来宾市牛结节性皮肤病防控（区域）监测净化技术

李崇斌，王武，黄江峰，陈胜文，郑子胜，谢海

（1.广西来宾市动物疫病预防控制中心 广西来宾 546100；2.广西来宾市兴宾区动物疫病预防控制中心 广西来宾 546100）

牛结节性皮肤病是由痘病毒科羊痘病毒所引起的一种急性、亚急性传染病，又称牛结节疹、牛结节性皮炎、牛疙瘩性皮肤病，以体温升高，皮肤表面出现结节性或疙瘩样结节（疹）、消瘦等为特征。

流行情况：2019 年8 月我国首次确诊发生该病，2020 年以来宾市零星出现以发热、皮肤或黏膜出现结节状痘疹、鼻炎、结膜炎等为特征疑似牛结节性皮肤病的病例。感染牛和发病牛的皮肤结节、唾液、精液等为传染源，通过吸血昆虫等虫媒叮咬、消化道、针尖头等器械、交配等途径传播。

临床症状：病牛体温升高40～42℃，高热稽留，精神委顿，不愿走动，鼻、眼有炎症和脓性分泌物。以全身皮肤、黏膜（头、颈、胸、腹、背、腿、阴囊、会阴、外阴、乳房、尾部、口鼻黏膜、生殖器黏膜、消化道黏膜等部位）出现大小不等、凸出于皮肤表面结节，或溃烂灶，重症可聚成不规则的肿块，结节切面为浮白色或白色，初期有渗出血清，随着病程发展，2 周内结节可能出现锥形中央核、坏死组织或坏死灶。全身体表淋巴结节肿大。母牛流产，流产胎儿皮肤有结节性小瘤，有子宫内膜炎，或暂时性不孕，泌乳牛产奶量显著减少；公牛睾丸炎或附睾炎，暂时性或终生不育。因滑膜炎和腱鞘炎而表现跛行症状。

剖检症状：皮肤结节部皮肤层、皮下组织或邻近肌肉有充血、水肿、炎症、坏死，或有浆液性渗出。口腔黏膜、消化道黏膜、生殖道黏膜有丘疹状结节或痘样病变。有原发性或继发性肺炎。

1 牛结性皮肤病防控（区域）监测净化技术

1.1 制定来宾市牛养殖区域牛结节性皮肤监测净化技术规程方案

依据《牛结节性皮肤病防治技术规范》《动物疫病净化示范区评估标准（试行）（2019 版）》《广西壮族自治区养殖场动物疫病净化技术规程的通知》等规范、文件的标准和要求，制定《来宾市牛养殖区域牛结节性皮肤监测净化技术规程方案》。

1.2 开展本底调查

由市级流调人员、市、县（区、市）级疫情测报人员、乡镇级动物防疫员和村级动物防疫员不定期对辖区内存栏的牛群进行普查、排查，建立存栏20 头以上养殖场（或养殖大户）档案信息，包括具体地点、种牛类别、饲养量等情况。

1.3 疫苗预防免疫

按照《牛结节性皮肤病防治技术规范》规范要求，选用政府统采购的山羊痘活疫苗（哈药集团生物疫苗有限公司），用法及用量：每瓶（50 头份）用5mL 生理盐水（或注射用水）稀释为每0.5mL 含5头份，不论牛只大小，每头尾根内侧皮内注射0.5mL。要求牛站立保定，选用7×8 针头，按30°的小角度于尾根内侧皮肤进行皮内注射免疫。建立高密度免疫牛群，要求牛群免疫山羊痘活疫苗免疫密度100%，抗体合格率75%以上。

1.4 防治技术培训和科普宣传

充分利用广播、电视、标语、通告等形式加强宣传，通过春秋两防全员动员培训会、科普大行动、专项技术培训会等形式增加组织培训，印发宣传册、明白纸（《牛结节性皮肤病预防控制知识问答》）、挂图（《牛结节性皮肤病临床症状及剖检症状诊断彩色图谱》《牛结节性皮肤病防控知识挂图》）等，积极向群众宣传牛结节性皮肤病的综合防治知识，培训基层兽医人员、村级防疫员、经营、养殖、屠宰等相关从业人员，增强对牛结节性皮肤病的综合预防控制意识。

1.5 进行血清学监测

1）样品采集：采集牛的血液，每头应不少于5mL，血液样品中分离出血清样品，置于冷冻保存、备检。

2）牛结节性皮肤病抗体检测：采用牛结节性皮肤病竞争ELISA抗体检测试剂盒（兰州兽研生物科技有限公司生产）。步骤及方法：按该试剂盒操作步骤及方法，取待检血清样品、阳性对照血清样品及阴性对照血清样品各50μl/孔进行检测，用酶标仪读取OD450nm值。结果判定（计算同一酶标板上阴、阳性对照孔和每份待检血清孔的OD450nm值，根据以下公式计算阴、阳性血清及待检血清的抑制率（PI）。公式:PI=[1-(样品孔的OD450nm值/阴性对照孔的OD450nm值)]*100%。判定标准：①当阳性对照血清PI＞60%，阴性对照血清OD450nm值＞1.0 时，检测结果成立，否则该次检测结果无效。②诊断或流行病学调查时，待检血清PI55%，阳性；PI＜55%，阴性。③进行抗体效价评估时，待检血清PI50%，合格；PI＜50%，不合格。

如：来宾市某规模化牛场牛结节性皮肤病抗体检测结果见图1。

图1 来宾市某规模化牛场牛结节性皮肤病抗体检测结果

1.6 进行病原学监测

1）样品采集：采集牛的唾液、口腔/鼻腔棉拭子、精液等，立即装入如5mL 血清离心管等样品保存管，加入0.5～1mL 生理盐水，按盖封紧，冷冻保存、备检。

2）病毒DNA 提取：采用TGuide S32 磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒提取各类样品中的待检病毒DNA，按TGuide S32 自动核酸提取仪操作步骤，样品平衡至室温后，取200μL 样品进行核酸提取。自动化程序结束后，将DNA 样品取出，用封口膜封好并低温保存、备用。

3）牛结核性皮肤病病毒核酸检测：采用牛结节性皮肤病病毒荧光PCR 检测试剂盒（青岛立见诊断技术发展中心生产），用法：按该试剂盒操作步骤，取5μL 待检DNA 样品、阳性对照样品及阴性对照样品进行检测。判定：结果有效性（阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct（CP）值≤35，且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct（CP）值，则试验成立；否则试验不成立）；结果判定（当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct（CP）值≤37 时可判定为牛结节性皮病病毒核酸阳性，Ct（CP）值＞40 或无Ct（CP）值时可判定为牛结节性皮肤病病毒核酸阴性；当样品37＜Ct（CP）值≤40 时判定为牛结节性皮肤病病毒核酸可疑，重新提取核酸，重复检测仍为可疑则判定为牛结节性皮肤病病毒核酸阳性。）

病原学监测要求：散养牛、存栏规模20～500 头每年监测一次，监测数量按流行率2%采集，种牛场（或存栏500 头以上的）每年一次，监测数量按存栏量25%以上采集。引种种牛（奶牛）隔离观察期间检测一次，按引进数量50%采集。

如：来宾市某规模化牛场牛结节性皮肤病病毒荧光PCR 检测结果（图2、图3）。

图2 样品CT（CP）值表

图3 样品扩增曲线图示

1.7 加强排查，严格疫情报告和疫情处置，加强日常监测

加强引种和检疫管理，要求辖区内养殖场（户）如要从外地引进牛只时，要严格按要求进行申报、调查，加强检疫检验，坚决杜绝从疫区引种，从而杜绝传染来源。不定期由各县（市、区）动物检疫员、疫情测报员、动物防疫员进行疫情普查、排查，如每天进行运输外调检疫和市场检疫，每月进行疫情测报，每季度进行普检监测，发现有疑似牛结节性皮肤病时，实行快报制度，要及时上报，按照"可疑疫情-疑似疫情-确诊疫情"程序认定疫情，采样送检，由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心复检、确诊病例。如果发生牛结节性皮肤病疫情时，立即启动本级牛结节性皮肤病疫情应急预案，划定疫点、疫区和受威胁区，封锁疫区，防止病毒向非疫区传播，防止疫情扩散。开展流行病学调查。开展疫情报告以前样品采集、送检、检测等工作。按要求完成各项信息快报。对疫点采取综合防控措施（对发病牛和病原学阳性牛进行扑杀并无害化销毁处理，同群病原学阴性牛采取隔离饲养，并鼓励提前出栏屠宰；灭杀牛场吸血昆虫及幼虫，清除孳生环境，防范吸血虫媒叮咬；对疫点牛只排泄物、被病原污染物、污染的饲料和垫料、污水等进行无害化处理；对被病原污染或可能被病原污染的物品、工具、器械、圈舍、场地等进行严格彻底消毒，出入人员、车辆和相关设施进行消毒处理）。对疫区采取的综合防控措施（禁止牛只出入，禁止未经检疫合格的牛皮张、精液等产品调出。灭杀牛场吸血昆虫及幼虫，清除孳生环境。对疫区牛只进行监测排查和感染风险评估，及时掌握疫情动态等）。对受威胁区采取综合防控措施（禁止牛只出入，禁止未经检疫合格的牛皮张、精液等产品调出。灭杀牛场吸血昆虫及幼虫，清除孳生环境。对疫区牛只进行监测排查和感染风险评估，及时掌握疫情动态等）。对疫点、疫区、受威胁区等全部牛只采用山羊痘活疫苗进行紧急免疫（按照山羊的5 倍剂量）。加强检疫监管、日常监测、流行病学调查等工作。

2 总体目标任务

1）解决关键问题：建立以来宾市为牛养殖区域牛结节性皮肤监测净化技术规程；加强牛引种落地后隔离观察和兽医实验室检测，为监管提供可靠的数据支撑；开展本底调查。

2）通过对牛场无疫牛群开展山羊痘疫苗免疫接种、监测并淘汰阳性病例，以及时控制和扑灭养殖环节中牛结节性皮肤病病毒的传播风险，到2023 年底，按照农业农村部《关于印发＜牛结节性皮肤病防治技术规范＞的通知》（农牧发〔2020〕30 号）的标准，实现该市肉牛养殖环节净化牛结节性皮肤病的目标。

3）依据《牛结节性皮肤病防治技术规范》淘汰阳性牛，加强免疫监测和宣传教育，维持净化效果。

4）对牛结节性皮肤病防控（区域）监测净化技术进行推广应用，创建1～2 个自治区级无牛结节性皮肤病养殖场（区），引领来宾市牛养殖业的健康发展。

3 小结

牛结节性皮肤病是一种热性、急性或慢性、接触性传染病，在其预防控制、净化工作中，要严格实行：加强宣传和培训、加强普查排查力度、不从疫区引种、加强血清学和病原学监测和检测工作，严格疫情报告和疫情处置，加强疫苗免疫接种工作等措施。

牛结节性皮肤病等动物疫病净化是社会性的服务工作，是发展安全畜牧业的有力保证。对牛结节性皮肤病等动物疫病监测、净化技术进行推广应用，建立牛结节性皮肤病等动物疫病净化示范场，有效增加来宾市养牛业主的养牛信心，可促进来宾市养牛业良性发展。