牛伪狂犬病的诊断与防疫措施

2023-03-04吾买尔江牙合甫阿丽米热买买提艾海提买买提

畜禽业 2023年5期

吾买尔江·牙合甫,阿丽米热·买买提,艾海提.买买提

1.新疆农业大学动物医学学院新疆草食动物新药研究与创制重点实验室,新疆乌鲁木齐 830052 2.哈密市伊州区陶家宫镇人民政府农业(畜牧业)发展服务中心,新疆哈密 839000

0 引言

伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)又叫“奥耶斯基氏病”(aujesky’s disease ,AD),是由猪疱疹病毒Ⅰ型引起的伪狂犬病病毒。该病发现于1813年,多数家畜动物出现瘙痒、狂躁后死亡现象,1912年该病被设立为独立的一个疾病。猪一直被认为是唯一的自然宿主和宿主,并且PRV病猪或PRV携带猪是PRV的主要传染源,它能引起家畜、野生动物的急性致死性传染病[1]。国内外陆续报道有羊、狼、貂、狐狸感染PRV的事件发生,牛养殖场中牛伪狂犬病也时常发生,称“疯痒病”(Maditch),主要表现为狂躁、咽喉麻痹、呼吸困难以及发热、局部痒,脑脊髓炎症状为主要临床特征,感染后病死率高、病程短,致死率高达90%～100%。

1 病原学

伪狂犬病病毒属疱疹病甲亚科,核衣壳直径为105～110 nm,病毒粒子呈球形,线状双股DNA病毒,直径在110～150 nm。病毒有囊膜,囊表面有呈放射状排列的纤突,长8～10 nm。病毒可在猪肾、兔肾、牛睾丸、鸡胚成纤维等多细胞中生长繁殖,并形成核内嗜酸性包涵体。伪狂犬病病毒只有一个血清型,发病初期存在于血液、乳汁、实质器官和尿中,后期存在于中枢神经系统。动物一旦感染将终生带毒,呈隐形感染状态[2]。该病毒对外界因素的抵抗力比较强,pH值在4～9稳定,对热、紫外线及乙醚、稀盐酸均敏感,56 ℃维持30 min、70 ℃维持10 min、100 ℃维持1 min病毒即可灭活,或利用0.5%～1%氢氧化钠溶液也可很快杀灭病毒。此外,病毒可在被病毒污染的厩舍环境存活30 d左右,动物尸体内存活11 d(盐腌20 d)。空气湿度超过55%时,可存活7 d。在一定天气条件下,气溶胶传播范围可达2 km。不同季节变化中夏天存活30 d,冬天可存活46 d,冷冻条件下可保存2年[3]。

2 流行病学

牛伪狂犬病一般呈地方性流行或流行性,一年四季均可发生。被感染牛、流产的胎儿(死胎)、带毒鼠类是该病的主要传染源[4]。被感染动物的鼻黏液、唾液、尿液和乳汁、飞沫(气溶胶)以及污染圈舍饲的草料、饮水、垫草、圈舍等均携带病毒。经呼吸道(鼻腔)、消化道(口腔)感染是该病的传播途径。

另外,有文献报道牛、羊、猪、犬、猫、狐狸、狼等35种家畜、野生动物均可发生传播感染。牛的传播与接触犬、猪、鼠有关,其中牛、猪混养是引起牛伪狂犬病发生的主要原因,生猪与牛同在一房舍关养的伪狂犬病数占年报76.3%,猪先感染发病后再引起牛感染病占年报的89.2%[4-5]。此外牛与牛之间,牛与猪之间也会交叉传播感染[6]。

3 临床特征

牛伪狂犬病潜伏期为3～6 d,很少超过10 d,患牛病初表现为局部皮肤强烈瘙痒、眼球塌陷、犬坐姿势。患牛不停舔咬从而引起鼻部、乳房、后肢等发生皮肤脱毛、充血现象[7]。据报道,伪狂犬病病毒能抑制肺泡巨噬细胞功能,降低细胞消灭细菌的能力。此外伴随精神沉郁、饮欲食欲减少或废绝、反刍停止、泌乳减少、体温高达40 ℃以上。后期病牛表现狂暴不安、异常鸣叫、前后肢刨地、不断起卧,随着病情加重表现出痉挛加剧、咽麻痹、流涎、呼吸急促、心跳加速、全身痉挛,最终死亡。常见成年牛发病24～48 h、幼畜1 d内即死亡[8]。

4 病理变化

病死牛患部皮肤增厚2～3倍,被毛脱落,撕裂、糜烂,皮下和肌肉组织有多黄色胶样浸润或混有血液。由于水肿或出血延伸到皮下水肿组织和下颌下肌肉而显着增厚[9-10]。中枢神经症状明显,脑、脑膜充血,脊髓液增多。肺部出现明显的肺水肿,心包积液[11];消化道黏膜充血和出血,肝淤血肿大,其上可见少量灰白色坏死点。组织病理学检查可见弥漫性非化脓性脑膜脑炎、神经节炎症、胶质细胞坏死等病变[12-13]。淋巴细胞浸润心外膜、心包、胸腺、肾脏、肺等组织[14]。

5 诊断

5.1 牛伪狂犬病的诊断

1)发病期一般为3～6 d,急性、剧烈的局部瘙痒,转圈、轻瘫、癫痫、眼球震颤、狂躁,伴有高热、呼吸窘迫现象。

2)中枢神经系统紊乱,出现浆液性鼻炎、坏死性扁桃体炎、坏死性支气管炎、坏死性细支气管炎、肺淋巴结出血现象。

3)养殖场有病猪的接触史、发病史或被其他动物咬伤痕迹等。

4)家兔对伪狂犬病病毒敏感性较高,可将疑似病牛血清肌肉注入1～2 mL到兔体内,观察24～48 h,注射部位出现奇痒,啃咬,破损和出血现象。后期家兔衰竭,倒卧、痉挛、呼吸困难死亡[15],即可初步诊断为牛伪狂犬病。

5)为确诊病例,眼观、镜检病变诊断外,还可进行病毒分离、免疫荧光抗体、血清学等方法。在病牛症状未出现典型临床症状情况下,需要采取实验室诊断。发病死亡采取可疑病牛脑、延脑、小脑、肝、脾、肺等部位,制作压片、冰冻切片等开展荧光抗体染色检测。需要注意的是为防止鼻组织样品送实验室期间细菌污染,事先准备添加抗生素的无菌生理盐水,以免影响检测结果。血清学技术、分子生物学方法已成为PRV的常规诊断方法[16]。血清学技术中ELISA是PRV抗体临床检测中最常用的方法,与其他筛选测定相比ELISA特异性和灵敏度较高。我国已开发出靶向gB或gE抗体的竞争性ELISAs(cELISA),目前该技术以商业化并得到广泛应用[17-20]。分子生物学方法中一般来说,PCR和RT-PCR是快速检测PRV感染或区分PRV野生型和疫苗株最常用的方法[21]。此外,环介导等温扩增(LAMP)检测具有更高的灵敏度、特异性、快速性和成本效益,更适合于现场PRV诊断[22]。文献报道PRV的检测可采用新型高通量测序、下一代和第三代测序(NGS和TGS)等方法,但高通量测序方法成本高,不合适临床检测[23-24]。此外,养殖场PRV与其他疾病可能存在混合感染现象。

5.2 与狂犬病的鉴别诊断

在诊断中还应注意牛伪狂犬病与牛狂犬病的区别,相关文献中袁凤燕等[25]报道牛伪狂犬病与李氏杆菌病混合感染。黄立等[26]报道仔猪群主要由伪狂犬病毒和大肠杆菌、沙门氏菌的混合感染。杨颖等[27]报道某养殖场育肥猪发病确诊为伪狂犬野毒、圆环病毒混合感染。郑彬等[28]报道保育猪群发病中一例病猪是伪狂犬和链球菌病混合感染。因此,实验室检测时有必要与病畜临床、病理症状开展相关分析,防止出现误诊,导致药物滥用、盲目治疗的现象,给养殖者带来严重的经济损失。具体如下。

1)牛狂犬病毒属于弹性病毒科狂犬病毒属,与伪狂犬病毒不同。狂犬病症是渐进性的,持续时期较长,临床过程分为前驱期、急性兴奋期、麻痹期等。病牛发生跛行、脊髓、大脑、颅神经、泌尿生殖道、胃肠道等症状。

2)通常情况下,养殖场环境中狂犬病病毒不存在气溶胶传播风险。动物被其他动物咬伤后,带有病毒的唾液接触动物组织而发生传播。

3)狂犬病具有攻击人畜行为,吼叫(嘶哑、哀鸣)、视力障碍、厌食、表现恐惧和高度紧张,性机能亢进,频繁交配爬跨,角弓反张,离群独处,共济失调,流涎,皮肤不发生瘙痒现象。

4)泌乳期患病奶牛泌乳突然停止,警觉,双眼、双耳随外界声音反应迅速。

5)患病动物出现麻痹症状和突然死亡现象。

6)狂犬病病毒不能通过血液传播。家兔皮下、肌肉注射疑似动物血清,不出现奇痒现象。

7)实验室组织学检查诊断中,疑似患病动物小脑蒲金野氏细胞、海马角神经细胞可发现基氏小体。

6 防控手段

1)重点发展科学、标准、现代化养殖场,依照家畜养殖特点,完善养殖模式,进行统一管理、培训,定期开展动物疫病防控专题讲座,提高养殖人员、兽医人员操作技能,以逐年改进和提高养殖场家畜产品的质量安全。曾有发病史养殖场内的阴性健康牛,出售前必须检测血清中和试验后方可出售。养殖场须逐年开展增加采样、检测和无害化工作,逐步消灭病毒。

2)目前尚无有效特异性治疗方法,日常加强饲养管理,严格将猪与牛及其他动物分开饲养,持续做好防鼠、捕鼠和灭鼠工作。冬季是鼠类动物进入圈舍寻食时期,应该更加注重灭鼠工作。

3)新进家畜时须加强家畜调运关,加强检疫申报制度,应检必检,杜绝瞒报漏报[29]。引进牛时提前做好养殖场及调运车辆的消杀防疫工作,引进牛必须进行严格检疫,用基因缺失ELISA试剂盒进行血清学检测,防止带入病原引发疫情。此外,新引进家畜应场外隔离15 d后再放入养殖场[30-31]。

4)发病养殖场及圈舍,可用伪狂犬病弱毒冻干疫苗或牛羊伪狂犬病氢氧化铝甲醛疫苗,成年牛10 mL(皮下),犊牛8 mL,1次/年。牛舍、被污染的环境区、运动场用10%的石灰乳进行消毒;工具、饲槽、门窗墙壁用2%热氢氧化钠溶液、5%石炭酸、次亚氯酸钠、磷酸三钠等消毒剂进行喷洒,并将排泄物无害化处理[32-33]。对病死家畜进行深埋处理,防止野狗、猫偷吃尸体[34]。

5)对于常发病地区的大型养殖场,要定期开展血清学检测,阳性病牛被淘汰后,再重复进行血清学检测,确保全部检测结果为阴性。

6)兽医相关部门应当建立检测实验室,完善科研仪器,有利于各类突发疾病被及时、快速检测,达到精准治疗、精准防控的目的。养殖技术人员应严格依照实验室诊断结果,淘汰患病动物,对已经出现神经症状的一律捕杀,严格依照GB16548《病害动物及动物产品无害化处理规程》的规定销毁处理。养殖场发病点方圆3 km内的牛全部要进行紧急免疫接种。