠心病的治疗已取得了巨大的进步,但在世界范围内,冠心病是导致死亡的主要原因,说明目前冠心病诊断、治疗等方法仍存在不足[11]。lncRNA TUG1是一种在损伤血管内皮细胞中高表达的RNA,通过调控内皮细胞增殖、凋亡等过程参与血管内皮细胞损伤,进而在心血管疾病中发挥着重要作用[12]。本研究对冠心病病人血清lncRNA TUG1水平的检测结果与既往研究结果[13]一致,SAP、UAP病人血清lncRNA TUG1水平均升高,且UAP病人高于SAP病人。提示lncRNA TUG1高表达参与冠心病的发生发展。既往研究显示,炎症反应在冠心病的发病过程中发挥着重要作用,炎性因子水平可预测冠心病发展,炎症是冠状动脉粥样硬化斑块破裂的重要病理机制[14-15]。

IMT、PTX3、Lp-PLA2是反映冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的重要指标,其水平升高提示斑块稳定性降低[16]。本研究中lncRNA TUG1与IL-6、CRP、IMT、PTX3等炎性因子及斑块稳定性指标均呈正相关。因此推测lncRNA TUG1可能通过增强炎症反应损伤血管内皮细胞,进而增加动脉粥样硬化斑块不稳定性,参与冠心病发生发展。

Zhu等[17]研究显示,miR-140-3p在外周动脉疾病中显著下调,且可能参与支架内再狭窄。冯六六等[18]研究表明,miR-140-3p是冠心病病人经皮冠状动脉介入术后支架内再狭窄的影响因素。上述研究说明miR-140-3p可能参与冠心病的发生发展。本研究相关性结果显示,miR-140-3p水平降低可能导致炎性因子水平升高,炎症反应加剧,进一步损伤血管内皮功能,发生恶性循环,造成动脉粥样硬化斑块不稳定性增加,加重病情,发生心血管不良事件。本研究结果显示,lncRNA TUG1与miR-140-3p呈负相关。推测lncRNA TUG1可能通过负向调节miR-140-3p表达进而参与冠心病的发生发展。

综上所述,冠心病病人血清lncRNA TUG1水平异常升高,miR-140-3p水平异常降低,二者水平均与炎性因子及斑块稳定性指标相关。lncRNA TUG1、miR-140-3p在冠心病早期诊断及病情评估中可能有重要价值,今后可在临床实践中进一步验证。