驴早期妊娠诊断中奶牛早孕试纸应用研究

王世泰，李吉鹏，韩芙蓉，李爱文，赵艳红，高凤琴

(1. 甘肃省畜牧技术推广总站，甘肃 兰州730030；2. 金川区畜牧兽医服务中心)

驴作为传统家养大型家畜，因其吃苦耐劳，适应性强，对饲养条件要求不高而受到我国北方农牧民的普遍欢迎，养殖量一度居全国各类大家畜饲养量之首。与牛、马等其他大家畜相比，驴的养殖量虽然占有绝对优势，但受其自然属性限制，所有驴种的世代间隔都较长，从出生到成熟直至下一代的出生，一般都需要3.5年或更长的时间。同时，驴的繁殖效率低下，在没有人工干预的情况下自然繁殖率不足50%，严重制约着驴群快速扩繁和种群血液更新速度。进入新发展阶段，驴产业作为特色养殖业完全摆脱了役用和肉用等传统领域，继而成为以药、食、游及生物活性原料提供为主要盈利点的新型产业。驴作为长日照繁殖动物，繁殖具有明显季节性，因此如何高效利用有限繁殖季节，提高母驴群的繁殖效率始终是困扰畜牧工作者的难题之一。随着科技进步和现代繁育技术研究不断深入，各类新技术、新材料普遍应用于驴的繁殖各环节，对提升繁殖效率发挥了积极作用。B超作为一种驴早期妊娠诊断方法已在国内大型养殖场普遍应用，可以在最短时间内确定配种母驴是否受孕，有效缩减母驴空怀期，对提升驴群繁殖效率，减少资源浪费意义重大。由于驴产业起步较晚，驴早孕诊断试纸开发和检测技术研究严重滞后，不能为新形势下的驴产业高质量发展提供助力，可否利用奶牛早孕诊断试纸来诊断母驴是否受孕的研究也未见报道。为此笔者对两个不同品种的繁殖母驴群进行了为期2年的B超和早孕试纸(板型)跟踪测定研究，旨在探讨奶牛早孕诊断试纸(板型)应用于母驴早孕测定的可行性以及两种不同测定方法间的可替代性。

1 材料与方法

1.1 试验驴群

分别选定金昌市金川区某养殖有限公司的凉州驴繁殖群(下文简称A组)和兰州市永登县某养殖专业合作社德州驴繁殖群(下文简称B组)作为试验样本。凉州驴属甘肃当地小型地方良种，耐粗饲，适应性好。本场存栏基础母驴128头，本交自然繁殖率达54%左右。德州驴属国内优秀大型驴种，生长发育快，成体出肉率高，皮张质量好，但对饲养条件要求较好，尤其对日粮中精饲料质量及比例要求高于本地品种。本场存栏基础母驴512头，本交自然繁殖率为45%左右。

1.2 试验时间

试验期2年，分别为2020年3月至2020年11月，2021年3月至2021年11月。

1.3 试验分组

A组和B组分属不同地区、 不同品种，分别单独进行B超和奶牛早孕试纸(板型)跟踪测定。

1.4 试验仪器及材料

试验用B超仪为山东尚农电子科技有限公司生产的尚农全数字兽用B超测孕仪，型号为SN-N30。血清分离机为江苏省常州金坛区西城新瑞仪器厂生产的80-1型。试纸为北京万华生物工程有限公司生产的奶牛孕酮胶体金检测试纸(双抗夹心法)，商品名为奶牛早孕诊断试纸(板型)，生产批号分别为20191012和20200906。

1.5 饲养管理

A、B两组母驴均采用全舍饲养殖。圈舍为标准化保温建筑，通风良好，光线充足，地面防滑平整，食槽高度适中，自动饮水。待配母驴平均槽位100 cm, 可供舍内所有驴同时采食。运动场面积为舍内面积的四倍以上，其中辅设饮水槽和蹭痒桩，夏天增设遮阴设施。繁殖季圈舍与运动场间隔断门长期开启，以保证驴群自由活动。每日定时定量饲喂，投喂新料前清理上次所投草料中驴不愿采食的部分。头均日粮供给按全群平均体重的3%(干物质)计算，日粮组成为20%精料+80%饲草，平均粗蛋白含量为11.2%左右。饲养员和配种员相对固定，不随易改变。每天定时清理舍内外卫生。

1.6 测定方法

公母驴单独饲养，每天早晨将试情公驴放入母驴群，挑出发情母驴后开始计时，到发情第5 d和第7 d分别由采用本交方式配种1次，共2次。于第二次配种后第15 d用B超仪做直肠妊娠检查，检查时先保定母驴，术者保证手及上臂没有外伤，戴长臂产科手套并充分润滑，先缓慢将手探入母驴直肠，掏出宿便，确定再无宿便后重新润滑手套和探头，将探头用食指、中指和无名指夹紧且探头发射面朝向子宫侧伸入母驴直肠，助手持B超显示屏于术者一侧，便于术者观察。B超检查的同时，于母驴颈静脉处经充分消毒后用负压采血器采取静脉血5 mL用做早孕试纸检测试验。

1.7 结果判定

B超探头前后移动，待显示屏中可清晰观察到宫腔内影像时，随着探头缓慢移动仔细观察宫腔四壁是否有孕囊或孕体， 若能于显示屏中观察到圆形液性暗区(孕囊)或圆形液性暗区内有强回声光团或光斑(孕体)证明已受孕；若没有观察到孕囊或孕体，同时移动探头观察两侧卵巢，若卵巢表面有发育中的卵泡呈现，证明母驴没有受孕；所采血液先呈45～60度角于4℃的冰箱中先静置1 h，然后以3 000转/ min的转速低速离心5 min，再用移液器将析出的血清滴3～4滴于样品孔(S)，静置5 min后观察结果。若在检测区(T)和控制区(C)各出现一条色带判定为阳性，即母驴妊娠；若仅在控制区(C)出现一条色带判定为阴性，即母驴没有妊娠；若在控制区(C)出现色带而在检测区(T)出现阴影判定为可疑；若控制区(C)未出现色带为无效。对于“可疑”和“无效”两种情况用新试纸重新测定一次，观察结果是否与前次测定一致，若一致对于“可疑”情况待5 d后重新采样并重复测定，对于“无效”情况重新取另一批次的试纸进行重新检测。

2 结果

2.1 2020年全年配种及两种早期妊娠检测方法检查情况统计结果

从下表中可以看出，驴作为典型长日照季节性繁殖动物，每年从3月份开始进入繁殖时段，开始陆续发情配种，随着日照时数持续延长至6月份后进入发情盛期，至9月份后随着日照时间逐步缩短而发情驴数量快速减少，11月份基本不再发情。从每个月两组发情母驴二次复配15 d检查结果看，妊娠驴占本期参加配种驴的50%左右。10个月的繁殖季中，A组全期参加配种113驴(次)，应用B超早期妊娠检查，阳性结果73例，占配种次数的64.6%，应用奶牛早孕诊断试纸检查，阳性结果76例，占配种次数的67.3%，两种方法同时检测阳数为62例，占配种次数的54.9%，经过50 d跟踪，确定有55头母驴妊娠。B组全期参加配种573驴(次)，使用B超早期妊娠检查，结果阳性288例，占配种次数的50.3%，应用奶牛早孕诊断试纸检查，结果阳性287例，占配种次数的50.1%，两种方法同时检测阳数为274例，占配种次数的47.8%，经过50 d跟踪，最终确定有229头母驴妊娠。

表1 2020年各月份配种及两种方法检测结果统计表 头

2.2 2021年全年配种及两种早期妊娠检测方法检查情况统计结果

2021年发情配种开始时间、结束时间以及全期发展趋势与2020年基本一致，不再赘述。从表2中可以看出A组全年参加配种142驴(次)，应用B超进行早期妊娠检查，阳性结果86例，占配种总次数的60.6%，使用奶牛早孕诊断试纸检查，阳性结果87例，占配种总次数的61.3%，两种检测方法同时显示阳性75例，占参加配种总次数的52.8%，经过50 d跟踪确定妊娠69例。B组全年参加配种570驴(次)，其中应用B超早期妊娠检查，显示结果阳性270例，占参加配种总次数的47.4%，使用奶牛早孕诊断试纸检测，显示阳性结果271例，占参加配种总次数的47.5%，两种检测方法同时显示阳性250例，占参加配种总次数的43.9%，经过50 d跟踪确定妊娠226例。

表2 2021年各月份配种及两种方法检测结果统计表 头

2.3 2020年两组母驴全期配种结果分析

从表3看出，A组参加配种的母驴为93头，全年总配种次数113次，配种50日后总妊娠数55头。在全程早孕检测中，B超检测阳性结果73例，妊娠数占B超检测阳性数的75.3%，奶牛早孕试纸检测阳性结果76例，妊娠数占奶牛早孕试纸检测阳性数72.4%。经全程跟踪最终妊娠数为51例，受胎率为54.8%。B组对应数据分别为435头、573次、229头、288例、79.5%、287例、79.8%、205例及47.1%。

表3 2020年配种结果表 头，次

2.4 2021年两组母驴全期配种结果分析

2021年A组参加配种母驴112头，全程总配种次数142次，据跟踪监测，自配种至第50天为止，妊娠69头。B超检测阳性驴数86头，妊娠数占阳性数的比例为80.2%，奶牛早孕试纸检测阳性驴87头，妊娠数占阳性数的79.3%。经后期最终确认妊娠62头，受胎率55.4%。A组对应数据为441头、570次、226头、270头、83.7%、271次、83.4%、203头及46.0%。

表4 2021年配种结果表 头，次

3 讨论与小结

3.1 应用奶牛早孕检测试纸进行母驴早孕测定是可行的

奶牛早孕试纸的反应原理是利用胶体金双抗体夹心法检测被检物中孕酮的含量。驴和牛同属高等哺乳动物，繁殖过程中母体受孕后都会由卵巢黄体分泌大量孕酮进入血液，抑制发情，维持妊娠。孕酮是类固醇类生殖激素，动物间没有种属特异性，不同物种动物的孕酮可相互作用。因此，利用奶牛早孕试纸诊断母驴配种后早期是否受孕的方法是可行的。

3.2 利用奶牛早孕试纸诊断母驴早期是否受孕的效果理想

通过两个配种季对两组不同品种母驴的跟踪测定，奶牛早孕试纸检出阳性案例性与B超检测所示阳性案例数很接近。B超作为母驴早孕检测中很成熟的方法，检测准确率很高。试纸检测阳性数量与B超测定阳性数量相近且两种不同方法检测结果绝大部分对应重叠，更能说明将奶牛早孕检测试纸应用于母驴早期妊娠诊断的可行性。从实验结果看，两种检测结果重叠数量与50 d确定妊娠数量有10%左右的差距，这正是导致驴繁殖率低的一大症结，从配种受孕至受精卵稳定着床过程中有10～15%的胚胎会丢失。这一问题到目前为止还没有太好的解决办法。

3.3 B超早孕检测方法和奶牛早孕检测试纸两种方法应用于母驴早期妊娠诊断可以互相替代

B超检查结果直观，繁殖领域应用面更广，但术者要经过前期系统培训和大量实践后观察结论才更可靠。驴与牛、马等家畜相比较，直肠壁特别薄，术者在清理宿便和放置探头过程中一定要慎之又慎，润滑、消毒、手型、力度和人驴配合方面必须到位，否则容易导致母驴受伤甚者直肠断裂而死亡。奶牛早孕诊断试纸使用方便，可以以母驴尿液作为检测对象，也可以以母驴血浆作为检测对象，检测结果直观且快速。缺点是必须有条件较为完备的实验室，配套相应的血清分离和冷藏等设备，检测结果个别时候介于阳性和阴性临界段，一次无法准确断定结果，需进行重复试验才能准确断定。两种检测方式没有明显的优劣之分，不同的场子可根据实际情况或同时采用两种方法做重复试验或采用其中一种方法来做母驴妊娠早期诊断均有良好效果，都可达到早期诊断，强化管理，有效缩短母驴空怀期，降低养殖成本的目的。