银黄二陈合剂对鸡自然感染传染性喉气管炎的疗效试验

张传津 牛华星 魏茂莲

(山东省饲料兽药质量检验中心，山东 济南 250010)

喉气管炎(Laryngotracheitis，LT)是鸡的一种病毒性呼吸道传染病，喉气管炎病毒(LTV)属于疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科，鸡是LTV的自然宿主，可引起鸡死亡和产蛋下降，感染LTV后一般在6～12d出现临床症状，在气管内人工感染的潜伏期较短，一般为2～4d，典型的症状为流涕和湿性啰音，后出现气喘咳嗽，此病严重流行的特征是明显的呼吸困难并咳出血样黏液，本病严重流行的发病率在90%～100%，死亡率在5%～70%，平均为10%～20%。温和型的症状包括病鸡消瘦、产蛋下降、流泪、结膜炎、眶下窦肿胀、持续性流涕和出血性结膜炎等。目前没有LTV传播给人或者其它哺乳动物的证据。该病主要通过呼吸道及眼传染，也可经消化道传染。本病自然感染潜伏期为6～12d，感染后排毒期为6～8d，少部分康复鸡可以长期带毒，排毒期可以长达2a。鸡传染性喉气管炎主要呈地方性流行，同群传播较快，群间传播较慢[1,2]。病变损伤可以出现在感染鸡的结膜和整个呼吸道，但最常见于喉头和气管。喉头和气管的变化轻微时仅存在过量的黏液，严重时则有出血或者白喉样病变。温和型的LT损伤轻微，仅包括结膜炎、窦炎、黏膜性气管炎。严重感染时，初期为黏液性炎症，随后出现变性、坏死和出血。常出现白喉型病变，可以看到黏液团延伸于整个气管。一些病例出血严重进入气管内形成血块，或者血液中混合黏膜及坏死的组织。炎症可以向下扩散到肺脏和气囊。在温和型的LT中，大体病变可能仅是结膜上皮和眶下窦水肿、充血。LTV感染鸡只后，病毒在咽喉和气管的上皮细胞及其他的表膜黏液如结膜、呼吸窦、气囊和肺脏中复制。LTV对这些组织通常是细胞裂解性的，尤其是气管，导致上皮细胞的严重损伤和出血。临床上，LTV持续存在的一个主要特征是呼吸道潜伏感染。目前还没有有效的药物来减轻病变和减缓发病症状。疫苗接种是使易感鸡群产生保护的最好方法。但目前使用的弱毒疫苗可引起一系列副反应，如由免疫鸡传递给非免疫鸡、产生潜伏带毒鸡，或者由于体外病毒的传代导致毒力增强[1,2]。对于鸡传染性喉气管炎，西医常采用的治疗方法为抗病毒药结合抗生素，目的在于缓解症状、降低死淘率。但是，该方法弊端明显，不仅会对鸡的肝脏及肾脏造成损伤，影响鸡的生长发育和产蛋率的恢复，而且易产生耐药性，难以避免药残等问题。研究证明，许多中药具有抗病毒和增强免疫的作用，且应用安全。

中兽医学认为，鸡传染性喉气管炎属于典型的温病范畴，温热相辅相成，病位在肺，证见痰饮咳喘。李景峰等[3]根据中医温病学辨证论治的原则，研制防治鸡传染性喉气管炎的纯中药散剂，主要由栀子、连翘、菊花、蟾酥、杏仁、冰片、牛黄、麻黄、黄芪、党参、杏仁等组方而成，对患有传染性喉气管炎的病鸡用此方进行防治试验，试验分别设置了预防组和治疗组，结果显示，预防用药组发病率为6%，空白对照组为78%，自然感染组的治愈率达98%以上，疗效显著；杨俊琦[4]选用黄芪、大青叶、连翘、桂枝、板蓝根等中药自组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号中药配方，以观察3组配方对人工感染鸡传染性喉气管炎(ILT)的治疗效果，用药5～7d后，发现Ⅰ号方剂的治疗效果较显著，存活率为96%，不仅改善传染性喉气管炎的临床症状，同时还具有增重效果。东彦新等[5]研发了2种治疗鸡传染性喉气管炎的中药复方散剂配方，对人工感染鸡传染性喉气管炎的治疗试验结果表明，用药组的临床症状及病理剖检结果均明显好于攻毒对照组，其中方Ⅱ的治疗效果优于方Ⅰ。陈庆勋等[6]根据鸡传染性喉气管炎的发病特点，研发2组治疗鸡传染性喉气管炎纯中药配方，用药途经分别为内服与喷洒咽喉，人工攻毒出现症状后开始用药，结果显示，采用内服与喷洒咽喉相结合的用药方法效果显著，发病鸡存活率明显高于其它对照组。杜云良等[7]研发的复方中药散剂，对人工感杂鸡传染性喉气管炎的产蛋期蛋鸡进行防治试验，分别采用直接拌料和开水冲泡后的药液混饮给药，结果发现，冲泡给药组的治疗效果优于直接拌料组，且不影响产蛋率。

从中兽医辨证论治学说而言，鸡传染性喉气管炎属于典型的温热病范畴，治疗应以祛除热邪，清肺利咽，化痰止咳平喘为原则。对于本病的防治，我国学者虽进行大量研究，也证实了中药在治疗鸡传染性喉气管炎中的确切疗效，但是这些研究成果只停留在中药散剂及单独的煎汤使用，与集约化的养殖现状不匹配。目前《中国兽药典》等法定标准收载的喉炎净散、清肺散、定喘散等对治疗ILT有一定的疗效。然而，这些传统中药散剂只能混饲给药，不适合目前集约化养殖企业用药。银黄二陈合剂是纯中药复方新制剂，由多味药物提取、浓缩而成的口服溶液剂，具有清热燥湿、化痰止咳、理气和中之功效。本产品通过优化中药材提取工艺、浓缩工艺、成型工艺等技术环节，中药有效成分转移率提高10%～30%，从而也提高了药效、生物利用度和临床疾病治愈率。通过银黄二陈合剂对确诊为传染性喉气管炎的自然感染鸡群的防治试验，验证银黄二陈合剂对鸡传染性喉气管炎病毒等引起的温热咳嗽证候的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物

银黄二陈合剂，批号20210701，山东迅达康兽药有限公司生产。对照药物，桑仁清肺口服液，批号20210201，山东华尔康兽药有限公司生产。

1.1.2 试验动物

山东潍坊某养殖场中自然发病的60日龄海蓝褐蛋鸡。

1.1.3 主要仪器设备

PCR仪(AB2700)，美国应用生物系统中国公司；凝胶成像分析仪(WD-9413A)，北京六一仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 试验病例诊断和纳入标准

经查阅国内外文献，根据其临床发病特点及分子学诊断方法，自行制订本试验病例诊断标准为具有ILT典型临床症状(张口呼吸，呼吸罗音，甩鼻，鼻部有分泌物，眼睑肿胀)和特征性剖检病变(喉头和气管粘膜肿胀、出血、有分泌物)，且喉拭子PCR检测ILTV为阳性的病例，诊断为ILT病例[1-3]。

1.2.2 受试鸡群的确定

2020年12月，山东省潍坊某蛋鸡场的2000余只同批次海蓝褐蛋鸡，在60日龄左右陆续发病。临床表现为整体采食和饮水减少，病鸡精神萎靡，羽毛松乱，鸡冠发绀。分泌物堵塞鼻孔，流鼻液，甩鼻，眼睑肿胀结膜充血，睁眼困难，眼角堆积分泌物，有的有泡沫。呼吸有湿性罗音，伸颈张口呼吸，气喘伴咳嗽。死亡率达到13%。剖检病死鸡，病变主要在喉头和气管，有白喉样病变，黏液团覆盖整个气管，有的气管内形成血块，并混合粘膜及坏死组织；肺脏有瘀血、出血。鸡舍内多点采集病鸡喉拭子，经PCR检测ILTV均为阳性。病鸡气管病变见图1，PCR检测结果见图2。

根据本试验病例诊断标准，判定该鸡场所感染疾病为鸡传染性喉气管炎，患鸡数量较多，故将其选为受试鸡群。根据本试验病例纳入标准，在确诊鸡群中选择出600只患鸡进行银黄二陈合剂的扩大临床试验，确保所选患鸡的品种、饲养管理、试验前使用的饲料疫苗兽药完全相同，发病情况相似。

图1 试验鸡场ILV病鸡气管内壁出血

注：泳道M为Marker；泳道1～5为发病鸡喉拭子扩增产物(643bp)。

1.2.3 动物分组与处理

试验用鸡在另一经过消毒处理的鸡舍中由专人隔离饲养。随机分为2个组，银黄二陈合剂组和桑仁清肺口服液组，每组300只。根据实验性临床试验结果，银黄二陈合剂组按2.0mL·L-1剂量在饮水中添加银黄二陈合剂，全天自由饮用，桑仁清肺口服液组按1.5mL·L-1剂量在饮水中添加桑仁清肺口服液，试验开始后2组不再使用任何其他药物。2组鸡同时投药，连续用药5d，用药结束后观察5d。试验期间分别记录2组的病程发展及死亡情况，试验结束后统计2组的治疗有效率、治愈率和死亡率。

1.2.4 疗效评价标准

1.2.4.1 死亡率

试验期间出现ILT典型临床症状并死亡，且剖检具有典型的ILT病变特征，判定为感染传染性喉气管炎死亡鸡。死亡率计算公式：

死亡率=死亡鸡数/试验鸡数

1.2.4.2 有效率

观察期结束后，精神、采食、饮水及粪便情况明显好转，临床症状明显减轻者判为有效；有效鸡数占每组试验鸡数的百分率为有效率。

1.2.4.3 治愈率

观察期结束后，其精神状态、食欲、呼吸等恢复正常，临床症状完全消失者均属治愈。治愈率计算公式：

治愈率=症状消失鸡数/发病鸡数

1.3 数据统计分析

应用SPSS 17.0 统计软件对试验数据进行分析。

2 结果分析

2.1 银黄二陈合剂对自然感染ILT病鸡临床症状的影响

用药3d后，2组试验鸡群精神状态逐渐好转，打蔫、精神沉郁的鸡只明显减少，摄食和饮水逐渐恢复。用药5d后，银黄二陈合剂组的大部分鸡鼻部分泌物消失，呼吸姿势正常，极少发出呼吸啰音，桑仁清肺口服液组鼻部分泌物症状略重。

2.2 银黄二陈合剂对自然感染ILT死亡情况的影响

经用药治疗后两组的死亡情况均有所减轻。第5天银黄二陈合剂组停止死亡，桑仁清肺口服液组直至试验结束前仍有个别死亡。至试验结束时，银黄二陈合剂组和桑仁清肺口服液组的死亡率分别为5.7%和6.7%，2组间比较差异不显著(P>0.05)。试验期间2组的死亡情况见表1。

表1 试验期间各组鸡死亡情况(n=300)

2.3 银黄二陈合剂对自然感染ILT的治疗效果

银黄二陈合剂组和桑仁清肺口服液组的治疗有效率(即存活率)接近，治愈率分别为80.3%和73.7%，2组间比较差异不显著(P>0.05)。2组的治疗效果见表2。

表2 银黄二陈合剂对自然感染ILT的治疗效果(n=300)

3 讨论

温热类温病是中医临床常见的一类疾病，属外感热病范畴。相当于现代医学中各种急性传染病、感染性疾病及许多发热性疾病。邪扰、阴伤、气耗、血瘀是温病的4个基本病理变化，且贯穿于病程始终，而在瘟热类温病中外邪侵扰往往占有主导的地位[8]。鸡传染性喉气管炎可引起病鸡气管分泌物增多、气喘咳嗽、呼吸困难、呼吸道充血淤血，从中兽医辨证论治学说而言，鸡传染性喉气管炎是由瘟疫之毒犯肺引起的一种肺热痰火之症。疫毒犯肺，肺失宣降，导致水道失调，水湿内阻，治疗应以祛除热邪，清肺利咽，化痰止咳平喘为原则。

银黄二陈合剂组方来源于治疗湿痰咳嗽的经典方剂“二陈汤”(宋代《太平惠民和剂局方》)，经加味改良而得，由黄芩、金银花、姜半夏、陈皮、茯苓和甘草6味组成。“二陈汤”由半夏、橘红、茯苓、甘草4味药组成，针对鸡传染性喉气管炎肺热痰火主症，筛选添加黄芩、金银花经典药对，其中，黄芩清肺热燥痰湿，泻火解毒[9-11]，金银花清热宣肺，解毒泻火[12-15]，共为君药，方中陈皮、半夏也是临床经典药对，半夏、陈皮皆以陈久者良，而无过燥之弊，故方名“二陈”。半夏辛温燥烈，擅长燥湿化痰，降逆止呕；陈皮辛苦而温，长于理气健脾，燥湿化痰。二者合用，半夏得陈皮之助，则气顺而痰自消，化痰湿之力尤胜，陈皮得半夏之辅，则痰除而气自下，理气和胃之功更著。二者相使相助，共奏燥湿化痰、健脾和胃、理气止呕之功，共为臣药，佐以茯苓健脾渗湿，渗湿以助化痰之力，健脾以杜生痰之源。甘草药之国老，清热解毒，润肺止咳，调和诸药性，以为佐使。诸药相合，共奏清热解毒、燥湿化痰，理气和中之效。

综上所述，本产品由多味药物提取、浓缩而成，所用中药来源广泛，价格低廉。该药既有清热解毒、燥湿化痰、理气和中的作用，又可降低病鸡病毒载量，从而达到标本兼治的效果，故可用于鸡传染性喉气管炎病毒等引起的温热咳嗽证候。

本试验开始后停用了除试验设计用药外的所有其他药物，随用药时间延长，2组鸡群症状明显减轻，死亡率均呈下降趋势。银黄二陈合剂组在连续用药4d后死亡情况得到控制，而桑仁清肺口服液组直至试验结束前仍有个别死亡。试验结束时，银黄二陈合剂组和桑仁清肺口服液组的有效率分别为94.3%和93.0%，治愈率分别为80.3%和73.7%，证实银黄二陈合剂可以有效治疗鸡传染性喉气管炎。

4 结论

该治疗试验表明，服用推荐剂量的银黄二陈合剂对自然感染的鸡传染性喉气管炎有明显的治疗作用。推荐用法用量：2.0mL·L-1混饮，连用5d。