ABCA1基因多态性与女性2型糖尿病患者心血管事件风险的研究

夏津滨，王昀，王晨，刘鹏

糖尿病（diabetes mellitus，DM）是全世界卫生保健系统面临的一个严重的持续问题[1]。且该病呈现高发病率，根据国际糖尿病联盟（IDF）测算，截至2040年全球将约有6.42亿糖尿病患者，约占全球成年人口的8.8%[2]。此外，死于其并发症的问题日益突出，在20～79岁年龄范围内，糖尿病占全球死亡率的6.8%，是人类预期寿命缩短的主要原因[3]。虽然全球成人女性糖尿病患病率比男性略低（9.0% vs.9.6%），然而女性糖尿病患者死亡人数高于男性[4]。糖尿病是心血管疾病的重要危险因素，但女性因糖尿病引起的冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的相对风险高于男性[5]。最近一项涉及5 162 654例参与者关于糖尿病与心血管疾病和各种原因死亡率之间关系性别差异的荟萃分析显示，与患有相同疾病的男性相比，患有糖尿病的女性患冠心病死亡的风险高出58%[6]。因此，确定女性糖尿病患者的潜在易感基因位点势在必行。

ABCA1调控人体胆固醇流出减少的主要基因之一，ABCA1基因rs2230806的基因座在胆固醇流出中具有重要作用[7]。前期研究发现rs2230806也是最广泛研究的常见错义多态性，对亚洲人的研究报道ABCA1 SNP（rs2230806，也称R219K或G1051A）与2型糖尿病相关[8]。本研究探讨ABCA1基因rs2230806位点多态性与女性糖尿病患者动脉粥样硬化病变程度的关系，分析结果如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象参照WHO（1999）指南对糖尿病诊断标准，在北京中医医院顺义医院内分泌科纳入年龄18～75岁的196例女性2型糖尿病患者及90例女性健康志愿者作为对照组。所有患者均已签署知情同意书，本研究经北京中医医院顺义医院伦理委员会审批通过。

1.2 基因多态性采集研究者的年龄、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）等水平。使用以下方程计算动脉粥样硬化指数（AI）：AI =[（TC）-（HDL-C）]/[HDL-C]。收集研究者外周静脉血，QIAamp DNA Blood Mini Kit（德国Qiagen公司）提取基因组DNA，用TaqMan SNP基因分型分析试剂盒（美国Applied Biosystems公司）和ABI PRISM 7500 fast序列检测系统对患者样品进行基因分型。上游引物5’-GTGTCCTGTCATTGT GCCTTGT-3’，下游引物5’-CTCCCAGCCAGCCGTACTTT-3’。PCR程序为95 ℃预孵育10 min，92 ℃变性15 s，60 ℃延伸60 s，共计40个循环。随机选择PCR产物进行DNA测序验证以确认基因分型的准确性。

1.3 统计学分析统计分析软件采用SPSS 22.0软件包，临床数据计数资料以例数（构成比）及以均值±标准差（±s）表示，并通过卡方检验进行测试以检测患者临床特征的差异。使用卡方检验比较了SNP的Hardy-Weinberg平衡分析以及SNP的基因型和等位基因频率。通过三种遗传模型（加性，显性和隐性）的多变量逻辑回归分析，同时对年龄和性别进行校正。

2 结果

2.1 糖尿病患者及健康志愿者的人口统计学和临床特征本研究共纳入286例参与者，其中糖尿病组196例；健康志愿者组90例。两组的各临床特征中，年龄、HDL-C、LDL-C、AI差异均有统计学意义（P＜0.05），表1。

表1 健康志愿者组与糖尿病组各临床指标的比较

2.2 ABCA1 rs2230806基因型和等位基因频率分布糖尿病组与健康志愿者组两组基因型和等位基因频率均在Hardy-Weinberg平衡内（P＞0.05），且其次要等位基因频率超过5%。两组基因型均有统计学差异（基因型频率，P=0.015）；但等位基因频率之间无统计学差异（等位基因频率，P =0.058），表2。

表2 ABCA1 rs2230806基因型和等位基因频率分布

2.3 ABCA1 rs2230806基因多态性与女性2型糖尿病的关系通过三种统计模型（加性，显性和隐性）来检验rs2230806多态性与女性2型糖尿病的基因型关联。在加性模型中，发现以AA作为参照，GG基因型的女性2型糖尿病风险显着降低[AA vs.AG、GG；优势比（OR）1.598；95%CI：0.805～3.147；P=0.016]；在隐性模型中，发现以AA+AG作为参照，GG基因型的DM风险显着降低（AG+AA vs.GG；OR=2.040；95%CI：1.217～3.412；P=0.007）；在显性模型中差异无统计学意义。根据年龄校正后，三种模型均无统计学意义，表3。

表3 ABCA1 rs2230806基因多态性与糖尿病的关系

3 讨论

由于女性糖尿病患者的发生心血管事件的概率大于男性患者，因此，早期预测女性糖尿病的动脉粥样硬化发病风险尤为重要。rs2230806多态性控制肽的残基219处的精氨酸被赖氨酸取代，这种替代可能会影响ABCA1的功能，从而导致胆固醇逆向转运的第一步受阻，影响机体胆固醇代谢[9]。肝脏中ABCA1在与TG水平升高和高密度脂蛋白水平降低之间具有相关性[10]。值得注意的是，ABCA1的功能还与体重、胰岛素分泌和敏感性下降及血糖水平升高存在相关性[11]。ABCA1对心血管疾病和代谢疾病具有重要的有益作用，因此，作为预防这些疾病的治疗靶点，恢复ABCA1功能具有重要意义[12]。在一个中国队列中的结果显示rs2230806多态性与妊娠期糖尿病患者的HDL-C浓度具有相关性，尤其是体质指数较高的患者，这支持了ABCA1作为HDL-C的调节剂在胆固醇反向转运中发挥核心作用的观点[13-15]。

本研究检测了196例女性糖尿病患者和90例女性健康志愿者ABCA1基因rs2230806位点多态性，发现女性糖尿病患者存在ABCA1基因多态性，GG、G等位基因患者糖尿病风险较AA、A等位基因降低，提示携带G等位基因具有较高的糖尿病肾病患病风险。针对中国妊娠期糖尿病患者的研究也发现，具有GG等位基因患者AI指数显著低于AA等位基因[12]，与本研究结果一致。但遗憾的是，根据年龄进行校正后，未发现ABCA1基因rs2230806位点多态性与糖尿病存在相关性，可能与本研究纳入样本量较少以及健康志愿者年龄与糖尿病患者差异较大有关。本研究证实携带ABCA1基因rs2230806 GG基因型的女性人群中，糖尿病发病风险及心血管事件的发生率较低。