发酵介质和发酵过程对雪茄烟叶品质的影响

胡婉蓉，蔡 文，郑召君，刘元法，罗 诚，李东亮*

1.四川中烟工业有限责任公司雪茄烟技术创新中心，成都市龙泉驿区成龙大道2 段 610101

2.江南大学食品学院，江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800 号 214122

雪茄烟是完全由雪茄烟叶卷制而成的烟草制品，相比于传统卷烟，具有劲头大、香气浓的特点。雪茄的生产包括栽培、晾制、发酵和养护等多个工段，其中，发酵是改善雪茄烟叶理化性质和吸食品质的重要工序。经发酵处理后的雪茄烟叶颜色变深，成熟度提高，青杂气和刺激性减轻，香吃味趋于和谐［1］。郭文龙等［2］证明了在雪茄烟叶发酵过程中进行翻堆处理可以有效提高雪茄烟叶中性致香物质的质量分数，降低雪茄烟叶的杂气和刺激性。刘仡［3］发现橡木桶发酵可以提高雪茄烟叶的香气质和香气量，改善余味。郑霖霖等［4］发现添加外源酶制剂总体上可提高雪茄烟叶总糖、还原糖、钾和氨基酸的质量分数，降低蛋白质和总氮的质量分数，改善烟叶化学成分协调性及感官品质。李晶晶等［5］发现雪茄烟叶发酵条件为45 ℃和相对湿度85%时对于减少烟草特有亚硝胺的累积效果最佳。

目前，关于雪茄烟叶发酵的研究多集中于发酵工艺的优化，且大部分研究内容较为单一［6-7］。事实上，雪茄烟叶在发酵过程中除了化学组分的变化，微生物的生理活动对雪茄烟叶质量同样具有显著影响。研究人员发现，不同产地、发酵节点的雪茄烟叶细菌和真菌群落结构存在显著差异，这可能是不同来源雪茄烟叶品质存在差距的原因之一［8-10］。此外，在工业生产过程中，发酵介质是促进雪茄烟叶发酵的重要添加物，可以有效提高雪茄烟叶质量。然而，由于行业技术保密，介质的组成和作用机理尚不清晰。因此，本研究中将系统分析雪茄烟叶在发酵过程中化学组成及微生物群落的变化，对比传统加水发酵和介质辅助发酵过程中雪茄烟叶的主要化学组成及微生物群落结构的变化趋势，旨在解析发酵介质和发酵过程对雪茄烟叶品质提升的作用机制，为新型发酵介质的开发和发酵工艺的优化提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

雪茄烟叶材料为2020 年产德雪7 号上部2 级烟叶（未进行工业发酵），介质是一种以枇杷提取物为主要成分的植物提取物，均由四川中烟工业有限责任公司长城雪茄厂提供。

1.2 方法

1.2.1 发酵

称取5 kg 雪茄烟叶，按雪茄烟叶质量的4.35%称取介质并加水稀释，再将其均匀喷洒在雪茄烟叶表面，使雪茄烟叶的含水率为30%±2%；随后将雪茄烟叶装入麻布袋中，再转移至恒温恒湿培养箱内，参照实际生产中的发酵条件在35 ℃、相对湿度75%的条件下发酵35 d，在发酵的第0、7、14、21、28和35天时分别取雪茄烟叶样品，并分别命名为L2-x（随发酵时间的延长，对应的x 分别为1、2、3、4、5 和6）。另将介质替换成等质量的去离子水，按照上述相同步骤完成空白对照组实验，所得样品对应命名为L1-x。所有样品均存放于-20 ℃冰箱内保存。

1.2.2 感官品质评价

将发酵结束后的雪茄烟叶按照长110 mm、周长47 mm 的规格卷制成单料烟，由国家烟草质量监督检验中心颁发证书的5 名评吸专家组成评吸小组，参照长城雪茄厂雪茄烟叶感官品质评价标准［11］采用9分制进行感官品质打分。

1.2.3 化学成分分析

采用连续流动分析法测定雪茄烟叶样品的总糖、生物碱、总氮、还原糖、钾和氯等常规化学成分指标［12］。采用GC 法测定雪茄烟叶中非挥发性有机酸的组成和质量分数［13］。采用GC-MS 法测定雪茄烟叶的致香成分组成，采用内标法定量［14］。

1.2.4 微生物高通量测序及分析

雪茄烟叶样品的微生物扩增子测序委托上海美吉生物医药科技有限公司完成，使用338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'） 和806R（5'-GACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）对16S rRNA基因V3-V4 区进行PCR 扩增；使用ITS1F（5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3'）和ITS2R（5'-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3'）对基因进行PCR 扩增。利用Illumina 公司的Miseq PE300 平台进行测序；使用Fastp 软件对原始测序序列进行质控，使用Flash 软件进行拼接；使用Usearch 软件（version 7.0 http：//drive5.com/uparse/）根据97%的相似度对序列进行OTU（Operational taxonomic units，运算分类单元）聚类并剔除嵌合体；利用RDPclassifier（http：//rdp.cme.msu.edu/）对每条序列与Silva 数据库（SSU132）进行比对，设置比对阈值为70%，得到物种分类注释结果，并进行Alpha 多样性、物种组成和物种差异等分析。

2 结果与讨论

2.1 感官品质评价

从表1可以看出，本实验中使用的雪茄烟叶原料烟气浓度和劲头中等，香气质和香气量较低，燃烧性有待提高，且有明显的杂气和刺激性。添加发酵介质可以提高雪茄烟叶的感官品质，介质发酵组雪茄烟叶的感官评吸得分总体高于空白对照组。其中，介质发酵组雪茄烟叶的香气质、刺激性和余味特征改善明显，香气量和浓度有所提升，燃烧特性变化不明显，表明本介质是一种增加醇和度及圆润感的雪茄提质介质模块。此外，随发酵时间的延长，雪茄烟叶的感官评价得分呈现先增后降的趋势，于21 d 达到最高水平，表明过度发酵不利于雪茄烟叶感官品质的提升。

表1 雪茄烟叶样品的感官评价得分Tab.1 Scores of sensory evaluation for cigar tobacco samples

2.2 常规化学成分分析

雪茄烟叶在发酵过程中的总氮、生物碱、总糖及还原糖质量分数的变化情况见图1。雪茄烟叶的总氮质量分数为3%～4%，生物碱质量分数为4%～5%，与文献［15］的报道一致。在空白对照组中，随着发酵的进行，雪茄烟叶的总氮质量分数没有显著性变化，L1-1 和L1-6 的总氮质量分数分别为3.57%和3.69%。添加介质对雪茄烟叶总氮质量分数没有显著性影响，介质发酵组与空白对照组雪茄烟叶的总氮质量分数在发酵过程中的变化趋势相似。如图1-2 所示，介质发酵组的雪茄烟叶生物碱质量分数在发酵第14 天下降了7.89%，在其他时段变化平缓。研究表明，雪茄烟叶的生物碱质量分数在发酵过程中降低可能是由于在高温高湿的发酵条件下，微生物活动和硝酸盐的氧化分解进一步加强，可促进生物碱转化为烟草特有亚硝胺［16］。此外，添加介质对雪茄烟叶的生物碱质量分数没有明显影响。如图1-3 和图1-4 所示，雪茄烟叶原料的总糖和还原糖质量分数分别为0.53%和0.21%。相比于烤烟，雪茄烟的总糖质量分数较低［17］。空白对照组和介质发酵组的雪茄烟叶在发酵第7 天时总糖质量分数最高，分别为0.56%和0.60%，此后随发酵的进行总糖质量分数呈下降趋势。雪茄烟叶的还原糖质量分数在发酵起始时为最高水平，至第28天时开始低于检测限。该结果与文献［18］的报道一致，总糖和还原糖质量分数的降低可能是由于发酵过程中糖类化合物与氨基酸通过美拉德反应及与酚类和醇类化合物反应生成香气物质，或被氧化降解为水和二氧化碳。此外，添加介质对雪茄烟叶总糖及还原糖的质量分数没有显著性影响（P＞0.05）。

图1 雪茄烟叶样品总氮、生物碱、总糖和还原糖的质量分数Fig.1 Mass fractions of total nitrogen，alkaloids，total sugars and reducing sugars in cigar tobacco samples

烟叶中钾、氯的质量分数及钾氯比通常与烟叶的燃烧性相关［19］。从表2可知，雪茄烟叶中钾的质量分数为3%～4%，氯的质量分数约为2%，钾氯比约为1.5。在持续35 d的发酵过程中，雪茄烟叶中钾的质量分数在第14天达到最高水平，在第21天表现出最低水平。至于氯的质量分数，空白对照组和介质发酵组的雪茄烟叶均在第7天达到最高水平，分别为2.36%和2.18%。两组雪茄烟叶的钾氯比均在第14天达到最高值，且发酵终点的钾氯比显著低于发酵起点。相比之下，添加介质对烟叶钾氯比的整体影响不显著。一般情况下，钾氯比与烟叶燃烧性正相关，钾氯比大于4时烟叶可呈现较好的燃烧性［19］。虽然本研究中发现发酵过程对雪茄烟叶钾氯比影响显著，但本研究中所涉及的雪茄烟叶样品的钾氯比整体呈现较低水平（不高于2）。结合2.1节中的感官评价结果可以发现，尽管发酵过程可以提高烟叶钾氯比，但其提高幅度较小，对雪茄烟叶燃烧性能的影响仍不显著。因此，后续应研究采用其他方法提高雪茄烟叶的燃烧性。

表2 雪茄烟叶样品中钾和氯的质量分数及钾氯比Tab.2 Mass fractions of K and Cl and K/Cl ratios in cigar tobacco samples

2.3 非挥发性有机酸分析

非挥发性有机酸的组成和质量分数对调控雪茄烟叶的内在质量及感官品质具有重要意义，可以平衡烟气的酸碱度、减轻刺激性、提高雪茄烟叶的醇和度［20］。如图2-1所示，相比于发酵起点，在发酵后期雪茄烟叶非挥发性有机酸的质量分数显著下降；在发酵结束时，空白对照组和介质发酵组雪茄烟叶非挥发性有机酸的质量分数分别下降了16.86%和20.28%。此外，在发酵中后期（14～35 d），空白对照组非挥发性有机酸的质量分数呈下降趋势；相比之下，介质发酵组雪茄烟叶非挥发性有机酸的质量分数总体变化不显著，说明添加介质有助于维持发酵过程中雪茄烟叶的酸碱环境，起到平衡雪茄烟气酸碱性的作用。

在所检测到的非挥发性有机酸中，质量分数较高的有草酸、苹果酸和柠檬酸，三者的质量分数之和约为非挥发性有机酸总质量分数的90%，是反映雪茄烟叶成熟度和品质的重要标志。如图2-2 所示，空白对照组的草酸质量分数随发酵的进行没有显著性变化，在发酵第7 天达到最高值（0.23%），相比发酵起点提高了10.74%；类似地，介质发酵组的草酸质量分数也在发酵第7天达到最高水平（0.30%），相比发酵起点提高了40.93%，而在发酵中期（14～21 d）呈现较低水平。从第14天到发酵结束，雪茄烟叶的苹果酸质量分数呈下降趋势，介质发酵组在第14天达到最高值（0.29%）。柠檬酸的质量分数与苹果酸的变化趋势较为相似，空白对照组和介质发酵组均在发酵第28天呈现最低水平，相比于发酵起点分别降低了34.50%和51.98%。以上结果表明，相比于空白对照组，介质发酵组的草酸和柠檬酸的质量分数变化幅度更大，且这两种酸是三羧酸循环的重要代谢物，这说明添加介质促进了雪茄烟叶细胞及表面微生物的呼吸作用，加速了底物代谢和产物生成。据文献［21］报道，雪茄烟叶中苹果酸的质量分数与烟叶品质正相关，而过多的草酸和柠檬酸则会影响雪茄烟叶的口感。因此，从挥发性小分子有机酸的组成来看，介质发酵14～21 d对改善雪茄烟叶的香吃味较为适宜。

图2 雪茄烟叶样品非挥发性有机酸的总量以及草酸、苹果酸、柠檬酸和高级脂肪酸的质量分数Fig.2 Mass fractions of total nonvolatile organic acids，oxalic acid，malic acid，citric acid and higher fatty acids in cigar tobacco samples

除非挥发性小分子有机酸外，高级脂肪酸也对雪茄烟叶感官质量有重要影响。由图2-5 可知，相较于非挥发性小分子有机酸，雪茄烟叶的高级脂肪酸质量分数较低，约为0.03%～0.04%。本研究中的统计学分析结果表明，添加介质对雪茄烟叶的高级脂肪酸质量分数没有显著性影响（P＞0.05）。无论是空白对照组还是介质发酵组，均在发酵第28天达到最高水平（～0.04%）。此外，在持续35 d 的发酵过程中，高级不饱和脂肪酸质量分数的变化趋势与高级饱和脂肪酸相似；在发酵21～28 d 时，空白对照组的高级不饱和脂肪酸质量分数高于介质发酵组，而高级饱和脂肪酸则相反。雪茄烟叶中较高质量分数的高级不饱和脂肪酸会增加烟气的刺激性和粗糙感，降低烟气平滑度［22］。本研究中添加介质有利于减弱雪茄烟叶的涩口感和刺激感，使烟气醇和，进而改善雪茄烟叶的吸食品质。因此，从有机酸质量分数的变化看，介质发酵21 d 对提高雪茄烟叶的感官质量有利，这与2.1节中的感官评价结果吻合。

2.4 致香成分分析

雪茄烟叶在发酵过程中的致香成分质量分数变化趋势如图3 所示，空白对照组与介质发酵组的致香成分质量分数变化趋势相似。随着发酵时间的延长，雪茄烟叶的致香成分总量呈先增加后降低的趋势，空白对照组的致香成分总量在第14天达到最高水平（0.37%），而介质发酵组的致香成分总量在第21 天达到最高值（0.38%）。这说明：①过度发酵不利于雪茄烟叶致香成分的累积，发酵14～21 d可能是较适宜的发酵周期；②添加介质有利于致香成分的累积。该介质中含有糖类、蛋白质、酸类及醇类化合物，除了其自身可以直接提高致香成分的质量分数外，还可以通过提供美拉德反应底物等途径促进致香成分的产生。

图3 雪茄烟叶样品中各类致香成分及新植二烯的质量分数Fig.3 Mass fractions of various aroma components and neophytadiene in cigar tobacco samples

除了致香成分总质量分数的变化，本研究中还分析了不同种类及代表性致香物质的变化趋势。如图3 所示，雪茄烟叶的致香成分以醇类、烯类、酮类和杂环类化合物为主。可以看出，醇类、烯类和酮类致香成分的质量分数随发酵时间的延长呈先增加后降低的趋势，而杂环类化合物的变化趋势则相反。醇类化合物质量分数的最高值出现在发酵28～35 d，约为0.08%～0.09%，比发酵初始增加了20～30 百分点；烯类化合物质量分数的最高值出现在第21 天，分别为0.12%（空白对照组）和0.13%（介质发酵组）；而酮类化合物的最高水平出现在第14天，达0.08%～0.10%。此外，介质发酵组的醇类、烯类、酮类和酯类化合物的质量分数均高于空白对照组，说明添加介质发酵有利于上述致香化合物的累积。

根据分析检测结果，新植二烯是雪茄烟叶最主要的致香成分，其质量分数约占致香成分总量的20%～25%。新植二烯是叶绿素的降解产物，具有醇和烟气、降低刺激性的作用；且可以分解产生呋喃类化合物，进一步改善雪茄烟叶的香吃味［23］。随着发酵时间的延长，新植二烯的质量分数呈先增加后降低的趋势，于第21 天达到最高值（空白对照组：0.10%；介质发酵组：0.12%）。从致香成分总质量分数以及不同种类致香成分和新植二烯这一代表性致香物质的质量分数变化来看，14～21 d的发酵周期对致香成分的累积较为适宜。

2.5 微生物群落结构分析

2.5.1 Alpha多样性分析

采用16S rRNA 和ITS 高通量测序法对雪茄烟叶样品进行微生物测序的结果见表3。可知，所有雪茄烟叶样品的细菌覆盖率为99.88%～99.95%，真菌覆盖率为99.90%～99.98%，覆盖率较高，取样合理，说明测序结果能较真实地反映雪茄烟叶表面微生物群落的分布情况。稀释曲线主要用于表征样品的测序深度，可反映测序数据量的合理性。如图4 所示，雪茄烟叶真菌和细菌群落的稀释曲线随样本序列数的增加而上升并逐渐达到平台期，说明测序深度基本能够反映雪茄烟叶的真菌和细菌群落组成。真菌和细菌的alpha 多样性分析结果如表3所示，Shannon 指数和Chao 指数的大小分别表征群落多样性和丰富度的高低。可以看出，介质发酵组在第7、21 和28 天的细菌群落多样性均高于同时段的空白对照组。根据Chao 指数计算结果，介质发酵组在发酵后期（21～35 d）的细菌群落丰富度高于同时段的空白对照组，说明添加介质能提高发酵21～28 d 的雪茄烟叶细菌群落的多样性和丰富度。此外，当发酵时间在21 d 内时，介质发酵组比空白对照组的真菌多样性更高，随着发酵时间的延长，空白对照组的真菌多样性超过介质组，同时总体微生物多样性随发酵时间的延长而降低。这说明添加介质可能会加速发酵进程，有助于提高雪茄烟叶表面真菌的多样性；且过度发酵不利于雪茄烟叶表面真菌的生长。

表3 雪茄烟叶样品微生物群落的丰富度和多样性Tab.3 Richness and diversity of microbial communities in cigar tobacco samples

图4 雪茄烟叶样品细菌和真菌的稀释曲线Fig.4 Dilution curves of bacteria and fungi in cigar tobacco samples

本研究中基于OTU水平绘制了雪茄烟叶表面微生物群落的韦恩图（图5），以描述群落结构在OTU水平的分布情况。如图5-1所示，对于雪茄烟叶表面细菌而言，其OTU总数目维持在63～178个。雪茄烟叶表面细菌OTU共有数为18个，L2-2（介质发酵7 d）、L2-4（介质发酵21 d）和L2-5（介质发酵28 d）的独有OTU数目相对较多，分别为28、34和35个，表明介质在发酵中期有利于提高雪茄烟叶的细菌群落多样性，并使其形成特有的细菌组成。对于真菌而言，OTU共有数为22 个，样品的特有OTU 数相对较少，只有L2-4（介质发酵21 d）和L1-5（加水发酵28 d）组的OTU 数量相对较多，分别为43 和49 个。由此可知，介质发酵21 d 时，雪茄烟叶中细菌和真菌的多样性均明显提升。

2.5.2 群落结构分析

从图6-1 可以看出，雪茄烟叶的细菌组成主要为4 个门，分别为厚壁菌门（Firmicutes）、蓝细菌（Cyanobacteria）、变形菌门（Proteobacteria）和放线菌门（Actinobacteriota），并以厚壁菌门和蓝细菌为主要优势菌门。在空白对照组中，发酵7～28 d 的雪茄烟叶厚壁菌门的相对丰度较高，均高于70%；在发酵末期，蓝细菌取代厚壁菌门成为优势菌。在介质发酵组中，厚壁菌门在发酵末期占绝对优势，其相对丰度为90%以上，高于同期的空白对照组。雪茄烟叶的细菌结构主要有4个属（图6-2），分别为葡萄球菌属（Staphylococcus）、norank_f_norank_o_Choroplast（未命名菌）、假单胞菌属（Pseudomonas）以及甲基杆菌属（Mehtylobacterium）。在空白对照组中，发酵初期相对丰度最高的菌是norank_f_norank_o_Choroplast；但随着发酵时间的延长，葡萄球菌属逐渐占据优势地位，在7～28 d的发酵期内其相对丰度在70%以上；而在发酵末期，葡萄球菌属所占比例下降，norank_f_norank_o_Choroplast 重新占据优势菌群的主导地位。在介质发酵组中，发酵初期仍是以norank_f_norank_o_Choroplast 为主要优势菌群，随发酵时间延长，葡萄球菌属大量繁殖，在发酵末期成为绝对优势菌，相对丰度高于90%。以上变化说明，添加介质改变了细菌生长的环境，在发酵前期延缓了细菌群落的演替进程。

图6 雪茄烟叶样品的细菌群落结构Fig.6 Compositions of bacterial communities in cigar tobacco samples

从图7-1 可以看出，雪茄烟叶的真菌群落主要有子囊菌门（Ascomycota）和担子菌门（Basidiomycota）两类真菌。对于空白对照组而言，除发酵第7 天（L1-2）外，雪茄烟叶的优势菌门均是子囊菌门，其相对丰度占50%以上；在发酵第7 天时，担子菌门所占比例约为90%，成为优势菌门。添加介质发酵后，雪茄烟叶的子囊菌门相对丰度随发酵时间延长而整体呈下降趋势，在发酵末期降至最低水平；而担子菌门正好相反，随着发酵时间的延长，逐渐成为优势菌门。由此可见，添加介质可以显著改变雪茄烟叶在门水平上的真菌群落结构。真菌在属水平上群落结构丰富、种类较多（图7-2），其群落结构主要可总结为7 个属，分别为节担菌属（Wallemia）、曲霉属（Aspergillus）、枝孢菌（Cladosporium）、Sampaiozyma、链格孢菌（Alternaria）、匍柄霉属（Stemphylium）和德巴利酵母属（Debaryomyces）。在发酵起始时，空白对照组及介质发酵组雪茄烟叶均以曲霉属为优势菌属，随着发酵的进行，节担菌属的相对丰度提高。加入介质后，雪茄烟叶中的曲霉属仍存在较高的比例，直至发酵末期显著降低，而节担菌属的相对丰度随发酵时间延长，总体呈现上升趋势，在发酵末期（35 d）的相对丰度达80%，为最主要的优势菌属。

图7 雪茄烟叶样品的真菌群落结构Fig.7 Compositions of fungal communities in cigar tobacco samples

在本研究中，雪茄烟叶中的葡萄球菌属、节担菌属及曲霉属优势性明显。根据文献［8］的报道，国外（古巴和多米尼加）雪茄烟的葡萄球菌属的相对丰度一般高于国产雪茄烟叶，海南雪茄烟叶则以芽孢菌属为优势细菌。此外，在雪茄烟叶发酵过程中，葡萄球菌属的优势性逐渐突显［7］。尽管近年来不断证实葡萄球菌属存在于雪茄烟叶中，但其在雪茄烟叶发酵过程中的贡献和功能尚不清晰。在食品领域，葡萄球菌属在腊肉和香肠的发酵过程中可以代谢产生支链氨基酸促进食品风味形成；而氨基酸与糖类的美拉德反应是烟草香味成分的重要形成途径。由此可见，在发酵中期（14～21 d），葡萄球菌属的富集有利于致香成分的累积。假单胞菌属是烤烟烟叶中比较常见的一种细菌，在本研究中，只有L2-2组（介质发酵第7 天）的雪茄烟叶中发现了一定丰度的假单胞菌属。由于假单胞菌属具有降解烟碱的性能［8］，因此介质发酵组雪茄烟叶的生物碱质量分数在第14天显著下降（图1-2）可能是该时段雪茄烟叶中假单胞菌属的相对丰度提高导致的。节担菌属与黄酮类化合物的生成有关［24］；而曲霉属作为潜在致病真菌或条件致病真菌，不仅可能对吸烟者或烟草从业人员健康造成影响，同时也是雪茄烟叶霉变的主要原因［25-26］。因此，相比于空白对照组，介质发酵组中节担菌属的优势性有利于黄酮类化合物的累积，进而促进致香成分的产生。考虑到雪茄烟叶是混菌发酵体系，单一菌群的作用对雪茄烟叶品质的影响有限，后期应继续加强混菌体系的研究，以便更好地为雪茄烟叶发酵工艺控制提供指导。

3 结论

①德雪7 号雪茄烟叶中总氮和生物碱的质量分数在发酵过程中整体变化不明显，而总糖和还原糖的质量分数随着发酵的进行呈下降趋势，糖类的消耗可能是通过美拉德反应等过程转化为致香物质导致的。②雪茄烟叶中非挥发性有机酸质量分数的变化表明添加发酵介质有利于减弱雪茄烟叶的涩口感和刺激感，且发酵14～21 d 对改善雪茄烟叶的香吃味较为适宜。致香成分质量分数的分析结果进一步证明了介质发酵14～21 d 有利于致香物质的累积。③介质发酵21 d 时，雪茄烟叶的细菌和真菌多样性均明显提升。添加介质在发酵前期延缓了细菌群落的演替进程，提高了雪茄烟叶表面真菌的多样性，葡萄球菌属和节担菌属的富集是雪茄烟叶致香成分累积的原因之一。