黎药牛耳枫研究进展

彭政忠 张丽艳 唐靖雯 潘 梅 卢礼平 杨 桃

1.贵州威门药业股份有限公司，贵州 贵阳 550018；2.贵州中医药大学药学院，贵州 贵阳 550025

牛耳枫为虎皮楠科植物牛耳枫DaphniphyllumcalycinumBenth.的干燥地上部分，收载于《贵州省中药材民族药材质量标准(2019年版 第一册)》，具有清热解毒、活血散瘀、祛风止痛的功效[1]。牛耳枫是黎族民间常用药，在黎族地区用其治疗外伤和炎症[2]。在《中华本草》[3]《全国中草药汇编》[4]及《福建药物志》[5]《广西民族药简编》[6]、《海南植物志》[7]等均有记载，具有很高的药用价值和开发前景。由牛耳枫和辣蓼组成的复方牛耳枫片，具有理气健胃、除湿化滞等功效，治疗急慢性肠胃炎，临床疗效佳[3]。笔者综述了牛耳枫化学成分、药理活性、质量评价、制剂产品开发等方面，为黎药牛耳枫进一步研究及综合利用提供参考。黎药牛耳枫研究进展思维导图如图1所示。

1 化学成分

牛耳枫化学成分主要包括生物碱类化合物和黄酮类化合物，还含有少量的三萜类、甾醇类、胡萝卜苷类和酚酸类等其它化合物，其中槲皮素、芦丁、山奈酚、木犀草素、5,7-二羟基色原酮等均为常见的黄酮类化合物[8]。目前，在对牛耳枫化合物及其成分含量方面研究相对较多。

王永丽等[9]从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离、鉴定出7 个化合物，其中5-oxymaltol、2,6-dimethyl-3-hydroxychromone为首次从该植物中分离获得。李晶晶等[10]采用柱层析和重结晶等分离技术，从牛耳枫果实甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离、鉴定出10个化合物，其中5,7-二羟基色原酮、对羟基苯甲酸、5,7,4’-三羟基-3’-甲基黄酮等9个化合物首次从该植物的果实中分离得到。张小坡等[11]采用多种柱色谱方法从牛耳枫枝叶乙醇提取物中分离、鉴定出8个化合物，其中羽扇豆酮首次从交让木属植物中分离得到，以及胡萝卜苷、槲皮素、芦丁为首次从该植物中分离得到。朱文粮等[12]采用各种色谱方法从牛耳枫的茎叶乙醇浸提物中分离、鉴定出8个生物碱。李晶晶等[13]采用柱层析分离技术和重结晶等方法从牛耳枫叶的乙酸乙酯层分离、鉴定出3个化合物，其中反式对甲氧基肉桂酸、木樨草素为首次从该属植物中分离得到。沈寿茂等[14]从牛耳枫的茎和叶中分离得到4个新的水飞蓟生物碱，即水飞蓟素A - D。近年来从牛耳枫中分离、鉴定的化合物见表1。

表1 牛耳枫中分离、鉴定的化合物

2 药理活性

2.1 抗炎作用 宋青等[15]进行了牛耳枫80%乙醇提取物的体内外抗炎作用及其机制研究，通过建立 LPS 诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7 体外炎症模型，结果显示，牛耳枫提取物抑制了TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌，并呈现剂量依赖性。通过 LPS 诱导建立了小鼠内毒素血症模型，结果显示，牛耳枫提取物对小鼠血清细胞因子和炎性细胞因子有抑制作用；牛耳枫提取物呈剂量依赖性抑制了肝脏中iNOS 和 TNF-α蛋白的表达，对小鼠内毒素血症产生较好的预防和治疗作用。任守忠等[16]以牛耳枫和辣蓼为原料制备枫蓼提取物，分析其抗炎机制，研究表明枫蓼提取物23.4、46.8g/kg均能明显抑制小鼠耳肿胀，枫蓼提取物16.2 g/kg、32.4 g/kg均能显著抑制角叉菜胶致大鼠足跖肿胀，且均能不同程度地降低炎足组织中TNF-α、IL-1β、PGE2和MDA的含量，但对NO无明显影响。结果表明，枫蓼提取物可降低小鼠腹腔毛细血管通透性、减少渗出，减轻小鼠耳肿胀和大鼠足肿胀，具有良好的抗炎作用。刘洪梅等[17]以牛耳枫和辣蓼为原料制备枫蓼发酵提取液，探究其镇痛、抗炎、抗胃溃疡作用，研究表明，枫蓼发酵提取液显著抑制乙酸致小鼠扭体反应，在一定程度上能抑制乙酸致小鼠毛细血管通透性的升高，还能显著抑制二甲苯致耳肿胀和蛋清致足肿胀，减弱乙醇对胃黏膜的损伤以及减少血清中IL-1α、IL-1β的水平，同时抑制组织中HIS渗出，对 PED2渗出也有一定抑制作用。结果表明，枫蓼发酵提取液质量稳定可控，具有良好的抗炎、镇痛、抗胃溃疡作用。

2.2 抗胆碱酯酶活性 王永丽等[9]从牛耳枫中得到的deoxycalyciphylline B、deoxyisocalyciphylline B具有抗乙酰胆碱酯酶(AChE)活性，secodaphniphylline、deoxyisocalyciphylline B 具有较强的抗丁酰胆碱酯酶(BChE)活性。见表2。

表2 牛耳枫抗胆碱酶活性

吴裕红等[18]以牛耳枫和辣蓼为原料分别制备枫蓼提取物，在乙酰胆碱引起的家兔小肠平滑肌痉挛模型中，对空肠而言，乙酰胆碱使小肠平滑肌收缩活动加强，给予枫蓼水提物、醇提物各剂量(0.125 g/mL、 0.25g/mL、0.5 g/mL)均可使平滑肌收缩张力下降，进而抑制乙酰胆碱引起的小肠平滑肌痉挛；对于回肠平滑肌，枫蓼醇提物各剂量对乙酰胆碱引起的痉挛均有明显的颉颃作用，最低有效浓度为 0. 125 g /mL，而水提物的最低有效浓度为 0. 5 g /mL。见表3。该抑制作用可能是通过阻断乙酰胆碱与 M 受体的结合，降低细胞中钙离子浓度，从而降低小肠平滑肌的兴奋度。

表3 枫蓼提取物抗乙酰胆碱作用

2.3 抗肿瘤活性 王永丽[19]从牛耳枫中提取16种生物碱进行体外抗肿瘤活性筛选，结果显示，2-hydroxyyunnandaphnine D在体外具有较强的抗肿瘤活性，其对人宫颈癌细胞(HeLa)、人肺腺癌细胞(A-549)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人肝癌细胞(HePG-2)和人神经胶质瘤(U-251)等5种肿瘤细胞株均有一定的抑制作用，其中对HePG-2细胞的抑制增殖作用最强，且具有量效和时效关系。曹志然等[20]从牛耳枫的茎叶乙醇浸提物中采用正相硅胶，反相材料(C18，MCI)以及凝胶(Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40C)分离得到牛耳枫生物碱F21，并进行了该成分对HePG-2细胞的抑制作用及机制研究，结果表明，牛耳枫生物碱F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用，其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。王蓓等[21]进行了牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制研究，结果显示，该生物碱在体外对HepG-2细胞、MCFh7细胞及HeLa细胞3种肿瘤细胞株均有明显的抑制作用，且具有明显的时-效和量-效关系依赖性；FDA/PI双染色荧光显微镜观察显示，该生物碱组中死亡细胞数较正常对照组细胞死亡数量增加，且随着剂量的加大细胞死亡数量增加，表明该生物碱在体外具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用。刘帅等[22]从牛耳枫的茎中分离出一种新的牛耳枫Daphnezomine L型生物碱，对HeLa细胞具有中等的细胞毒活性，IC50为16.0μg / mL。

3 质量评价

唐靖雯等[23]对牛耳枫进行了质量标准研究，建立了以指标成分芦丁、牛耳枫对照药材为对照的薄层鉴别(TLC)方法，以及以指标成分芦丁为含量的高效液相色谱(HPLC)法，结果显示，TLC斑点清晰，重复性好；芦丁在0.200～1.403μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为101.65%，RSD为 2.42%。何远景[24]建立了牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的HPLC法，结果显示，山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度在6.92～69.2 μg/mL之间，且其峰面积呈良好的线性关系。梁颖等[25]建立了同时测定牛耳枫中没食子酸、原儿茶酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等8种成分含量的高效液相色谱串联三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)法，并结合 TOPSIS 分析法，对不同产地(广西桂林、海南琼中、海南海口)牛耳枫样品的8种成分含量进行对比分析及综合评价，结果显示，8种成分在相应的浓度范围内线性关系良好，且海南海口的药材综合质量较好。杜迎翔等[26]建立了牛耳枫的HPLC指纹图谱方法，标定了11个共有峰，指认了2个峰(芦丁、槲皮素)，各指纹图谱的相似度均达到 0.85以上；利用系统聚类分析，确定同一地区牛耳枫药材化学成分的稳定性，说明药材质量与采集、干燥、运输及贮存过程有关；利用主成分分析提取了3个主要成分，确定牛耳枫中对第一主成分的影响较大的是芦丁、槲皮素以及其他 3个未知成分。李海龙等[27]建立了测定牛耳枫药材中总黄酮的含量方法，总黄酮在7.84～47.04 μg/mL范围内线性关系良好。

4 制剂产品开发

近年来，各制药企业利用牛耳枫药用资源，开发的中药复方制剂产品枫蓼肠胃康分散片，是以牛耳枫、辣蓼两味药材经加工制成的分散片，具有理气健胃、除湿化滞功能，用于中运不健、气滞湿困而致的急性胃肠炎及其所引起的腹胀、腹痛和腹泻等消化不良症[28]；在急性胃肠炎治疗中，有效改善临床症状[29]。此外，以牛耳枫、辣蓼两味药材组合开发的中药复方制剂产品有枫蓼肠胃康颗粒、枫蓼肠胃康口服液、枫蓼肠胃康胶囊、枫蓼肠胃康软胶囊、枫蓼肠胃康滴丸等，在临床上有一定的应用。黄腾等[30]采用随机、双盲、阳性药平行对照,多中心、非劣效试验设计，收集6个月至5岁患儿240例评价枫蓼肠胃康颗粒治疗小儿急性腹泻(湿热泻)的临床有效性和安全性，结果表明，枫蓼肠胃康颗粒对6个月至5岁小儿急性腹泻(湿热泻)止泻率与儿泻停颗粒疗效相当且起效较快，临床应用安全。吴珮毓等[31]观察枫蓼肠胃康口服液联合思密达治疗老年慢性腹泻的临床疗效，结果表明，观察组总有效率为94.29%,高于对照组的74.29%，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组治疗有效时间为(5.27±2.25)d，短于对照组的(8.58±2.80)d，差异有统计学意义(P<0.05)；两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。李燕君[32]研究枫蓼肠胃康胶囊联合常规三联(克拉霉素片、奥美拉唑肠溶胶囊和阿莫西林胶囊)治疗慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生的效果，结果表明，试验组幽门螺杆菌(Hp)根除率为82.00%，高于对照组的60.00%，差异有统计学意义(P<0.05)；试验组不良反应发生率为6.00%，低于对照组的20.00%，差异有统计学意义(P<0.05)。

5 展望

目前，对牛耳枫在化学成分和生物活性方面研究较多，但其药用成分和药用机理研究相对较少，严重制约着相关产品的开发[8]。采用现代的分离鉴定技术从牛耳枫中获得的新生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D在体外对HepG-2细胞具有较强的抑制作用，且抑制作用具有较好的时效和量效关系[21]，但其作用机制研究较少且尚不清楚。牛耳枫提物研究发现具有抗炎作用[15]，以及在体外具有显著的抗AChE 及抗BChE活性[9]，但对于药理药效等方面的关注较少。牛耳枫的复方制剂产品枫蓼肠胃康颗粒可调节幼龄大鼠的胃液分泌，对幼龄大/小鼠具有一定的抗炎、镇痛、保护胃黏膜及解痉作用，表明其对幼龄动物的急性胃炎具有一定疗效[33]，但对治疗儿科急性胃炎的临床应用还需进一步研究。牛耳枫的中药复方制剂产品开发方面主要与辣蓼组合，与其他中药组合开发的制剂产品较少。因此，下一步对牛耳枫的研究可将化学成分、药理作用机制、临床应用三者紧密结合，开发更多以牛耳枫为原料的复方制剂产品。