基于液质联用技术分析雀梅藤化学成分

蒙雪雁，王成海

（1.广西中医药大学药学院，南宁 530200；2.广东省东莞国药集团常平医药公司，广东东莞 523560）

雀梅藤［Sageretia thea（Osbeck）Johnst.］属于鼠李科（Rhamnaceae）雀梅藤属（Sageretia），别名雀梅刺、对节刺、碎米子、刺杨梅等［1］。雀梅藤主要分布于西南及江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、广西等地，其药用化学成分主要为黄酮及其苷类、糖苷类、有机酸类、酯类、蒽醌类、萜类、植物甾醇、天然色素、木脂素和新木脂素等［2］。其地下部分具有行气化痰、祛风除湿的功效，主治咳嗽、胃痛、哮喘、鹤膝风、水肿等病症［3］。本研究通过超高液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）技术对雀梅藤根水提物的化学成分进行定性分析，为雀梅藤的药效物质基础的阐明提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器

Sciex X500R Q-TOF 型液质联用仪（配有ESI 源和Sciex OS 数据处理软件），美国Sciex 公司；Waters Acquity Arc 超高效液相色谱仪（四元泵、自动进样器、柱温箱、2998PDA 检测器、Waters 工作站），沃特世科技（上海）有限公司；SB-800DTD 型超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司；SQP 型十万分之一电子分析天平，赛多利斯科学仪器有限公司。

1.2 材料

本研究所用雀梅藤药材采集于广西南宁；乙腈（HPLC 级，德国Merck 集团）；甲酸（LC/MS 级，赛默飞）；甲醇（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；水为去离子水。

1.3 方法

1.3.1 色谱及质谱检测条件 色谱条件，色谱柱为Thermo scientific Accucore C18 柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μmol/L）；流动相为乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脱，0～1 min，5%乙腈；1～5 min，5%～27%乙腈；5～15 min，27%～70%乙腈；15～18 min，70%～95%乙腈；18～20 min，95%～5%乙腈；体积流量0.4 mL/min；柱温40.0 ℃；进样量3 μL。

质谱条件，电喷雾电离源（ESI），正、负离子模式，扫描范围（m/z）100～2 000；碰撞能量35 eV；离子源温度为600 ℃；喷雾电压5 500 V。通过一级质谱信息确定精确相对分子质量，二级质谱获得裂解信息，搜索数据库和查阅文献推测化合物的结构式。

1.3.2 供试品溶液的制备 取干燥雀梅藤根部粗粉210 g，用8 倍量水回流提取3 次，每次2.5 h。合并提取液过滤并用旋转蒸发仪减压浓缩，后除去残余水份，得到冻干的提取物13.82 g，得率为6.58 %。取适量提取物溶于甲醇，配制成1 mg/mL 样品溶液，用0.22 μm 滤膜过滤，装于液相小瓶内，待用。

2 结果与分析

采用UPLC-Q-TOF-MS/ MS 对雀梅藤进行分析，选择正、负离子模式分别对供试品溶液进行扫描，总离子流见图1、图2。通过SCIX OS 数据处理系统查找质谱响应较高的成分的精确相对分子质量，与天然产物高分辨质谱数据库（Natural procducts HR- MSMS 2.0）进行比对，获得候选化合物，通过二级碎片离子及母离子可能的断裂规律来确定其结构。结果表明，从雀梅藤中鉴定出43 个化学成分，各化学成分的保留时间、质谱信息见表1。通过UPLC-Q-TOF-MS/MS 联用技术，并通过对比参考文献对雀梅藤的化学成分进行了初步鉴定，发现雀梅藤中所含化学成分可分为有机酸、黄酮及其他3 大类。

图1 雀梅藤正离子TIC

图2 雀梅藤负离子TIC

表1 雀梅藤化学成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS 鉴定结果

续表

2.1 有机酸类化合物质谱解析

雀梅藤有机酸成分较多，该类成分的二级质谱裂解特征通常易失去H2O、CO、CO2、CH2等中性碎片。有机酸类中的儿茶素及其衍生物是抑制环加氧酶-1 的有效抑制剂，是抑制癌症的天然重要活性成分之一［42］。以化合物儿茶素为例，其在正离子模式下的准分子离子峰为291.086 6，tR为6.34，二级质谱中存在的离子碎片主要为93.034 5。表1 中鉴定得到离子碎片（m/z）主要为119.051 4、139.039 8、147.045 0、165.055 4，根据其裂解规律与文献［30］对照基本吻合，推测化合物30 为儿茶素，可能的断裂途径见图3。

图3 儿茶素可能的裂解途径

2.2 黄酮及异黄酮类化合物质谱解析

黄酮类化合物是中草药常见的有效成分之一，雀梅藤中含有较多的黄酮及异黄酮类成分。黄酮类成分能够减轻关节炎程度，保护关节组织，滑膜增生，血管翳形成，软骨破坏和骨侵蚀改善关节组织关节翳形成，炎性细胞浸润和骨侵蚀［43］。以异槲皮素为例，其在负离子模式下的准分子离子峰为463.124 8，tR为4.69，二级质谱中存在的离子碎片主要为151.002 8、271.024 5、301.135 9。根据其化学结构和二级碎片信息，其裂解规律与文献［24］对照基本吻合，推测化合物23 为异槲皮素，可能的质谱裂解途径见图4。

图4 异槲皮素可能的裂解途径

3 小结

本研究鉴别出的有机酸类化合物如儿茶素、绿原酸、水杨酸等都具有良好的药理活性。据文献报道，有机酸类中的水杨酸及其衍生物是COX-2 活性的有效抑制剂，是抗炎的天然重要活性成分之一［44］。水杨酸显著降低C57Bl/6DIO 小鼠网膜脂肪组织中的11β-HSD1 mRNA，其在肠系膜脂肪中具有相似的趋势（P=0.057）。在C57Bl/6 DIO 小鼠的肠系膜脂肪中，水杨酸也降低了11β-HSD1 酶的活性［45］。本研究通过UHPLC-Q-TOF-MS/MS 分析，鉴定出雀梅藤地下部分潜在的主要成分，并查阅相关报道了解这些化合物的主要药理活性，发现确实存在抗炎活性成分，与雀梅藤传统药理作用一致。