2016年-2020年云南省部分猪场猪瘟免疫抗体检测与分析

张振兴，王 斌，朱丽华，宋建领*

(1.云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明 650224;2.威信县动物疫病预防控制中心,云南威信 657900；3.玉龙县龙蟠乡畜牧产业发展服务中心,云南玉龙 674100)

猪瘟(Cassical swine fever,CSF)是世界动物卫生组织(WOAH)规定的必须通报的猪的重要传染疫病之一[1]，也是我国农业农村部发布的《国家动物疫病监测与流行病学调查(2021-2025年)》中要求的重点防治动物疫病之一[2]。CSF是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，是威胁养猪业的主要传染病之一，不同日龄和不同品种的猪均容易被感染，其发病主要特征为体温持续升高、皮肤和黏膜发绀、走路不稳等[3-4]。2007年-2016年国家要求各生猪养殖场对CSF采取强制免疫措施，2017年以后国家免疫计划中不再对猪瘟采取强制免疫，而是通过对符合条件的各生猪养殖场实行“先打后补”的财政策略[5]。为了掌握猪瘟疫苗退出强制免疫之后，云南省生猪猪瘟疫苗免疫情况，通过对2016年-2020年云南省生猪猪瘟疫苗免疫情况进行动态化监测，发现云南省CSF风险防控薄弱环节，以期为云南省CSF防控提供科学依据，从而为云南省生猪养殖业健康可持续发展提供保障。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 2016年1月-2020年12月，以非概率抽样为原则为采集策略，随机采集包括规模场、小型场和散养户的198个健康猪场共计4 622份血清样品进行猪瘟病毒抗体检测。血清样品采集时间为经过疫苗免疫后的14 d～21 d内血清，仔猪一般为15 d～30 d内进行首次免疫，70 d～80 d内进行第二次免疫；母猪、公猪一般为每4个月进行一次疫苗免疫。小型场和散养户的198个猪场共计4 622份血清样品进行CSFV抗体检测。用普通采血管采集血液后在室温下放置4 h～6 h，待血液完全凝固后放置在4 ℃冰箱2 h，2 h后分离血清保存在-20 ℃冰箱待检。

1.1.2 检测试剂盒 猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒(阻断ELISA抗体检测试剂盒)，美国Idexx公司产品。

1.1.3 主要仪器 酶标仪(型号HTX)，美国伯腾仪器有限公司产品；离心机(型号X-15R)，美国贝克曼库尔特有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 按照CSFV抗体检测试剂盒说明书进行操作，操作过程基本如下：加入稀释血清、阴性血清和阳性血清孵育→洗涤→加入酶标抗体孵育→洗涤→加入底物孵育→加入终止液→OD 450 nm值测定与分析。

1.2.2 结果判定 CSFV抗体检测结果判定标准按说明书进行(表1)。阻断率=(阴性对照OD 450 nm值-被检样品OD 450 nm值)×100/阴性对照OD 450 nm值。

表1 CSFV抗体检测结果的判定标准

1.2.3 数据处理 样品检测结果运用Excel 2013进行统计学处理与分析。

2 结果

2.1 2016年-2020年云南省猪瘟病毒抗体检测结果

2016年-2020年，采集的云南省保山、楚雄、大理、德宏、红河、昆明、普洱、曲靖、文山、西双版纳、玉溪等11个地州(市)4 622份血清样品，猪瘟病毒抗体阳性样品4 078份，猪瘟病毒抗体阴性样品544份，云南省2016年-2020年猪场猪瘟病毒抗体阳性率为88.23%。

2.2 不同年份猪场CSFV抗体检测结果

不同年份CSFV抗体检测结果(表2)显示，从整体情况来看， CSFV抗体阳性率在2016年-2020年呈现波浪形变化，其中2017年度猪瘟病毒抗体阳性率最高，全年度共检测血清样品1 156份，阳性样品数量为1 054份，猪瘟病毒抗体阳性率为91.18%；2018年度猪瘟病毒抗体阳性率最低，全年度共检测血清样品数量为845份，阳性样品数量为720份，猪瘟病毒抗体阳性率为85.21%。

2.3 不同地区猪场CSFV抗体检测结果

对11个州(市)猪场进行CSFV抗体检测结果进行统计(表3)，结果显示，11个州(市)CSFV抗体阳性率存在差异，其中保山市猪瘟病毒抗体阳性率最高，351份血清样品中阳性样品344份，阳性率为98%；其次为大理州和西双版纳州，分别检测203份和380份，阳性样品数量为194份和362份，阳性率分别为95.57%和95.26%；猪瘟病毒抗体阳性率最低的为德宏州，296份血清样品中阳性样品数量为180份，阳性率为60.81%。

3 讨论

猪瘟疫苗免疫是生猪养殖环节最重要的疫苗免疫之一，CSF预防控制的好坏直接影响整个养殖场的生猪健康。本文对2016年-2020年云南省猪场CSFV抗体阳性情况进行大范围检测并进行统计分析，以期为云南省全省CSF防控措施提供参考，保障云南省生猪养殖业健康可持续发展。Idexx公司的猪瘟病毒抗体检测试剂盒暂无法区分猪瘟病毒野毒感染抗体和疫苗免疫抗体，但本次调查所有猪场全部为健康猪场，均按照猪瘟疫苗免疫程序进行了免疫且猪瘟防控能力较好，近几年也未出现过猪瘟疫情暴发，因此可将所有抽检猪场检测抗体视为免疫抗体[6]。

2016年-2020年连续5年猪瘟病毒抗体检测中，发现猪瘟免疫抗体阳性率呈现波浪形变化。CSF疫情比较平稳的时候，猪场降低了对CSF防控的警惕性，在省内疫情又开始出现时猪场又开始重视CSF的防控，可能是导致猪瘟免疫抗体阳性率呈现波浪形变化的主要原因。2016年-2017年CSFV抗体免疫水平较高，说明在猪瘟疫苗强制免疫的背景下，中小猪场和散养户能够配合政府进行猪瘟疫苗免疫，有效地保障了猪瘟疫苗免疫密度。2018年CSFV抗体阳性率降低，可能是由于2017年我国CSF退出了强制免疫计划，中小场和散养户弱化了猪瘟疫苗免疫，减少或未免疫接种猪瘟疫苗，使云南猪瘟疫苗免疫密度降低而致。2019年猪瘟病毒抗体阳性率升高可能是非洲猪瘟疫情暴发后[7-8]，各个猪场加大了常规疫苗的免疫预防力度和综合防控措施[9]，进而抗体阳性率有所提升。2020年CSFV抗体阳性率下降，可能是由于非洲猪瘟疫情平缓，加上猪肉价格又持续下降，大批中小规模猪场和散养户急于收回成本减少损失开始卖猪，减少或者取消了猪瘟疫苗免疫。

通过对比近几年的相关文献，发现王世玉等[10]报道红河州CSFV总体阳性率95.25%与此次调查中红河州CSFV总体阳性率95.18%相近，楚雄州CSFV总体阳性率99.63%与此次调查中楚雄州CSFV抗体总体阳性率77.40%相差颇大，但是与王艳芬等[11]报道2015年-2019年楚雄州CSFV抗体阳性率80.86%相近；吴孟洁等[12]报道的2016年-2020年文山州CSFV抗体总阳性率80.91%，与此次调查中，文山州CSFV总体阳性率77.78%相近。不同时间不同州(市)猪瘟病毒抗体阳性率存在差异，可能与以下几方面原因相关：一是调查对象不一样，云南省不同州(市)或者同一州(市)不同规模猪场对CSFV防控理念有所差异；二是各州(市)对CSF的相关政策了解有所差异，对猪瘟疫苗免疫重视程度存在偏差；三是目前市场上CSFV疫苗品牌、种类繁多，各自选择有所差异；四是可能由于对各州(市)采集血清样品代表性存在差异。

综上所述，云南省2016年-2020年每年的整体猪瘟疫苗免疫效果较好[6]，但是不同州(市)仍然存在一定的差异性，部分州(市)的部分猪场存在猪瘟病毒抗体阳性率较低的现象，应加强猪瘟疫苗免疫效果监测，对猪瘟病毒抗体阳性率较低猪场进行猪瘟疫苗加强免疫和优化疫苗免疫程序。