苹果中毒死蜱残留快检测定及方法评估

◎包东东，余 琪，田 锋，谭慧林

（阿克苏地区食品安全检测中心，新疆 阿克苏 843000）

毒死蜱是乙酰胆碱酯酶抑制剂，属于有机磷[1]类中毒杀虫剂，其具有胃毒、触杀、熏蒸三重作用，与常规农药相比毒性较低，是替代高毒有机磷农药的首选药剂，被大量用于植物病虫防治。由于大量的使用，毒死蜱及其代谢产物已造成了广泛的环境污染和食物残留[2]，其毒性作用对人类具有潜在的健康风险[3]。实验室常用色谱及色谱-串联质谱法对毒死蜱残留量进行检测[4-6]，这些方法准确度高，但操作烦琐，用时较长。随着近几年快检技术的快速发展，快速检测试剂盒已被广泛使用，但其对样品检测的适应性还需进一步评估。本研究参考行业标准为参比方法，随机选择3 家快检试剂盒，根据《食品快速检测方法评价技术规范》，对不同来源的检测试剂盒在检测苹果中毒死蜱残留的适应性进行了系统性评估，为毒死蜱残留的快速检测提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

使用来自阿克苏市的苹果为本实验的原材料。毒死蜱标准物质，乙腈、甲醇，丙酮，毒死蜱快检试剂盒均采用竞争法免疫胶体金检测技术，本研究中将3种不同厂家试剂盒分别标记为试剂盒1、试剂盒2、试剂盒3。

1.2 仪器与设备

本实验所用仪器包括高速匀浆机，Agilent 7890B气相色谱仪，氮吹仪，涡旋仪。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

称取2.5 kg 苹果样品，切至块状，充分混匀后粉碎，分装后-20 ℃下冷冻保存备用。

1.3.2 气相色谱

（1）样品处理：依据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（NY/T 761—2008）第一部分所述方法处理样品，配备火焰光度检测器的气相色谱仪检测样品中毒死蜱的含量。

（2）色谱条件：DB-1701 毛细柱；检测器温度为250 ℃；进样口温度为220 ℃；保持柱温150 ℃下2 min 后以8 ℃·min-1的速度升温至250 ℃后保持12 min；以1.0 μL 为进样量。

1.3.3 快速检测试剂盒

根据试剂盒的说明书进行操作。

（1）试剂盒1：待测苹果取皮约1 g 于样品杯中，加入2 mL 毒死蜱稀释液，手摇混匀，静止提取5 min，样品杯内混合液体即为待测液。进行检测前需要对待测液进行相对应的稀释。样品准备完毕后取出试剂盒中检测卡并水平放置，取80 μL 上述样品杯内待测液的稀释液，缓慢将液体滴入试剂盒1 中的检测卡加样孔中，反应5～6 min 后，根据检测卡所显示颜色判定检测结果。

（2）试剂盒2。洗净苹果，剪待测样品至1 cm2左右碎片，充分混匀，称取2.5 g 碎片，加入5 mL 提取液，翻转振荡摇匀50 次以上，也可采用超声3 min的方法进行混匀，之后即得待测液。取出试剂盒2 中检测卡，并放置至室温后开始检测。取出红色微孔，加入100 μL 待测液，吹打混匀静置3 min，取出检测卡，将检测卡平放，将微孔待测液滴加到检测卡加样孔中，反应5～8 min 后观察结果，其余时间判读无效。

（3）试剂盒3。称取苹果表皮约1 g，置于 5 mL离心管中，并向其中加入1 mL 稀释液，充分震荡混匀2 min，所得液体即为待测液。待试剂盒3 中检测卡恢复至室温后开始检测。向金标微孔中滴入4 滴所制待测液，2 min 后震动以使上述待测液混合均匀；取出检测卡平放，将微孔待测液全部滴加到检测卡加样孔中，8～10 min 观察结果，其余时间判读无效。

取毒死蜱标准物质并配制终浓度为0、0.05、0.08、0.10 和0.20 mg·kg-1的毒死蜱标准品，使用上述3种试剂盒对加标样品进行检测，分析检测结果与实际浓度。

1.4 数据分析

依据《食品快速检测方法评价技术规范》，分别计算3 种试剂盒检测毒死蜱的特异性、灵敏度、假阳性率、假阴性率、显著性差异和相对准确度等参数，使用spss 软件整理分析实验所得数据。

2 实验结果

2.1 检测苹果中的毒死蜱农药残留

对阿克苏地区苹果样品进行毒死蜱残留的测定，3 种试剂盒的检测结果均显示未检出，说明本研究所用苹果样品中没有毒死蜱残留，详见表1。

表1 苹果中毒死蜱农药残留行业标准和试剂盒检测结果表

2.2 快检试剂盒检测结果评估

2.2.1 试剂盒1 检测结果

以5 份相同的苹果样品为基质，分别添加毒死蜱标准溶液使其终浓度为0、0.05、0.08、0.10 和0.20 mg·kg-1，每个浓度重复10 次。检验结果及显色情况如表2。该试剂盒使用说书中显示该试剂盒检出限为0.10 mg·kg-1，故本实验中，若出现显色反应即为样品中毒死蜱含量≥0.10 mg·kg-1，未出现显色反应则认为其中毒死蜱含量＜0.10 mg·kg-1。对表2 结果进行计算，结果显示试剂盒1 的特异性、灵敏度、假阳性率、假阴性率、显著性差异和相对准确度分别为66.67%、100%、33.3%、0、8.1，80%。

表2 试剂盒1 对毒死蜱加标后检测显色统计表

2.2.2 试剂盒2 检测结果

向5 份相同苹果样品中添加毒死蜱标准溶液，使其最终浓度为0、0.10、0.25、0.5 和1.00 mg·kg-1，每个浓度重复10 次。检验结果及显色情况如表3所示。试剂盒2 使用说书显示该试剂盒的检出限为0.50 mg·kg-1，故本研究结果分析中，出现显色反应的即认为样品中毒死蜱含量≥0.50 mg·kg-1，未出现显色反应的样品中毒死蜱含量＜0.50 mg·kg-1。对显色结果进行分析发现，试剂盒2 的假阳性率、假阴性率、灵敏度、特异性、显著性差异和相对准确度分别为66.67%、0、100%、33.33%、18.05、60%。在毒死蜱最终添加浓度为0.10 mg·kg-1时试剂盒2 即可显色，与说明书所标称的检测限为0.5 mg·kg-1不符，实验结果与其说明书中所标示的检出限差距较大。

表3 试剂盒2 对苹果中毒死蜱加标检测显色统计表

2.2.3 试剂盒3

向5 份苹果样品基质中添加毒死蜱标准溶液并使其终浓度为0、0.05、0.10、0.20 及1.00 mg·kg-1，每个浓度重复10 次。检验结果及显色情况如表4。根据此试剂盒使用说明书，此试剂盒的检出限为0.10 mg·kg-1，即阳性样品中毒死蜱含量＞0.10 mg·kg-1，阴性样品中毒死蜱含量则＜0.10 mg·kg-1。实验结果显示在同一浓度毒死蜱条件下，10 次重复检测中既有阳性结果，又有阴性结果，说明快检试剂盒显色非常不稳定。结果显示，此试剂盒的假阳性率和假阴性率分别为0 和36.67%、灵敏度为63.3%、特异性为100%、显著性差异为9.09，相对准确度为78%。

表4 试剂盒3 对苹果中毒死蜱加标检测显色统计表

3 结果与讨论

通过采用不同毒死蜱快检试剂盒对阿克苏苹果样品进行检测，并依据行业标准方法对检测结果进行分析，结果显示毒死蜱显色反应均为阴性。向同样苹果样品中添加不同浓度毒死蜱标准溶液，并根据试剂盒说明书中所标示的检出限辨别样品中毒死蜱含量，检测结果采用《食品快速检测方法评价技术规范》所述方法进行分析，对3 中毒死蜱快检试剂盒检测效果进行评估。结果显示，试剂盒1 假阴性率较高，试剂盒2 假阴阳率较高，试剂盒3 假阳性率、假阴性率都比较高。需要建立与完善商品快检试剂盒的评价体系，进一步规范快速检测技术的科学发展。

国家标准对苹果中毒死蜱的最大限量为1 mg·kg-1，本次试验所选的3 种试剂盒的检出限均低于该限量值，因此3 种试剂盒均能满足苹果样品中毒死蜱残留量快速筛查工作需求。