外周血PCT、SAA、白细胞计数、CRP、CD64及腹水CD64联合检测对肝硬化并SBP的临床疗效研究①

李 虤，易清平，潘金平，胡小雄，徐华栋，甘 露

(1.宜春市人民医院肝病科二区,江西 宜春 336000;2.宜春市人民医院肝病科一区,江西 宜春 336000)

肝硬化是由不同病因导致的慢性进行性的弥漫性肝病，早期可无明显症状，随着病情进展，出现肝实质的损害，晚期可能出现如腹水、消化道出血等多种并发症[1]。自发性细菌性腹膜炎是肝硬化失代偿期患者由于腹腔内脏穿孔或损伤引起的最为常见的并发症之一，病情凶险且发病率和病死率均较高，对肝硬化合并SBP进行早期及时诊断和治疗，有助于改善患者预后并延长生存时间[2]。但肝硬化合并SBP者早期可无特征性的临床表现，需要通过腹水培养和体征检查等进行确诊，操作复杂且时间长。血清降钙素原、血清淀粉样酶A、白细胞计数和C反应蛋白是急性细菌性感染的相关指标，对于感染性疾病的诊断具有较好的价值[3～4]。中性粒细胞白细胞分化抗原64(是免疫球蛋白超家族成员之一，是免疫球蛋白G的Fc受体[5]。为明确肝硬化合并SBP早期诊断指标，指导临床治疗效果的评估，本研究将分析上述指标和因子对肝硬化合并SBP的诊断价值进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2020-01～2021-12收治的肝硬化合并SBP的患者25例作为SBP组，按照1:1的比例选择同期收治的肝硬化未合并SBP组25例为非SBP组。SBP组25例，男16例，女9例；年龄49～63岁，平均(56.12±1.87)岁；肝功能Child-Pugh分级：B级7例，C级18例。非SBP组25例，男17例，女8例；年龄48～64岁，平均(56.86±1.92)岁；肝功能Child-Pugh分级：B级11例，C级14例。两组上述一般资料比较无明显差异(P>0.05)。SBP组25例患者依据疗效评价标准[8]分为有效组(n=18例)：局部症状和腹膜炎均缓解，腹水培养检查结果阴性，腹水中性粒细胞复查计数<250×106/L；无效组(n=7例)：炎性症状未缓解，腹水细菌培养结果阳性或中性粒细胞计数≥250×106/L。

1.2 方法

1.2.1 血清指标测定：标本采集：采集所有患者入院24h内的静脉血5mL，以3000r/min离心处理5min后分离血清，采用免疫透射比浊法测定血标本中PCT和SAA水平，试剂盒均购自深圳市锦瑞生物科技有限公司，采用全自动血液分析仪(深圳迈瑞公司生产，BC-5180)测定WBC和CRP水平；使用全自动流式细胞仪(美国BD公司生产，FACS Calibur流式细胞仪)测定CD64水平。

1.2.2 腹水CD64水平的测定：在入院24h内通过腹腔穿刺术抽取腹水10mL进行细菌培养，100mL腹水使用离心机1000r/min离心处理5min弃去上清并添加磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)调节细胞浓度至2×106个/mL，使用50μm尼龙网筛进行过滤后对细胞悬液进行收集，加入5μLCD64-PE抗体，在室温下避光温育30min后加入500μL红细胞裂解液，混匀并遮光保存15min，使用PBS溶液清洗后予以3000r/min离心处理5min，经PBS缓冲液予以重悬后使用流式细胞仪(厂家型号同上)测定，记录CD64的平均荧光强度，统计CD64指数。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 SBP组和非SBP组血液指标和腹水CD64比较

SBP组血PCT、SAA、WBC、CRP和CD64以及腹水CD64水平均高于非SBP组(P<0.05)，见表1。

表1 SBP组和非SBP组血液指标和腹水CD64比较

2.2 SBP治疗有效组和无效组治疗前血清指标和腹水CD64水平的比较

有效组血清PCT 、SAA、WBC、CRP、CD64和腹水CD64水平均低于无效组(P<0.05)，见表2。

表2 SBP治疗有效组和无效组治疗前血清指标和腹水CD64水平的比较

3 讨论

肝硬化合并SBP的主要机制为门脉高压导致肠黏膜充血，黏膜屏障功能减弱，致病菌通过淋巴和血液循环、肠道等造成腹腔内或邻近器官等发生细菌腹膜感染[6]。腹水细菌培养和白细胞计数等是诊断SBP的“金标准”，能够检出一部分阳性患者，但细菌培养时间长且灵敏度低，故在临床的实际应用效果局限[7,8]。

彭官清等[9]的研究结果显示，血清CRP、PCT等在肝硬化并SBP患者中存在的特异性的高表达，分析原因为PCT和WBC在机体被细菌感染尤其是全身性感染中水平可迅速升高，其中PCT的稳定性高，在SBP全身性急性炎性病变中水平升高较为显著；SAA和CRP均是典型的急性时相反应蛋白，SBP的感染常由肠道单一细菌感染引起，SAA在遭受炎症刺激后可迅速达到峰值，能够较好的提示机体细菌感染。而CRP特异性的炎性标志物，在炎症浸润和组织坏死时水平升高，能够用于检测急性感染性的SBP。上述指标在全身多种因素导致的感染中均会有高表达，单独检测并无法区分是局部感染还是全身性的炎性反应，故认为单独诊断肝硬化合并SBP的特异性有一定局限。CD64主要表达于单核细胞及巨噬细胞的表面，正常情况下在中性粒细胞表面的表达较低，当肝硬化患者合并SBP时出现弥漫性腹腔感染，刺激干扰素、细胞集落刺激因子等的分泌增加，可引发CD64在中性粒细胞表面的特异性高表达，对于急性细菌性感染疾病的早期诊断敏感度较高。因此，联合诊断能够弥补单独诊断的局限，提高准确度。

抗感染治疗减少了肠腔内的细菌黏附，提高了肠道对菌群的清除能力，调节肠腔内微生态环境并抑制下游炎症信号通路，避免了细菌通过血液循环和淋巴等进入腹腔内，减少血液和腹水中中性粒细胞的过表达，因此血清炎性指标PCT、SAA、WBC和CRP的水平明显降低。本研究中数据表明有效组外周血CD64以及腹水CD64等明显降低，且CD64对于疗效诊断的AUC均较高，进一步提示CD64具有反映抗感染的效能，当腹水中炎性刺激因子减少时，能够为CD64提供高表达的物质基础也受到明显抑制，导致CD64水平的降低。因此，外周血和腹水中CD64均有较好的判定疗效的价值，但CD64水平的判断主要依赖于中性粒细胞计数的水平，其可能受到腹水红细胞、利尿等因素影响，因此其灵敏度会受到一定影响，但是联合血清炎性指标和腹水CD64水平进行联合预测，能够更好的反应治疗的效果，为进一步治疗提供指导。本研究有效组炎性指标均低于无效组，但距离正常水平仍有差距，这可能与治疗的时间较短有一定关系，后续会深入研究。

综上所述，外周血PCT、SAA、白细胞计数、CRP、CD64及腹水CD64联合检测对肝硬化并SBP的临床诊疗具有较高应用价值，值得推广。