7 种药食同源水提物对金黄色葡萄球菌的抑制作用

◎ 王 杰，乐靖雯，马诗雅，田 浩

（河北东淼检测科技股份有限公司，河北 保定 071000）

金黄色葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，也是常见的食源性致病菌，可通过污染乳制品、肉制品等蛋白质或淀粉含量丰富的食品引发食物中毒，导致人体免疫力下降，还易引发人体局部化脓性感染、肺炎、心包炎等疾病，严重时甚至会出现败血症，威胁人体生命安全[1-2]。既是食品又是中药材的物质为“药食同源物质”[3]。“药食同源”理论萌芽可追溯至战国时期，我国第一部中医理论典籍《黄帝内经》奠定了“药食同源”理论的基础[4]。药食同源物质资源丰富，是我国居民日常保健食品的重要组成部分。药食同源物质食性强于药性，性味多平和，具调养、康复、保健作用，可应用于药酒、药粥、煲汤、饮茶，极大地满足了人们日常生活中预防疾病和保健的需求[5]。本文通过研究药食同源物质对金黄色葡萄球菌的抑制作用，为控制食品中金黄色葡萄球菌的污染提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

蒲公英、胖大海、金银花、香橼、甘草、决明子和川贝母，购于北京同仁堂药房；纸片（110705062）：直径6 mm、厚度7 nm 的空白药敏纸片，购于石家庄赛迪生物科技有限公司；一次性无菌接种环（编号：GT18001-10）、一次性无菌接种针（GT18001-2）、一次性无菌培养皿（直径90 mm），购于北京陆桥技术股份有限公司；标准菌株金黄色葡萄球菌ATCC 6538，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，本研究采用三代生长期标准菌株。

1.2 仪器与试剂

TD10002C 电子天平，天津天马衡基仪器有限公司；GI54DWS 高压灭菌器，致微（厦门）仪器有限公司；H22-X3 电陶炉，九阳股份有限公司；BSC-1600 ⅡA2生物安全柜，苏州安泰空气技术有限公司；单道可调式移液器（100 ～1 000 μL），大龙共创实验仪器（北京）有限公司；LRH-250 型生化培养箱，上海齐欣科学仪器有限公司。

Mueller-Hinton 琼脂（MHA）（编号：220719）、营养琼脂（编号：220308）、营养肉汤（编号：201224），北京陆桥技术股份有限公司；氯化钠（编号：180502），天津市大茂化学试剂厂。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制备

分别称取所选的7 种中药材10 g，加入400 mL蒸馏水浸泡30 min，煮沸后再用文火煎煮30 min，用12 层纱布过滤后，加入200 mL 蒸馏水煮沸，用文火再煎煮25 min，过滤药液[6]。将两次煎煮的药液合并后，加热对其进行浓缩，得到浓度C0：0.25 g·mL-1、C1：0.50 g·mL-1、C2：0.85 g·mL-1和C3：1.00 g·mL-1的 中草药提取物。

1.3.2 水提物对金黄色葡萄球菌的抑制作用研究

按照WHO 推荐的K-B 法检测金黄色葡萄球菌对7 种药食同源水提物的敏感性。

（1）菌悬液的制备。用75%酒精擦拭装有菌株的安瓿瓶后，用手掰断瓶子的上半部分。取0.5 mL 无菌水注入菌株冻干管中，混匀为菌悬液，吸取0.2 mL菌悬液，打入NA 平板，将其涂布均匀，37 ℃培养24 h。挑取营养琼脂上单个菌落至另一营养琼脂平板上进行菌种复苏。最后挑取单菌落到液体培养基中，于36 ℃恒温培养24 h。制备金黄色葡萄球菌的菌悬液，并将此菌悬液的浓度调成0.5 麦氏浊度的菌悬液。

（2）药敏试验。将无菌棉拭子浸入金黄色葡萄球菌菌悬液中，取出后将棉拭子与试管壁间进行挤压，将过多的菌悬液弃去，把棉拭子中的菌悬液涂布到MHA 琼脂平板中（操作过程中对平板进行6 次旋转，每次转60°，后续顺着平板边缘绕两圈），确保菌悬液涂布的均匀性，室温静置3 ～5 min，至MHA 平板上没有水分。将空白药敏纸片分别置于不同浓度的中药提取物中，充分吸收药液后，转移至MHA 琼脂平板上，每个平板均匀放置3 个药敏纸片。以无菌水浸湿的药敏纸片作为空白对照，将平板放入36 ℃生化培养箱中，培养24 h，用游标卡尺测量抑菌圈直径并记录数据。每种中药水提物做9 组，每组做3 个平行。

1.4 数据处理

本研究数据采用SPSS 20.0 进行处理与分析，结果用（±s）的形式表述。

2 结果与分析

7 种药食同源物质水提物的抑菌效果见图1。蒲公英提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为6.02 mm、10.41 mm、17.94 mm，标准偏差分别为0.02、1.12、0.97。金银花提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为9.66 mm、12.66 mm、18.09 mm、19.66 mm，标准偏差分别为0.52、0.72、0.71、0.79。甘草提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为9.14 mm、12.18 mm、14.24 mm、18.59 mm，标准偏差分别为0.87、0.75、0.81、0.94。决明子提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为6.02 mm、9.96 mm、12.75 mm，标准偏差分别为0.02、0.78、2.70。胖大海提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为6.02 mm、8.48 mm、11.09 mm，标准偏差分别为0.02、0.59、1.28。香橼提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为6.02 mm、8.53 mm、12.44 mm，标准偏差分别为0.02、1.07、1.21。川贝母提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直径的平均值分别为6.02 mm、6.03 mm、8.92 mm，标准偏差分别为0.02、0.02、0.52。

图1 7 种食药同源水提物对金黄色葡萄球菌的抑制效果图

由图1、表1 可知，7 种药食同源物质的水提物的抑菌效果均随着浓度的增加而增强，蒲公英提取物中，C3浓度的抑菌圈直径最大，抑菌效果最好，C1抑菌圈直径与空白药敏纸片相同，没有明显抑制作用。金银花提取物浓度C2和C3抑菌圈直径相近，抑菌效果相差不明显，C0的抑菌圈直径最小，抑菌效果较差。甘草提取物浓度C3的抑菌圈直径最大，抑菌效果最好；C2、C1和C0的抑菌圈直径依次减弱，抑菌效果依次减弱，但均对金黄色葡萄球菌生长和繁殖有一定的抑制作用。决明子浓度C3的抑菌圈直径最大，抑菌效果最好，空白药敏纸片抑菌圈直径为6 mm，浓度C1抑菌圈直径与其几乎相同，表明决明子C1提取物对金黄色葡萄球菌没有明显抑制作用。浓度为C3的胖大海提取物的抑菌圈直径最大，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最明显；浓度为C1的胖大海提取物与空白药敏纸片抑菌圈直径相同，证明其对金黄色葡萄球菌几乎没有抑制作用。浓度为C2和浓度为C3的香橼提取物对金黄色葡萄球菌有抑制作用，浓度越大抑菌圈直径越大。浓度为C3的川贝母提取物对金黄色葡萄球菌有抑制作用，浓度为C2和浓度为C1的川贝母提取物对金黄色葡萄球菌几乎没有抑制作用。

表1 药食同源水提取物抑菌圈直径表（浓度：1.00 g·mL-1）

本次试验结果表明，蒲公英、金银花、甘草、决明子、胖大海、香橼和川贝母7 种中药提取物对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌效果最好的是蒲公英、金银花和甘草。中药提取物浓度越高，试验的抑菌圈越大，抑菌效果越好。与对照组相比，蒲公英、金银花、甘草、决明子、胖大海、香橼和川贝母7 种中药的水提取物对金黄色葡萄球菌均有显著抑制作用。

3 讨论

我国中草药资源丰富，分布广泛，价格低廉。文献记载蒲公英具有广谱抑菌作用、抗炎作用、抗氧化作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、螺旋体、真菌等多种病原体微生物均有不同程度的抑制作用[7]。孟然等[8]研究表明，蒲公英中含有能抑制金黄色葡萄球菌的有效成分，蒲公英水提物、醇提物均有抑制作用。绿原酸是金银花中的主要抗菌成分，其溶于水，金银花水提物能起到一定的抗炎作用[9]。甘草中一些活性成分具有较好的抗菌消炎作用，被普遍应用于食品行业中。决明子作为一种药食同源物质，常被添加到保健食品中，有润肠通便、清肝明目等功效。

本文研究的7 种药食同源水提物对金黄色葡萄球引发的相关疾病都有预防和辅助治疗的作用。近年来，随着抗生素使用后不良反应的产生和细菌耐药性的增强，新型抗菌药物的研究已成为热门研究课题。天然药食同源物质一般无抗药性或抗药性较小，对人体作用多以提高免疫、增强体质为主，与使用抗生素相比，从中草药中筛选抑菌药物，显然是一种快速、安全、有效的方法[10-11]。药食同源物质良好的抑菌作用使其成为我国新型抗菌药物的重点研究对象，为研究和开发抗耐药菌的药物开辟了新途径。