SD大鼠灌胃妙茯止痛颗粒单次给药毒性试验

薛 蕊 杨国卉 李万芳 杨春燕 鲁碧楠 周文斌 许嘉鹏*

1.云南中医药大学，云南 昆明 650500； 2.云南省彝医医院/云南省彝族医药研究所，云南 楚雄 675000； 3.中国医学科学院/北京协和医学院新药安全评价研究中心，北京 100050； 4.民族医药教育部重点实验室(中央民族大学)/中央民族大学药学院，北京 100081

随着人们生活水平的进步，饮食结构的改变，痛风性关节炎的患病率也在不断增长，并呈年轻化趋势发展。西医治疗此病的主要方法为急性期消炎镇痛，间歇期降尿酸，但常伴随消化道、肝肾损伤等不良反应，严重影响患者的治疗信心。与之相比，传统医药不仅能明显改善痛风性关节炎患者的症状，又具有毒副作用低、可减少复发、价格实惠等优点。中药的毒性有广义与狭义的区分。广义的“毒”为药物的偏性和治疗作用，狭义的“毒”为与治疗无关的作用[1]。《素问》有言：“毒药治其内，针石治其外。”《诸病源候论》记载：“凡药云有毒及大毒者，皆能变乱，于人为害，亦能杀人。”因此对中药的毒性进行深入探究，也是为临床安全用药提供有力保障。在临床应用中，通过中药的配伍和(或)炮制的方法，来降低(消除)药物的毒性作用，增强药效，提升治疗作用，从而保证患者的安全。

妙茯止痛颗粒是云南省楚雄州中医医院名老彝医张之道和余惠祥专家的临床经验方，并以协定处方的形式在院内使用，疗效肯定。该方由土茯苓(洪赊牛)、红萆薢(土涩)各30 g，醋莪术、炒苍术、百合、车前子(自然熬)、大追风(乃替力)各20 g，叶下花(帕陶唯)、威灵仙、黄柏各15 g组成，具有清热除湿，化瘀散结等功效，对于痛风性关节炎急性发作期湿热闭阻证有良好的治疗效果[2]。制成颗粒剂也更方便患者直接冲服，具有易于储存、方便携带、干净卫生等优点[3]。为进一步探究该组方的安全性，以《中药、天然药物急性毒性研究指导原则》[4]《药理实验方法学》[5]等为根据，本试验对大鼠采取单次最大给药量，观察用药后大鼠的毒性反应，为临床安全用药提供依据。

1 材料

1.1 实验动物及环境 SD大鼠40只，SPF级，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)201-0006，动物质量合格证号：110011201100703。实验动物设施持续保持屏障环境标准，主要环境指标的控制范围：室温20～26 ℃，相对湿度40%～70%。最小换气次数15次/h，光照明∶暗=12 h∶12 h。

动物饲养于聚丙烯大鼠群养盒中：笼具视格为:545 mm×395 mm×200 mm，每盒5只，其饲养空间符合中华人民共和国国家标准GB14925-2010中关于实验动物所需最小空间的规定，自由饮食和进水。新领到的动物检疫期6 d，动物反应灵敏、摄食和健康状况良好且无异常分泌物，大鼠皮毛光滑、确认健康无病，可以用于试验。

1.2 药品 妙茯止痛颗粒(批号：19110561，云南省彝医医院)，性状:棕色颗粒。15～25 ℃遮光干燥保存。

1.3 仪器 赛多利斯电子天平。

2 方法

2.1 剂量设计及动物分组大鼠单次给药 临床拟用剂量：642.86 mg/kg；给药途径：口服；临床拟用疗程：5 d；临床主要适应症：痛风性关节急性期湿热痹阻证。剂量与分组：本试验采用最大给药量法，每天给药2次，1次给药剂量20 g/kg。给药浓度40 g/kg，给药体积为10 mL/kg，给药剂量相当于临床剂量的62倍。试验共设2组，每组20只大鼠，雌雄各半。具体见表1。

表1 SD大鼠灌胃妙茯止痛颗粒单次给药毒性试验剂量设计

2.2 供试品制剂配制 称取一定量的供试品于研钵中，加入适量蒸馏水研磨，转入量筒，再加蒸馏水冲洗研钵后转入量筒，再加蒸馏水至所需体积；转至棕色试剂瓶中，再用搅拌器混匀后使用，共配制2次(上下午各一次)并保证现用现配。取用供试品的数量、日期、使用人员、使用目的等均登记记录，每次给药后剩余的供试品制剂直接进行废弃处理并记录。

2.3 动物给药及药后观察 采用灌胃给药，给药前禁食12～16 h，给药2次(间隔4 h)，每次给药体积为10 mL/kg；第二次给药后3～4 h给予饲料。每次给药后4 h内笼旁观察，严密观察动物对供试品的反应，连续观察14 d。主要观察动物外观、行为活动情况、呼吸状态、分泌物、排泄物等。分别于接收时、分组时、给药当天、给药后第1天、第4天、第7天、第11天、第14天动物称重，且保持相同时间。观察期结束时，将存活动物安乐死，并进行解剖检查，观察心、肝、肾、脾、肺、胃肠等脏器的变化。

3 统计与分析

4 结果

4.1 动物以一般状况观察 第一次给药后给药组所有动物均未见明显异常；第二次给药后给药组部分动物在药后可见活动减少、竖毛，且4 h内未恢复。给药后第1天雌鼠No.23出现肛周污秽，雄鼠No.31～35出现肛周污秽；给药后第2天雌鼠No.23出现肛周污秽，雄鼠No.34出现肛周污秽；给药后第3～14天，所有动物外观、行为活动情况、呼吸状态、分泌物、排泄物等均未见异常。给药途中未出现动物死亡。

4.2 剖检结果 14 d观察期结束后对全部动物实施安乐死，对各组动物进行尸解及大体观察，所有动物心、肝、肾、脾、肺、胃肠等脏器均未见明显异常。

4.3 动物体重 试验期间，给药组雌雄鼠各阶段体重与溶媒对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。具体结果见表2、表3。

表2 SD大鼠灌胃妙茯止痛颗粒单次给药毒性试验雌鼠体重表

表3 SD大鼠灌胃妙茯止痛颗粒单次给药毒性试验雄鼠体重

5 讨论

急性毒性试验是指单次或多次给予实验动物某种受试药物后，观察受试药物在短时间内对动物所产生毒性反应的一种试验方法[6]。用蒸馏水溶解并确定妙茯止痛颗粒单次最大给药量实验浓度为2 g/mL，24 h内灌胃两次。此浓度为妙茯止痛颗粒能溶且可顺利通过灌胃针头的最大浓度；灌胃的最大给药体积是10 mL/kg，故SD大鼠一天内最大给药量为40 g/kg，妙茯止痛颗粒临床拟用剂量为642.86 mg/kg(成人)，使用下述计算公式：40(g/kg)÷642.86(mg/kg)≈62。SD大鼠24 h内2次灌胃妙茯止痛颗粒的给药剂量相当于临床剂量的62倍，在试验过程中第二次给药时个别实验动物出现肛周污秽，活动减少的情况，但停药后未出现脏器的异常变化及死亡。故妙茯止痛颗粒临床拟用剂量较为安全。

土茯苓(洪赊牛)是临床上治疗痛风的常用药。研究[7-8]表明，单味土茯苓、萆薢土茯苓合二妙散加减、土茯苓饮等诸多方剂均对治疗痛风的疗效明显，且毒副作用小。其中红萆薢(土涩)的萆薢总皂苷[9]对急性痛风性关节炎具有防治作用，可影响NALP3炎性体信号通路。刘敏等[10]研究发现由黄柏和苍术组成的二妙散是清热燥湿药的基础名方，其水提液的最大耐受量为130.65 g/kg，在临床上对于关节炎、痛风等具有良好的治疗作用，可通过抑制 IL-1β、TNF-α等炎症因子的产生从而减轻炎症的发生与发展。通过查阅文献，威灵仙中毒的报道也有一定的记载，威灵仙中所含的白头翁素和原白头翁素的主要功效是祛风湿、止痹痛，也是产生毒副作用的主要来源，当大量或过量的外敷内服时，易产生过敏性皮炎、恶心呕吐、心律失常等不良反应[11-12]。但是原白头翁素、白头翁素具有一定的挥发性，增加煎煮时间，则可以降低其毒性[11-12]。于舒雁等[13]实验证明威灵仙提取液可通过降低血清炎症因子的水平来缓解大鼠足趾的肿胀和屈伸不利的症状，降低痛阈，有良好的消肿止痛的作用。另外仝小林院士[14]以三味小方治疗高尿酸血症，方中土茯苓为15～60 g,威灵仙为9～30 g,萆薢为15～30 g。另外，一般威灵仙单次水煎剂量以15～30 g为宜[15]。李君玲等[16]通过对门诊140例患者的回顾性分析，证实了该方能显著降低尿酸水平，比西药治疗更加安全，可整体调节患者的症状。

大追风(乃替力)是彝医治疗急性痛风性关节炎的常用药物[17]，具有通利关节的作用。杨本燕等[18]研究表明将透骨草、大追风、飞龙斩血等药用制成酊剂，对关节炎患处湿敷，并配合TDP治疗，总有效率为 93.33%。李红锐等[19]统计研究表明，叶下花对风湿痛、风湿关节痛和风湿骨痛有一定的治疗效果，是彝族特色药物之一。莪术的行气破血和消积止痛的功效显著。冯洪山等[20]运用苓皮除湿宣痹方加减治疗关节炎症，有良好的治疗效果。乔文豪等[21]研究发现莪术具有抗血小板聚集的作用，所含有的莪术二酮影响凝血酶诱导的血小板活化和聚集的标志物、信号通路。百合是药食同源的植物，药膳百合赤豆汤，百合粥等均有缓解痛风的效果[22-23]，另外百合车前草汤[24]临床实践证明能很好地改善患者因痛风导致的关节红肿热痛。陈红梅等[25]研究发现葎草百合汤治疗痛风性关节炎联合秋水仙碱比单用西药秋水仙碱临床治疗效果更佳，有效率为86.6%。费洪新等[26]研究表明车前子对尿酸钠诱导的小鼠急性痛风性关节肿胀作用效果明显。车前子配方颗粒[27]通过抑制IL-12水平来改善小鼠急性痛风性关节炎的症状，并且对机体的副作用较小。

经查阅文献发现，目前对中药成方的临床疗效方面研究较多，中药颗粒剂的毒性研究、汤剂与颗粒剂的效果对比研究也较少，部分药物的毒性剂量研究尚不精确，有待日后进一步探究。