痤疮患者血清中Th1细胞和Th17细胞活化水平与病情严重程度的关系研究

孔玉龙，袁廷艳，沈永强，虞冬琴

[摘要]目的：研究痤瘡患者血清中辅助性T细胞1（T helper cell 1，Th1）和辅助性T细胞17（T helper cell 17，Th17）活化与病情严重程度的关系。方法：选取2019年6月-2021年6月笔者医院就诊的143例痤疮患者，根据Pillsbury法将其分为轻度48例、中度55例及重度40例。比较不同患者病情严重程度、一般资料、Th1细胞和Th17细胞水平。采用Pearson相关系数分析Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度的关联性，采用Logistic回归分析重度痤疮的影响因素。结果：不同病情严重程度痤疮患者年龄、家族史、治疗情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；重度痤疮患者男性、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每天使用手机或电脑时间、皮肤类型为油性占比大于轻中度患者，痤疮初发年龄、每日睡眠时间小于轻中度患者（P＜0.05）；随着痤疮病情程度的加重，Th1细胞和Th17细胞水平呈逐渐升高趋势（P＜0.05）；经Pearson相关性分析，痤疮患者Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度呈正相关（P＜0.05）；经Logistic回归分析，性别、痤疮初发年龄、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每日睡眠时间、每天使用手机或电脑时间、皮肤类型油性、Th1细胞及Th17细胞均为重度痤疮的影响因素（P＜0.05）。结论：痤疮患者病情严重程度与Th1细胞和Th17细胞水平呈现密切相关性，且为重度痤疮发生的影响因素。研究Th1细胞和Th17细胞可为痤疮的病情进展机制研究及临床治疗提供新思路。

[关键词]痤疮；Th1细胞；Th17细胞；病情严重程度；关联性

[中图分类号]R758.733    [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2023）04-0080-04

Activation of Th1 Cells and Th17 Cells in Serum of Patients with Acne and Correlation with the Severity of Illness

KONG Yulong，YUAN Tingyan，SHEN Yongqiang，YU Dongqin

（Department of Dermatology，Nanjing Jiangbei Hospital Affiliated to Nantong University，Nanjing 210048，Jiangsu，China）

Abstract： Objective  To study the relationship between the activation of T helper cell 1 （Th1） and T helper cell 17 （Th17） in patients with acne，and analyze their correlation with the severity of illness. Methods  One hundred and forty-three patients with acne in our hospital from June 2019 to June 2021 were selected and divided into 48 cases of mild， 55 cases of moderate and 40 cases of severe according to Pillsbury method. The general data of different disease severity and Th1 cells and Th17 cells were compared. Pearson correlation analysis was used to analyse the association between Th1 and Th17 cell levels and severity of the condition， and logistic regression was used to analyze the influencing factors of severe acne. Results  There was no significant difference in age， family history and treatment among acne patients with different severity （P＞0.05）. The patients with severe acne， male， the preference for greasy or spicy diet， smoking or drinking， the time of using mobile phone or computer every day， and the skin type of oily accounted for more than those with mild and moderate acne， and the initial age of acne and daily sleep time were less than those with mild and moderate acne （P＜0.05）. With the aggravation of acne， Th1 cells and Th17 cells increased gradually （P＜0.05）. Pearson correlation analysis showed that Th1 cells and Th17 cells were positively correlated with the severity of acne （P＜0.05）. By logistic regression analysis， gender， initial age of acne， dietary preference， greasy or spicy， smoking or drinking， daily sleep time， daily use of mobile phone or computer， skin type， oily， Th1 cells and Th17 cells were the influencing factors of severe acne （P＜0.05）. Conclusion  The severity of acne patients is closely related to Th1 cells and Th17 cells， and they are the influencing factors of severe acne， which can provide new ideas for the study of the mechanism of acne progression and clinical treatment.

Key words： acne; Th1 cells; Th17 cells; severity of illness; relevance

痤瘡是临床常见慢性炎症性皮肤病，多见于青春期，好发于面部及胸背部，表现为丘疹、粉刺、脓疱等，可严重影响患者生理与心理健康[1-2]。近年来多项研究指出，免疫功能失衡在炎症发展中起关键作用，是痤疮发病的重要因素之一[3-5]。Th1细胞、Th17细胞均为CD4+T细胞亚群，可分泌多种促炎因子，促进组织发生慢性炎症反应，破坏细胞外基质，并诱发自身多种免疫性疾病，对痤疮等多种皮肤病具有一定影响[6]。本研究选取143例痤疮患者，分析Th1细胞、Th17细胞与患者痤疮严重程度的关系，探讨Th1、Th17细胞在痤疮病情发展中的作用，从而为临床治疗提供理论基础。现报道如下。

1  资料和方法

1.1 临床资料：选取2019年6月-2021年6月就诊于笔者医院的143例痤疮患者为研究对象。纳入标准：所有患者均符合《中国痤疮治疗指南》中的诊断标准[7]；主要皮损表现为毛囊性丘疹、粉刺黑头、结节、脓疱、瘢痕、囊肿，多发于面部、上胸部、背部等皮脂腺发达部位，且一般呈对称分布；痤疮分级明确；患者依从性较好；患者或家属均签署知情同意书。排除标准：孕妇或哺乳期女性；合并心肝肾或免疫系统疾病者；近1个月内使用过糖皮质激素或其他类型免疫抑制剂者；合并严重过敏性疾病者；精神或意识障碍无法配合治疗或检查者。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 问卷调查：按照统一标准向患者发放自制流行病学调查问卷，经预实验，本问卷评估一致性信度Cronbach＇s α=0.94，效度系数为0.82。问卷由患者自行填写，并当场回收，内容包括性别、年龄、家族史、痤疮初发年龄、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每日睡眠时间、每天使用电脑时间、皮肤类型为油性、治疗情况（维A酸类药物、过氧化苯甲酰、抗生素、二硫化硒、果酸、光动力疗法、激光疗法）。

1.2.2 血清Th1细胞和Th17细胞水平测定[8]：所有患者均于入院后第2 天早晨空腹采集3 ml静脉血于肝素抗凝管中，采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），采用流式细胞术检测Th1细胞和Th17细胞。将CD3-FITC、CD4-PC5单克隆抗体加入至PBMC中，混匀后在室温、避光下孵育，时间为20 min，采用RPMI-1640培养液洗涤后，将细胞加入至RPMI-1640培养体系（10%新生牛血清+1 ?g/ml离子霉素+50 ng/ml PMA+3 ?mol/L莫能霉素）中，然后稀释细胞浓度至1×106/ml，并于37℃培养箱中进行孵育，时间为18 h；然后采用固定破膜剂固定、破膜，加入PE-抗人IL-17单克隆抗体、PE-抗人IFN-γ单克隆抗体（均购自美国eBioscience公司），设置对照管加入同型对照抗体，孵育30 min并洗涤，采用流式细胞仪（北京友华照钦医疗器械有限公司，型号Dxflex）检测Th1、Th17细胞，并计算外周血Th1、Th17占CD4+T细胞的比例。

1.2.3 病情严重程度评估：采用Pillsbury法进行临床分级[9]，其中主要皮损为散发至多发的黑头粉刺，伴有散发炎性丘疹，总病灶数10～30个为Ⅰ级（轻度）；主要皮损为粉刺，存在浅在性脓疱与中等数量丘疹，局限于面部，总病灶数31～50个为Ⅱ级；主要皮损为炎性脓疱与丘疹，存在深在性脓疱与炎性皮损，多发于面部、颈部、胸背部，总病灶数51～100个，且存在结节与囊肿，但数量＜3个为Ⅲ级（Ⅱ、Ⅲ级为中度）；存在大量脓疱与丘疹，多发于上半身，总病灶数＞100个，存在结节与囊肿，且数量≥3个为Ⅳ级（重度）。

1.3 统计学分析：采用SPSS 22.0对数据进行分析，计数资料以[例（%）]表示，行χ2检验；计量资料以（x?±s）表示，行F检验；采用Pearson分析Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度的关联性；采用Logistic回归分析重度痤疮的影响因素；以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2  结果

2.1 病情严重程度情况评估：共发放问卷143份，回收143份，回收率为100%；143例痤疮患者中经临床Pillsbury法分级，其中轻度48例，中度55例，重度40例。Pillsbury法临床分级示意图，见图1。

2.2 一般资料：对不同病情严重程度的痤疮患者年龄、家族史、治疗情况进行比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；重度痤疮患者多为男性、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每天使用手机或电脑时间、皮肤类型为油性占比均大于轻中度患者，痤疮初发年龄、每日睡眠时间小于轻中度患者，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.3 不同病情严重程度Th1细胞和Th17细胞水平比较：随着痤疮病情程度的加重，Th1细胞和Th17细胞水平呈逐渐升高趋势（P＜0.05）。见表2。

2.4 Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度的关联性分析：经Pearson相关性分析，痤疮患者Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度呈正相关（r1=0.459，P1=0.025；r2=0.510，P2=0.011）。

2.5 重度痤疮的影响因素分析：以性别、痤疮初发年龄、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每日睡眠时间、每天使用手机或电脑时间、皮肤类型油性、Th1细胞、Th17细胞为自变量，以痤疮严重程度为因变量赋值，见表3；经Logistic回归分析，性别、痤疮初发年龄、饮食喜好油腻或辛辣、吸烟或喝酒、每日睡眠时间、每天使用手机或电脑时间、皮肤类型油性、Th1细胞、Th17细胞均为重度痤疮的影响因素（P＜0.05）。见表4。

3  讨论

痤疮是由多因素引起的毛囊皮脂腺严重疾病，与痤疮丙酸杆菌、皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管过度角化等原因导致的皮脂腺调控异常有关，且饮食习惯、生活习惯等会导致痤疮的发生，近年来发现免疫功能异常也是痤疮发病因素之一[10-11]。因此，通过对免疫功能指标的监测与调控有助于痤疮患者病情的评估与治疗。

在痤疮皮损中，皮脂腺细胞、角质形成细胞均可诱导多种细胞因子的产生与表达，引起巨噬细胞、粒细胞的聚集趋化[12]；同时体液免疫、细胞免疫均会参与痤疮的发病机制，T细胞介导的细胞免疫活化反应是其中之一[13]。天然CD4+T细胞亚群在不同细胞因子环境中激活会分化为不同T细胞亚群，其中Th1细胞会产生IFN-γ、IL-2等细胞因子，而Th17细胞会产生IL-17等细胞因子，两者均会参与自身免疫性疾病的发生发展过程，目前也一致认为痤疮的发病与Th1、Th17细胞及其细胞因子有重大关系[14-15]。因此，本研究采用流式细胞仪对痤疮患者Th1、Th17细胞进行检测，结果显示随着痤疮病情程度的加重，Th1细胞和Th17细胞水平呈逐渐升高趋势（P＜0.05），并经Pearson相关性分析，痤疮患者Th1细胞和Th17细胞水平与病情严重程度呈正相关（P＜0.05）。分析其原因为Th17细胞在转化生长因子β诱导下会产生IL-17，对NF-κB具有活化作用，促进有丝分裂原-活化蛋白激酶级联反应，刺激孤核受体转录因子的产生，因此导致强烈的致炎反应[16-17]；Th17细胞还可募集中性粒细胞与巨噬细胞，从而加重炎症反应，促进痤疮病情进展[18]；此外，痤疮丙酸杆菌会诱发肉芽肿的形成，此过程涉及固有免疫应答、特异性T淋巴细胞反应、促炎因子与趋化因子的产生。分泌IFN-γ为主的Th1细胞是参与上述发生机制的主要淋巴细胞，随着病情的加重炎性反应逐步增强。免疫功能失衡时Th1细胞和Th17细胞均呈现明显活化状态，占比水平也逐渐升高。结果显示[19-20]痤疮患者存在Th1、Th17特征性细胞因子失衡状态，体液免疫与细胞免疫应答失常与痤疮患者病情严重程度密切相关，失衡越严重，痤疮严重程度越高。本研究为进一步探究Th1细胞、Th17细胞与痤疮患者病情严重程度的关系，采用Logistic进行回归分析，结果表明Th1细胞、Th17细胞均为重度痤疮的影响因素（P＜0.05），与相关研究结果一致[21]，说明免疫功能异常会影响痤疮的发生及其严重程度。因此，可将Th1、Th17细胞作为痤疮发病机制的重点研究路径，但Th1、Th17细胞在痤疮免疫功能紊乱中的具体机制及两者协同作用尚不明确，临床可通过进行多项基础研究进一步探讨两者关系。

综上，痤疮患者病情严重程度与Th1细胞和Th17细胞水平呈密切相关性，且两者是重度痤疮发生的影响因素，在痤疮等免疫性皮肤病中具有不可忽视作用，可为自身免疫疾病的治疗提供新靶点、开辟新道路。

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[收稿日期]2021-12-13

本文引用格式：孔玉龙，袁廷艳，沈永强，等.痤疮患者血清中Th1细胞和Th17细胞活化水平与病情严重程度的关系研究[J].中国美容医学，2023，32（4）：80-83.