不同环境温度对胶体金免疫层析法测定血清低浓度HBsAg的效果评价

谢春艳 邓 红 李广志

广东省韶关市中医院检验科，广东韶关 512000

随着经济的快速发展与乙型肝炎疫苗的不断普及，当前乙型肝炎患者人数逐年降低，但乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染依然是社会比较敏感的问题。乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）是HBV感染的最主要的病原标志及直接证据之一，及时准确检测HBsAg，对诊断是否感染HBV具有重要的临床意义，为下一步临床治疗提供实验室依据[1-2]。目前的检测方法有胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附试验、激光化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法[3-4]。电化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附试验的诊断特异度已经得到公认，但其操作步骤比较复杂，检测时间比较长，不适合进行快速筛查检测[5-6]。胶体金免疫层析法具有操作简单、试剂廉价、不需要仪器设备等特点，并且其能单份操作，所用时间较短，简单方便，能满足急诊检测HBsAg的需要，但是灵敏度不够，对低浓度HBsAg的标本存在漏检的问题[7-8]。本研究使用罗氏COBASe601电化学发光分析仪筛选的150例HBsAg＜150 Cutoff-指数（COI）值的低浓度临床标本，用艾博生物医药有限公司生产的GICA试剂盒分别于室温25℃的室内与37℃水浴箱中检测HBsAg，按出现2条带时判断为阳性的标准，评价两种环境温度对该试剂盒检测低浓度HBsAg的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年6月至2022年3月于广东省韶关市中医院（我院）诊治的150例乙型肝炎患者作为研究对象。男78例，女72例；门诊87例，住院63例；年龄最小22岁，最大78岁，平均（54.69±2.49）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准。

纳入标准：患者来自我院门诊及住院部；符合乙型肝炎的诊断标准，HBsAg＜150 COI；采样前未接受任何治疗。排除标准：合并呼吸道传染性疾病者；溶血标本；备孕期、妊娠期女性；甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等疾病患者；临床资料缺乏者。

1.2 检测方法

罗氏COBASe601电化学发光分析仪及配套试剂由瑞士罗氏公司提供，胶体金法试剂由艾博生物医药有限公司生产提供，广东省临检中心提供的临界值控制品HBsAg为9 COI。罗氏全自动仪器操作按照厂家说明书及科室的仪器标准操作程序文件规定进行。胶体金免疫层析法格按艾博生物医药有限公司生产提供的说明书进行。

在检测过程中，以罗氏电化学发光免疫法的检测结果作为标准，筛选150例HBsAg定量＜150 COI的标本，再用艾博生物医药有限公司生产的胶体金免疫层析试剂盒检测HBsAg。对照组放置于25.0℃室温内，观察组放置于37.0℃水浴箱内。两组分别放置15、30 min后，采用胶体金免疫层析法的结果进行观察，以30 min时为报告结果，并且于15 min内读取测定结果，超过30 min即可判定为无效的结果。

1.3 观察指标及评价标准

按照试剂盒说明，电化学发光免疫分析：COI＞1可判断为阳性；胶体金免疫层析法：出现2条带时可判断为阳性。

以电化学发光免疫分析法作为参考标准，分析观察组、对照组检测结果与电化学发光免疫分析法的符合率。

观察与记录观察组、对照组的读取时间与报告。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 24.00进行数据分析，计量资料用均数±标准差（）表示，行t检验，计数资料用 [n（%）]表示，行χ2检验，P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 读取时间与报告时间比较

观察组的胶体金免疫层析法读取时间与报告时间都明显短于对照组（P＜ 0.05）。见表1。

表1 两组读取时间与报告时间比较（min，）

表1 两组读取时间与报告时间比较（min，）

组别 n 读取时间 报告时间观察组 150 4.26±0.32 10.86±1.48对照组 150 7.48±0.33 15.01±1.11 t值 11.393 16.935 P值 0.000 0.000

2.2 电化学发光免疫法检测浓度分布状况

在 150例患者中，42例HBsAg≤ 1 COI，108例HBsAg处于1～150 COI；电化学发光免疫法检测浓度分别为0～1 COI 42例，2～15 COI 30例，16～50 COI 39例，＞50 COI 39例。

2.3 阳性符合率比较

以电化学发光免疫法作为参考的标准，对照组判断为阳性48例，观察组判断为阳性75例，对照组的阳性符合率为44.44%，观察组的阳性符合率为69.44%，观察组的符合率明显高于对照组（P＜ 0.05）。见表2。

表2 两组的阳性符合率比较

3 讨论

HBV具有较强传染性，可通过体液、性、血液等渠道传播，严重威胁着人们的生命安全。特别是HBV会在机体内长期潜伏，在适当条件下会被激活[9]。而且发病初期并无明显的症状，如果不及时进行早期检测与诊治，可诱发肝硬化与衰竭的发展。乙型肝炎的诊断主要是对HBV进行血清学检测，其指标包括乙型肝炎核心抗体、乙型肝炎e抗体、乙型肝炎表面抗体、乙型肝炎e抗原、HBsAg，其中HBsAg不存在具有传染性的外壳蛋白，临床常作为HBV检测的重要标志物。胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的，其基本原理与免疫渗滤技术相同，其主要是将特异度抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异度结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果[10]。本研究显示观察组的胶体金免疫层析法读取时间与报告时间都明显少于对照组（P＜ 0.05），表明实验环境置于37℃水浴箱能缩短读取时间与报告时间。

本研究结果显示，在150例患者中，电化学发光免疫法检测浓度分别为0～1 COI 42例，2～15 COI 30例，16～50 COI 39例，＞50 COI 39例。电化学发光免疫检测方法是近年来发展起来的新兴免疫标记技术，其使用的标记物稳定，具有无放射性污染、结果准确、灵敏度高等优势，而且还具有更宽的线性范围[11]。不过电化学发光免疫检测方法的价格比较高，需要昂贵的仪器设备[12]。

本研究以电化学发光免疫法作为诊断的标准，对照组判断为阳性48例，观察组判断为阳性75例，对照组的阳性符合率为44.44%，观察组的阳性符合率为69.44%，观察组的符合率明显高于对照组（P＜ 0.05）。胶体金免疫层析法虽然操作简单、方便，便由于其方法学的原因灵敏度低，对低浓度HBsAg检测会产生假阴性，而且实验环境对该检测方法的灵敏度影响很大。有研究发现高温、高湿提升乙型肝炎检测灵敏度，低压、低氧降低其灵敏度，乙型肝炎检测的敏感度在两种极端条件下均降低[13]。还有研究发现检测环境的气温约为8℃时，71份HBsAg阳性标本，用金标法只检出50份性标本，再把阴性的21份标本用金标试纸重做，并置入37.0℃温箱，15 min后又检出16份为阳性，还有5份标本为阴性[14]。胶体金主要是由氯金酸与还原剂等物质发生反应而聚合成的颗粒，颗粒虽然会受到静电影响，但是成为胶体状态时有较强的稳定性。同时通过37℃水浴箱进行处理可促使胶体金的负电荷与蛋白质分子正电荷基团相结合，有利于提高诊断效果[15]。不过本研究由于经费问题，样本数量比较少，且以电化学发光免疫法作为诊断的标准还存在一定的误差，将在后续研究中探讨。

综上所述，胶体金免疫层析法检测HBsAg的实验环境置于37℃水浴箱可以提高诊断的符合率，还可缩短读取时间与报告时间，具有很好的临床应用价值。