巨噬细胞移动抑制因子、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白及循环肿瘤细胞在骨肉瘤中的表达及临床意义
2023-03-14郭一帆李龙程虎
郭一帆,李龙,程虎
商洛市中心医院脊柱外科,陕西 商洛 726000
骨肉瘤多发生于儿童及青少年,研究发现,骨肉瘤患者术后5年生存率较低,仅为20%,不利于青少年健康成长,随着化疗手段及技术的进步,骨肉瘤患者5年生存率有了明显提高[1-2]。临床仍在不断寻找有效的、特异性的分子靶向治疗方案,从而达到改善患者预后的目的。巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibity factor,MIF)是一种细胞因子,与细胞增殖、分化、血管生成相关,在恶性肿瘤中过度表达。伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs,RECK)具有干扰肿瘤基因表达、抑制肿瘤转移的作用,是恶性肿瘤转移及复发的关键因素之一。外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)能在特定条件下进入血液循环,在原发灶或转移灶肿瘤细胞分化环节中均有参与,可促进肿瘤生成及发展。检索相关文献发现,MIF、RECK及CTC在骨肉瘤中均异常表达[3-5],但关于其与骨肉瘤预后关系的研究鲜有报道。本研究探讨MIF、RECK及CTC在骨肉瘤中的表达及临床意义,为临床对骨肉瘤患者实施分子靶向治疗提供参考,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2018年2月至2020年2月在商洛市中心医院治疗的骨肉瘤患者的病历资料。纳入标准:①经病理组织学检查确诊为骨肉瘤[6],且在商洛市中心医院初次确诊;②入院前未接受包括放化疗在内的任何治疗。排除标准:①确诊为骨巨细胞瘤;②合并其他恶性肿瘤;③明显肝肾功能异常;④合并严重内科疾病。根据纳入、排除标准,共纳入132例骨肉瘤患者,设为观察组,其中,男性70例,女性62例;平均年龄(32.49±7.41)岁;低中分化69例,高分化63例。选取同期在商洛市中心医院进行手术治疗并经病理检查确诊为软骨瘤的129例患者,设为对照组,其中,男性73例,女性56例;平均年龄(32.81±7.01)岁。两组患者性别、年龄比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准通过,所有患者均知情同意。
1.2 检测方法
1.2.1 MIF、RECK检测方法收集标本统一进行分割保存,采用免疫组化染色法检测MIF、RECK蛋白表达情况。将标本从液氮中取出后放入4%多聚甲醛中,固定处理48 h后取出,使用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)漂洗,之后将标本包埋处理,做成3 μm厚度的切片。将切片进行免疫组化染色:均经甲醛溶液固定、石蜡包埋、载玻片泡酸、高温灭菌用PBS洗涤及多聚赖氨酸涂片等处理,随后进行染色及苏木精复染、脱水、树胶封固。最后在显微镜下观察。根据细胞膜或细胞质内的染色强度和阳性细胞比例进行MIF、RECK阳性判定,由两位病理科医师独立打分。阳性细胞比例评分:≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分;染色强度评分:未染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。染色指数=阳性细胞比例评分+染色强度评分。染色指数≥3分为阳性表达,染色指数<3分为阴性表达[7]。
1.2.2 CTC检测方法采用酶联免疫吸附法检测血清CTC水平。CTC阳性判定:5 ml外周血中只要发现CTC即可判定为阳性[8]。
1.3 随访
对132例骨肉瘤患者进行为期2年的随访(随访方式为电话随访),随访截止时间为2022年2月,记录骨肉瘤患者的生存及死亡情况。
1.4 统计学方法
采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料以例数及率(%)表示,组间比较采用χ2检验;影响因素分析采用Cox多元回归分析;以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MIF、RECK、CTC阳性表达情况的比较
观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。(表1)
表1 两组患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况的比较[ n(%)]
2.2 不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况的比较
随访2年,132例骨肉瘤患者中,死亡58例,生存74例。死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,差异均有统计学意义(P<0.01)。(表2)
表2 不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况的比较[ n(%)]
2.3 骨肉瘤患者预后影响因素分析
以性别、年龄、肺部转移、规律化疗、分化程度、MIF表达、RECK表达、CTC表达为自变量,以预后死亡为因变量进行Cox比例风险回归分析。单因素分析结果显示:性别、年龄及规律化疗情况均可能与患者预后无关,而发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均可能与患者预后有关(P<0.05)。将单因素分析中差异有统计学意义的因素带入多因素分析,结果显示:发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。(表3)
表3 骨肉瘤患者预后死亡的影响因素分析
3 讨论
骨肉瘤是常见于间叶组织的原发性恶性肿瘤,有70%~80%的患者发病年龄为10~25岁,以股骨、胫骨、腓骨等部位多发,临床症状为病灶局部疼痛、软组织肿胀及运动功能受限等[9]。研究发现,骨肉瘤的分子机制复杂,在该病发生的过程中有多种蛋白参与,并影响病情进展[10]。分子靶向治疗为目前的研究热点,通过改变癌基因,在分子水平阻断肿瘤细胞信号转导通路,以阻碍肿瘤细胞生长、分化、转移。
研究发现,MIF有助于恶性肿瘤(如肝癌、前列腺癌等)许多方面的进展,包括细胞增殖、存活、侵袭和血管生成[11]。骨肉瘤多发生于骨骼系统中长骨的两端,这些部位血管比较丰富,为肿瘤的生长、转移和复发提供了有利条件,而MIF表达与血管生成、肿瘤细胞转移密切相关[12]。RECK在肿瘤组织中表达量较低,其作为基质金属蛋白酶抑制剂,具有调控细胞分化及凋亡的作用,在恶性肿瘤组织中,若RECK表达量显著降低,则表示肿瘤可能发生侵袭及转移[13]。CTC存在于外周血中,若在肿瘤原发灶种植,将加重患者病情,为肿瘤转移及复发创造有利条件。有学者发现,在乳腺癌、结肠癌等恶性肿瘤中,均存在CTC[14]。本研究结果显示,观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,与以往研究所得结果一致[15]。可见MIF、CTC、RECK均与骨肉瘤发生、发展有一定联系,将三者作为早期骨肉瘤的诊断指标应用于临床有重要意义。
本研究结果显示,死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素,说明MIF、CTC、RECK在骨肉瘤患者预后中发挥重要作用。
综上所述,MIF、CTC、RECK可用于骨肉瘤患者早期诊断及预后评价中,三者可能为骨肉瘤患者的潜在治疗靶点,但MIF、CTC、RECK在骨肉瘤患者中的具体作用机制仍未阐明,有待后续进行深入研究。