长链非编码RNA PCGEM1、microRNA-642a-5p表达与HPV阳性宫颈癌根治术术后复发的关系研究*

谭立凤，赵萌，祝愿

（淄博市妇幼保健院 妇科，山东 淄博 255000）

宫颈癌是全球范围内高发妇科恶性肿瘤，全球每年约有10%的癌症患者死于该病[1-2]。高危型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus,HPV）长期持续感染可导致癌变，其早期由于无明显临床症状，多数患者确诊时已处于中晚期[3]。宫颈癌根治术是临床治疗宫颈癌的主要治疗手段之一，可有效延长患者的生存时间，但仍有部分患者在术后出现复发[4]。复发的宫颈癌患者病死率较高，因此对宫颈癌根治术术后复发进行预测，对改善患者预后具有重要意义，目前临床中亟须寻找对宫颈癌根治术术后复发进行预测的理想标志物。

长链非编码核糖核酸（long non-coding ribonucleic acid,LncRNA）在调节细胞增殖、分化等过程中具有重要作用，其中LncRNA 前列腺癌基因表达标记1（prostate cancer gene expression signature 1,PCGEM1）最早在人前列腺癌LNCaP 细胞中被发现过表达，并参与前列腺癌、胃癌等恶性肿瘤的发生发展[5]，然而有关LncRNA PCGEM1 在宫颈癌患者中的表达目前尚罕见报道。MicroRNA-642a-5p（miR-642a-5p）是口腔鳞癌等多种恶性肿瘤的抑制因子，高表达的miR-642a-5p 能够抑制癌细胞的生长、转移，对肿瘤具有一定的抑制功能[6]。LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 两者之间存在一定的联系，相关研究[7]表明，LncRNA PCGEM1 表达降低时可通过调节miR-642a-5p/LGMN 轴抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭。目前宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 的表达与HPV 阳性宫颈癌根治术术后复发的关系尚不清楚，有待进一步探讨。本研究通过回顾性分析行根治术的HPV 阳性宫颈癌患者的临床资料，对上述问题进行研究探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 临床资料选取2018年2月—2020年4月淄博市妇幼保健院184 例HPV 阳性宫颈癌患者为研究对象。患者年龄22～77 岁，平均（46.98±9.31）岁；体质量指数（BMI）18.27~27.89 kg/m2，平均（22.81±2.61）kg/m2。

1.1.2 纳入标准①经临床病理确诊为宫颈癌[8]；②反点杂交技术检测结果为HPV 阳性[9]；③年龄>25 岁；④美国麻醉医师协会分级Ⅰ、Ⅱ级；⑤临床分期Ⅰ~Ⅲ期；⑥均行宫颈癌根治术治疗。

1.1.3 排除标准①凝血功能障碍者；②合并其他恶性肿瘤者；③肝肾等重要脏器严重损伤者；④先天性心脏病者；⑤精神疾病或认知障碍者；⑥术前接受放、化疗或生物免疫治疗者；⑦手术切缘阳性者。本研究经医院医学伦理委员会批准同意，患者签署知情同意书。

1.2 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表达

术中收集宫颈癌组织标本，立即放入液氮中冷冻保存，后转入-80℃超低温冰箱中保存。qRTPCR 检测宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相对表达量。取宫颈癌组织，用TRIzol 法提取组织总RNA，检测RNA 的质量和浓度，并逆转录成cDNA。总反应体系20 μL：10 μL 2×SYBR Mix，10×cDNA 模板1 μL，正反向引物各1.0 μL，H2O 8 μL，每样品3 个重复。反应条件：95℃预变性2 min，95℃变性12s、60℃退火32 s，72℃延伸3 min，共38 个循环。在PCR 仪（型号：RTQ-960，杭州艾康生物技术有限公司）上进行反应，qRT-PCR 引物序列见表1。LncRNA PCGEM1以β-actin为内参，miR-642a-5p以U6为内参，采用2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 治疗方法

所有研究对象均接受宫颈癌根治术（包含广泛子宫切除术和盆腔淋巴结清扫术）治疗，并依据患者情况在术后给予辅助治疗，治疗方式主要包括放疗（常规放疗、调强适形放疗）、化疗（顺铂、长春新碱联合博来霉素；卡铂联合多西他赛；顺铂联合紫杉醇；奈达铂联合紫杉醇；卡铂联合紫杉醇；顺铂联合多西他赛等）及放化疗（给予常规放疗或调强适形放疗的同时接受静脉滴注顺铂或奈达铂化疗）。

1.4 随访及术后复发定义

随访2年，通过门诊、电话等方式进行随访，每2 个月1 次，随访截止时间为2022年4月。以术后出现临床、影像或组织学的疾病证据定义为复发，主要包括局部复发（阴道残端和主动脉分叉以下的盆腔淋巴结区域出现复发肿块）、远处转移（局部复发以外区域的疾病复发），以及局部复发和远处转移同时发生[10]。

1.5 观察指标

主要为可能影响HPV 阳性宫颈癌患者术后复发的临床资料，包括年龄、BMI、病理类型、临床分期、分化程度、宫颈浸润深度、是否存在盆腔淋巴结转移、肿瘤最大直径、术后治疗、总胆红素、血肌酐、宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相对表达量。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验或方差分析，进一步两两比较用LSD-t法；计数资料以构成比或率（%）表示，比较用χ2检验；多因素Logistic逐步回归分析影响HPV 阳性宫颈癌患者术后复发的危险因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同临床分期HPV 阳性宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5pmRNA 相对表达量的比较

临床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA、miR-642a-5p mRNA 相对表达量比较，经方差分析，差异有统计学意义（P<0.05），Ⅲ期和Ⅱ期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA 相对表达量高于Ⅰ期（P<0.05），miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于Ⅰ期（P<0.05），Ⅲ期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA 相对表达量高于Ⅱ期（P<0.05），miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于Ⅱ期（P<0.05）。见表2。

表2 不同临床分期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相对表达量比较 （±s）

表2 不同临床分期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA相对表达量比较 （±s）

注：①与Ⅰ期比较，P <0.05；②与Ⅱ期比较，P <0.05。

临床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F 值P 值n 46 87 51 LncRNA PCGEM1 mRNA 0.59±0.08 0.81±0.07①1.21±0.26①②217.145 0.000 miR-642a-5p mRNA 1.21±0.18 1.07±0.12①0.69±0.14①②181.078 0.000

2.2 HPV阳性宫颈癌患者术后复发情况

本研究中184 例HPV 阳性宫颈癌患者经宫颈癌根治术治疗后共有28 例复发，复发率为15.22%（28/184）。

2.3 复发组和未复发组患者临床资料的比较

复发组与未复发组患者年龄、BMI、病理类型、术后治疗、总胆红素及血肌酐比较，差异无统计学意义（P>0.05）。复发组与未复发组患者临床分期、分化程度、宫颈浸润深度、盆腔淋巴结转移、肿瘤最大直径，以及宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（P<0.05），复发组宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA 相对表达量高于未复发组（P<0.05），复发组miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于未复发组（P<0.05）。见表3。

表3 两组患者临床资料的比较

2.4 影响HPV阳性宫颈癌患者术后复发的多因素Logistic逐步回归分析结果

以HPV 阳性宫颈癌患者术后复发为因变量（未复发 = 0，复发 = 1），以临床分期（Ⅰ、Ⅱ期 = 0，Ⅲ期 =1）、分化程度（中/高分化 = 0，低分化 = 1）、宫颈浸润深度（<1/2 = 0，≥ 1/2= 1）、盆腔淋巴结转移（否 = 0，是 =1）、肿瘤最大直径（< 4 cm= 0，≥ 4 cm= 1）、宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达（均为连续变量）为自变量，进行多因素Logistic 逐步回归分析（α入=0.05，α出=0.10），结果显示：临床分期Ⅲ期[O^R=2.815（95%CI：1.226，6.462）]、盆腔淋巴结转移[O^R=2.892（95% CI：1.202，6.968）]、宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 表达[O^R=3.267（95% CI：1.642，8.754）]、miR-642a-5p 表达[O^R=3.337（95% CI：2.031，9.846）]均为影响HPV 阳性宫颈癌患者术后复发的危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 影响HPV阳性宫颈癌患者术后复发的多因素逐步Logistic回归分析参数

2.5 宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表达对HPV阳性宫颈癌患者术后复发的预测价值

ROC 曲线分析结果显示，宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 及两者联合对HPV 阳性宫颈癌患者术后复发预测的敏感性分别为75.00%（95% CI：0.548，0.886）、78.57%（95% CI：0.586，0.910）和75.00%（95% CI：0.548，0.886），特异性分别为78.21% （95% CI：0.708，0.842）、73.08%（95% CI：0.653，0.797）和96.15%（95% CI：0.914，0.984），AUC分别为0.724（95% CI：0.653，0.787）、0.796（95% CI：0.730，0.851）和0.856（95% CI：0.797，0.904）。见表5和图1。

表5 LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表达及两者联合预测HPV阳性宫颈癌患者术后复发的效能分析

图1 LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p表达及两者联合预测HPV阳性宫颈癌患者术后复发的ROC曲线

3 讨论

宫颈癌为临床常见的生殖道恶性肿瘤，其病因目前尚不明确，可能与分娩次数、病毒感染、不良性行为等因素有关，随着疾病的进展可能导致尿管梗阻、尿毒症等疾病的发生，需及时进行治疗[11-13]。目前临床多采用宫颈癌根治术对宫颈癌患者进行治疗，其治疗效果确切，但术后复发率仍高达20% 左右，严重威胁着患者的生命健康[14-15]。通过对LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达与HPV 阳性宫颈癌根治术术后复发的关系进行探讨，对临床预测该类患者的预后具有重要意义。

本研究结果显示，临床分期Ⅲ期和Ⅱ期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA 相对表达量高于Ⅰ期，miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于Ⅰ期；Ⅲ期宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA 相对表达量高于Ⅱ期，miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于Ⅱ期，提示随着HPV 阳性宫颈癌的进展，宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 表达异常升高，miR-642a-5p 表达异常降低。本研究中，HPV 阳性宫颈癌患者术后复发率为15.22%，提示HPV 阳性宫颈癌患者术后复发率较高，与既往陈烟培等[16]研究结果14.39%相接近。本研究结果表明，复发组与未复发组患者临床分期、分化程度、宫颈浸润深度、盆腔淋巴结转移、肿瘤最大直径，以及宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p mRNA 相对表达量比较有差异，复发组宫颈癌组织LncRNA PCGEM1 mRNA相对表达量高于未复发组，miR-642a-5p mRNA 相对表达量低于未复发组；多因素Logistic 逐步回归分析结果显示，临床分期Ⅲ期、盆腔淋巴结转移、宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达均为影响HPV 阳性宫颈癌患者术后复发的危险因素。分析原因可能为，临床分期与恶性肿瘤的进展密切相关，可直接影响患者的预后，临床分期越晚术后复发的发生风险也就越大；存在盆腔淋巴结转移患者，可在一定程度上增加肿瘤的负荷，故复发的危险相对较高[17]；LncRNA PCGEM1 表达与多种恶性肿瘤的发生有关，其高表达可促进肿瘤发生、发展，有关报道[18-19]指出，LncRNA PCGEM1可通过RhoA 通路诱导卵巢癌肿瘤的发生、发展；LncRNA 和miR-642a-5p 均与恶性肿瘤的发生有关，且两者存在一定的联系，miR-642a-5p 表达降低时，可减少对LncRNA 的抑制作用，可促进肿瘤细胞的增殖、迁移等，进而有可能增加术后复发的发生风险[20]。故在临床中应对以上影响HPV 阳性宫颈癌患者术后复发的危险因素进行调控，以降低该类患者术后的复发率。

ROC 曲线分析结果显示，宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达及两者联合预测HPV阳性宫颈癌患者术后复发的敏感性分别为75.00%、78.57%和75.00%，特异性分别为78.21%、73.08%和96.15%，AUC 分别为0.724、0.796 和0.856，提示宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达与HPV 阳性宫颈癌患者根治术后复发相关，且两者联合对宫颈癌根治术后复发的预测效能较高。分析其可能机制为：LncRNA PCGEM1 可通调控性激素受体表达，进而参与宫颈癌的发生发展，可在一定程度上影响该类患者的预后。王劲等[21]研究报道，LncRNA PCGEM1 在结肠癌细胞中呈高表达，但其具体作用机制目前尚不清楚。miRNA 在恶性肿瘤的发生、发展中具有重要作用，可调节肿瘤发生相关过程（如细胞周期、炎症、分化、凋亡及侵袭等），低表达miR-642a-5p 可通过调控下游细胞蛋白因子的表达，促进癌细胞的增殖、侵袭[22]，进而可影响HPV 阳性宫颈癌患者根治术后复发。

综上所述，宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达与HPV 阳性宫颈癌根治术后复发相关，且两者联合对宫颈癌根治术后复发的预测效能较高。建议在临床中可通过检测宫颈癌组织LncRNA PCGEM1、miR-642a-5p 表达对该类患者的预后进行评估，以更好地指导临床制订周密的治疗防治及预后措施。