金钗石斛活性成分提取分离及胃黏膜保护活性研究

戴文娜，兰海崇

（1. 芜湖职业技术学院食品与生物工程学院，江苏芜湖 241003；2. 遵义陆圣康源科技开发有限责任公司，贵州 遵义 564100）

金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl） 为多年生草本，外形如古代头上的发钗而得名[1]，大部分分布于我国西南、华南、台湾等地。金钗石斛是我国传统的名贵中药[2-4]，在“神农本草经”中列为上品，传统中医研究已证实，石斛具有护胃和增强免疫等功效[5-7]，俗称药黄金。

目前，喝酒成为职场人士常见的交流活动，喝酒过多容易对人造成的胃部伤害，导致胃黏膜损伤人群逐渐增多。由于缺乏针对性的胃黏膜损伤治疗措施，寻求能够保护胃黏膜的产品或组分，成为研究者的研究热点，也是普通人群非常需要的产品。因此，研究金钗石斛对胃黏膜的保护作用，以期为消费者需要胃黏膜的保护产品提供更多选择。

1 材料和方法

1.1 试验动物

Wister 大鼠，体重200～220 g，雄性，南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

1.2 提取条件研究

分别取5 g 原料于提取瓶中，向其中加入一定比例的去离子水，放入水浴锅内，经加热、搅拌后提取，再经过滤得滤液，并测定其中的多糖成分含量。多糖含量的测定按照《中华人民共和国药典》（2015 版） 规定的石斛多糖测定方法进行。

1.3 金钗石斛提取物对乙醇诱导大鼠胃损伤保护作用的研究

按照文献[8]报道的纯乙醇诱导胃黏膜损伤方法进行该试验。Wister 大鼠随机分成4 组，每组8 只。空白组，模型组和试验治疗组（200，80 mg/kg）。空白组和模型组在整个灌胃过程中均灌胃生理盐水。治疗组的大鼠持续灌胃28 d，每日1 次。第29 天时，禁食24 h（除空白组外） 后，其余各组大鼠灌胃乙醇（1 mL/只） 来制造胃黏膜损伤模型。1 h 后，将大鼠用乙醚麻醉。将大鼠安乐死后，将胃迅速取出，沿胃大弯剪开，用冷生理盐水冲洗内容物，展开拍照，观察胃损伤情况。剪下一部分胃组织浸泡在生理盐水中以做生化分析。-80 ℃下储存备用。

1.4 肉眼观察胃黏膜损伤

试验中采用肉眼观察各组大鼠胃黏膜损伤的程度，并用游标卡尺进行大鼠胃组织损伤条带的长和宽测量[1]，计算损伤指数（UI）。参考规则如下：出血点（1 个1 分），出血长度（1=1～5 mm，2=6～10 mm，3=10～15 mm，4=＞15 mm），出血宽度（1=1～2 mm，2=＞2 mm）。总分=出血点得分+出血长度得分+（出血宽度得分×2）。

1.5 胃组织中NO 含量的测定

大鼠胃组织用0.9%生理盐水进行匀浆，收集上清液。NO 含量的测定按照试剂盒说明书操作步骤进行测定。

2 结果与分析

2.1 不同液料比对金钗石斛多糖得率的影响

为节约溶剂，并能最大限度地提取金钗石斛多糖成分，选择合适的料液比至关重要。试验探究不同料液比1∶20～1∶60（g∶mL） 对金钗石斛多糖得率的影响，并保持剩余参数保持不变（提取温度90 ℃，提取时间120 min，提取1 次）。

不同液料比对多糖得率的影响见表1。

表1 不同液料比对多糖成分得率的影响

由表1 可知，当料液比从1∶20（g∶mL） 增加到1∶50（g∶mL） 时，金钗石斛多糖得率显著性增加，且在1∶50（g∶mL） 时达到最大值，随后随着液料比的增加，金钗石斛多糖得率几乎不变。造成这种现象的原因可能是当料液比达到合适的条件时，多糖几乎已经完全溶解在溶剂中。综合考虑，应选择料液比1∶50（g∶mL） 进行后续试验。

2.2 不同提取温度对多糖得率的影响

为进一步提高多糖得率，试验探究了温度对多糖得率的影响，其他试验条件不变（料液比1∶50（g∶mL），时间120 min）。

不同提取温度对多糖得率的影响见表2。

表2 不同提取温度对多糖得率的影响

由表2 可知，提取温度从60 ℃增加到100 ℃时，多糖得率逐渐增加，并在100 ℃时多糖得率达到最大值。可能是当提取温度增加时，传质速率同时增加，使得多糖成分能够从细胞内溢出并扩散至溶剂中[9]。因此，依据试验结果应选择提取温度100 ℃为最佳提取温度。

2.3 不同提取时间对多糖得率的影响

提取时间对多糖能否充分地被提取出来具有重要影响。由此可见，对多糖提取时间的优化也是必要的。试验在其他试验条件（提取温度100 ℃，料液比1∶50（g∶mL）） 保持不变的条件下，对多糖的提取时间（60～150 min） 进行探究。

不同提取时间对多糖得率的影响见表3。

表3 不同提取时间对多糖得率的影响

由表3 可知，提取时间为60～150 min 时，多糖得率逐渐增加，并在120 min 时达到最大值，且在120～150 min 时，多糖得率几乎不变，这是由于在原料与提取溶剂接触120 min 时，多糖几乎完全被提出，随着时间的延长，多糖得率也不会发生变化。因此，应选择120 min 为最佳提取时间。

研究结果表明，金色石斛多糖的较佳提取条件为，料液比1∶50（g∶mL），提取时间120 min，提取温度100 ℃，在此条件下提取多糖，多糖提取率达7.1%。同时，对多糖提取物的多糖含量进行了分析，结果表明，在此条件下，金钗石斛提取物中多糖含量为22.3%

2.4 金钗石斛提取物对大鼠胃黏膜的作用

试验中，研究了金钗石斛提取物对胃黏膜的保护作用。并采用酒精诱导损伤胃黏膜模型。试验治疗组连续28 d 灌胃金钗石斛水提物。之后除空白组外，每只均灌胃纯乙醇1 mL 诱导胃黏膜损伤。

结果表明，空白组观察不到肉眼可见的损伤。大鼠胃黏膜均色泽淡红，表面光滑有弹性，黏膜皱襞完整。灌胃无水乙醇的大鼠，有不同程度的表面糜烂、线状出血带，水肿及深褐色条索状溃疡等。在模型对照组中可以观察到组内大鼠胃黏膜损伤严重。与模型组相比，金钗石斛处理组的胃黏膜损伤有所减轻，大鼠胃组织的出血点和出血条带明显较少。

各组大鼠胃黏膜损伤指数见表4。

表4 各组大鼠胃黏膜损伤指数

由表4 可知，与模型组胃黏膜损伤指数UI 33.6相比，金钗石斛处理发挥显著的胃黏膜保护作用（p＜0.05）。通过对大鼠胃黏膜UI 分析，可以得出金钗石斛提取物治疗组低剂量组和高剂量组大鼠胃黏膜UI 比模型组UI 都出现了显著降低，结果都具有显著性，金钗石斛提取物的低剂量组和高剂量组都可以有效地降低由酒精造成的大鼠胃黏膜损伤。

2.5 金钗石斛水提物对大鼠胃组织中NO 含量的影响

在胃黏膜损伤模型组中，可以观察到严重的胃黏膜损伤，并伴随这NO 的大量产生。已有研究表明，大量的NO 释放可以导致血管瘀血，造成胃黏膜出血性损伤。

试验研究根据硝酸盐/亚硝酸总量来测定大鼠胃组织中NO 的含量。由表5 可知，模型对照组大鼠胃组织中NO 的含量明显高于空白对照组中大鼠胃组织中NO 的含量。相比于模型组，提取物组分可以显著地抑制NO 的大量产生（p＜0.05）。试验表明，金钗石斛提取物组分可以有效地降低NO 的大量异常生成。

金钗石斛水提物对NO 产生的影响见表5。

表5 金钗石斛水提物对NO 产生的影响

3 结论

结果表明，采用微波辅助萃取法提取多糖，提取效率高，最佳提取时间为120 min，最佳料液比为1∶50（g∶mL），在该条件下提取多糖的得率为7.1%，所得金钗石斛提取物的多糖含量为24.3%。动物试验结果表明，与对照组比较，金钗石斛水提取物能够明显降低胃黏膜损伤指数，金钗石斛提取物具有显著的胃黏膜保护作用。