高效液相色谱检测样品真菌毒素不同进样体积检测结果的比较*

雒 芳 崔立军 宋卫军 卢献礼 张瑞莉 徐 鹏 许辉

[1 中储粮(四川)质检中心有限公司云南分公司 650000](2 中央储备粮昆明直属库有限公司 650604)(3 中央储备粮曲靖直属库有限公司 655099)

随着社会经济的快速发展,人民生活水平的提升,食品安全问题越来越受到人们的关注。液相色谱检测技术的出现为食品安全检测工作提供了高效的技术保障,不断总结并提高食品安全检验技术水平,获取最真实、可靠的检测数据,亦显得尤为重要。

试验使用高效液相色谱仪,检测玉米中黄曲霉毒素B1含量,选择不同进样体积进样检测,分析比较检测结果的差异,以期为日常检测过程中更有效、灵活地运用高效液相色谱检测技术提供一些技术参考。

1 试验材料和方法

1.1 试验样品

随机扦取20份玉米样本,扦样混匀后,每份玉米试验样品质量≥1 kg。去除杂质后,使用高速磨粉机粉碎,使其粒径可通过0.5 mm～1.0 mm孔径试验筛。采用可旋转式的电动混匀机充分混匀30 min。将混匀的1 kg粉质样品平铺放置在分析盘上,用小勺“多点”取样,合并、缩分至200 g,再次充分混匀后作为最终的试检样品备用。

1.2 试验设备、器材及试剂

1.2.1 试验设备、器材 1260-Ⅱ型高效液相色谱仪(配荧光检测器、光化学衍生器)、电子天平(感量0.01 g)、分样器、3610高速磨粉机、样品混匀机、THZ-100恒温旋转式摇床、HC-3018高速离心机、分析盘(尺寸30 cm×40 cm)。

1.2.2 试验试剂 甲醇(分析纯/色谱纯)、氯化钠(分析纯)、高纯水(一级水,过0.22 μm微孔径水相滤膜)、黄曲霉毒素B1标准溶液(浓度101 μg/mL、不确定度3%)、黄曲霉毒素B1标准工作溶液(浓度分别为5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、40 ng/mL、50 ng/mL)、黄曲霉毒素B1免疫亲和柱。

1.3 试验方法

GB 5491-1985《粮食、油料检验 扦样、分样法》;GB 5009.22-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》第三法 高效液相色谱——柱后衍生法。

2 样品检测

2.1 样品提取

称取25 g±0.01 g试验样品,加入5 g氯化钠与125 mL提取液(70%甲醇-水溶液,分析纯)至具塞三角瓶中,摇床(26℃,230 r/min)振荡20 min,收集提取液至50 mL离心管中,高速离心(转速8000 rpm)5 min至澄清,取10 mL澄清提取液加20 mL高纯水(一级水)稀释,再用玻璃纤维滤纸过滤,收集滤液为上样液。

2.2 样品净化

一次性注射器筒下连接黄曲霉毒素B1免疫亲和柱,置于气控操作架上固定,取15 mL上样液于注射器筒中,调节气控开关,使液体以1～2滴/s的速度通过免疫亲和柱,待液体排干后,用10 mL高纯水(一级水)淋洗免疫亲和柱2次,流速2～3滴/s,直至空气完全通过免疫亲和柱。准确加入1.0 mL甲醇(色谱纯)至免疫亲和柱中,流速1滴/s,淋洗并收集1.0 mL全部样品洗脱液。

为消除上机检测时的溶剂效应,需将收集的甲醇洗脱液用高纯水进行稀释,使其基质更接近流动相,检测样品出峰峰形更好,结果准确度更高。稀释方法:准确移取2.2中收集的甲醇洗脱液500 μL至2 mL离心管,再加入500 μL高纯水(一级水,过0.22 μm微孔径水相滤膜)稀释,振荡使其充分混匀,混匀后的稀释液过0.22 μm微孔滤器,过滤并转移至2 mL玻璃样品瓶中,用于高效液相色谱仪检测分析。

2.3 仪器条件

色谱柱:C18柱,填料粒径4 μm,柱内径4.6 mm×柱长150 mm;流动相:甲醇(色谱纯)/高纯水(一级水,过0.22 μm微孔径水相滤膜)(V/V,40∶60);流速:1.0 mL/min;进样体积:50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL、10 μL;柱温:35℃;检测器:荧光检测器;柱后光化学衍生器;检测波长:激发波长360 nm;发射波长440 nm。

3 检测结果与分析

对20份已净化、收集的玉米黄曲霉毒素B1待检样本,使用高效液相色谱仪检测黄曲霉毒素B1含量,每份检测样本上机检测3次,进样量分别为50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL和10 μL,分别同时建立标准系列,进样体积与待测样本检测进样体积保持一致,检测结果详见表1。

对3种进样体积得到的检测值进行比较(以GB 5009.22-2016第三法规定的进样量50μL测定结果作为参考),运用公式:

精确度(%)=[进样体积(20 μL/10 μL)检测值÷进样体积50 μL检测值]×100%

经计算,进样量为20 μL、10 μL的检测结果,其精确度平均值分别99.9%、97.6%。

4 结论

从20份待测样本的检测结果值分析,在消除溶剂效应后,选择进样体积50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL和10 μL的测定值均比较接近,精确度也较高。因此,在使用高效液相色谱仪检测黄曲霉毒素B1时,检测进样体积选择50 μL、20 μL和10 μL都是可行的。一般试验过程中,若仪器设备老旧,性能较差,灵敏度不高时,可选择较大的如50 μL进样体积进行检测。若仪器设备较新,性能好,灵敏度较高,能很好地满足微量检测要求的,可选择较小的如20 μL或10 μL进样体积进行检测。在此需强调一点,不论选择50 μL、20 μL或10 μL的进样体积,建立标准系列的进样体积与待测样本检测进样体积一定是一致的。