乳腺癌组织中相关蛋白表达情况及其与临床病理特征 和预后的关系

倪 建，张云霄，刘 辉，鲍书友

（徐州市中心医院病理科，江苏 徐州 221009）

乳腺癌是一种危害女性健康的恶性肿瘤，是由于乳腺导管上皮细胞在各种致癌因素的作用下丧失正常特性而异常增生，最终导致超过机体自我修复的限度而产生的癌变[1]。临床上针对乳腺癌的治疗主要采取手术、放射、药物等方法，但肿瘤的转移和复发风险较大，肿瘤新生血管可为肿瘤组织供氧供能，并为癌细胞的转移提供通道，而新生血管的生成与葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）、人类表皮生长因子受体2（HER-2）等的基因转录有关，因此需进一步对相关蛋白的表达进行研究，为乳腺癌的诊断和预后提供参考[2]。GLUT-1是糖类转运蛋白质，主要为乳腺肿瘤细胞提供葡萄糖，其异常高表达与乳腺肿瘤严重程度密切相关[3]；磷酸酶张力蛋白同源物（PTEN）是抑癌基因，PTEN阳性蛋白高表达预示乳腺癌病情较轻、预后良好，其水平高低在乳腺癌治疗与复发过程中有重要参考价值[4]；人类表皮生长因子受体2（HER-2）异常活化后会导致细胞增殖与癌变，可提示乳腺癌的严重程度[5]；增殖细胞核抗原（PCNA）仅在增殖期细胞中合成、表达，是乳腺肿瘤细胞增殖活性的标记物，以上相关指标的检测对乳腺癌的临床诊断、发展及预后均有重要作用[6]。本研究旨在分析乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达与临床病理特征及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析徐州市中心医院2012年1月至2017年1月收治的80例乳腺癌患者的临床资料，患者年龄33～71岁，平均（55.39±2.46）岁；肿瘤直径1～5 cm，平均（1.56±0.34） cm；临床分期[7]：Ⅰ ～ Ⅱ期42例，Ⅲ ～ Ⅳ期38例；淋巴结转移32例，未转移48例。诊断标准：参照《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2011版）》[8]中的相关诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准且经病理组织活检确诊者；未接受放化疗等抗癌治疗者；行乳腺癌根治手术者；临床资料完整者等。排除标准：有严重免疫缺陷者；有其他恶性肿瘤者；重要脏器功能衰竭者等。本研究经院内医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法取所有患者经过手术切除的乳腺癌组织和癌旁正常组织（距离肿瘤＞5 cm），使用10%中性福尔马林固定后，使用石蜡包埋，并制成4 μm厚石蜡组织切片，应用免疫组化法检测标本中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达情况。具体操作如下：切片经烤片、脱蜡、水化后，柠檬酸盐缓冲液抗原修复，按照SP试剂盒进行固定、血清封闭、孵育、洗涤及二氨基联苯胺（DAB）显色等操作，将磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，双盲法观察切片。阳性判定标准：高倍镜下任意观察5个视野，每个视野细胞需不小于200个，对染色强度和阳性细胞率进行评价。染色程度按无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别记为0、1、2、3分；阳性细胞率按无阳性细胞、≤25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分别记为0、1、2、3、4分，两项分值相加4～7分则为阳性，0～3分则为 阴性[9]。

1.3 观察指标①比较乳腺癌组织与癌旁正常组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白阳性表达情况。②分析不同临床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌组织中 GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达情况。具体包括：年龄、肿瘤直径、临床分期、淋巴结是否转移。③分析乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达和预后的关系。随访5年，根据随访结果分为生存组（59例）、死亡组（21例），对比分析生存组与死亡组患者上述蛋白阳性表达情况。

1.4 统计学方法应用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计数资料以[ 例(%)]表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌与癌旁正常组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、 PCNA蛋白阳性表达情况比较与癌旁正常组织相比，乳腺癌组织中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白阳性表达率显著升高，PTEN蛋白阳性表达率显著降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。

表1 乳腺癌与癌旁正常组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白阳性表达情况比较[ 例(%)]

2.2 不同临床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、 PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达情况临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移的乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白表达阳性率显著高于临床分期为Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴结未转移者，PTEN蛋白表达阳性率显著低于临床分期为Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴结未转移者，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；不同年龄、肿瘤直径的乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达阳性率经比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 不同临床病理特征的乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达情况[ 例(%)]

2.3 乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、 PCNA蛋白表达和预后的关系死亡组乳腺癌组织中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白阳性表达率显著高于生存组，PTEN蛋白阳性表达率显著低于生存组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 乳腺癌患者乳腺癌组织中GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达和预后的关系[ 例(%)]

3 讨论

乳腺癌属于高度异质性癌症，受初潮早、绝经晚、精神抑郁等因素的影响，其临床表现为乳房肿块、淋巴结肿大、乳房疼痛等，不同患者的免疫表型、组织形态、治疗效果及预后均存在较大差异，因此对相关基因进行检测，通过对靶向基因治疗，对改善患者预后情况尤为 重要[10]。

GLUT-1是人体细胞膜上的葡萄糖转运蛋白，与糖尿病、癌症等疾病关系密切，机体出现乳腺肿瘤时，体内的GLUT-1表达会出现异常，肿瘤恶化程度越高，增殖速度越快，则GLUT-1表达量越高[11]。HER-2是原癌基因，会导致细胞恶变，增加癌症病变程度，增强肿瘤细胞侵袭能力，对淋巴结转移起到促进作用[12]。PCNA是一种核蛋白，指的是细胞DNA合成期DNA多聚酶δ的辅助蛋白，其可参与细胞增殖过程的DNA复制，反映细胞的增殖活性，PCNA蛋白阳性表达率越高表示肿瘤细胞增殖越活跃，肿瘤恶性程度越高[13]。PTEN是磷酸酶活性抑癌基因，可以对细胞周期、细胞迁移起到调节控制作用，从而达到抑制恶性肿瘤细胞生长的目的，PTEN蛋白阳性表达程度与组织恶性病变程度呈负相关，研究显示，乳腺癌组织中PTEN蛋白阳性表达水平低于正常组织，因此常将其作为乳腺癌检测分子标记物[14-15]。本研究结果显示，与癌旁正常组织相比，乳腺癌组织GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白阳性表达率显著升高，PTEN蛋白阳性表达率显著降低，表明在乳腺癌组织中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白呈高表达状态，PTEN蛋白呈低表达状态。

肿瘤内部缺氧时，GLUT-1表达会促进肿瘤细胞的糖代谢，与肿瘤的增殖速度、临床分期及低生存率相关，乳腺癌患者肿瘤细胞增殖速度远超出正常细胞，会造成细胞缺氧，葡萄糖代谢水平加快，GLUT-1表现出异常升高的情况，检测GLUT-1表达水平可对乳腺癌的预后进行判断[16]。HER-2蛋白阳性表达越高，乳腺癌患者肿瘤转移风险越大，对患者预后造成不利影响[17]；PCNA蛋白阳性表达和乳腺癌病理分级呈正相关，与预后呈负相关[18]； GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白的高表达使肿瘤细胞的增殖和生长加快，更有利于肿瘤的浸润和转移，因此在临床分期越晚或淋巴结发生转移的患者中，其阳性表达率越高。本研究中，临床分期为Ⅲ ～ Ⅳ期、淋巴结转移的乳腺癌患者乳腺癌组织GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白表达阳性率显著高于临床分期为Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴结未转移者，PTEN蛋白表达阳性率显著低于临床分期为Ⅰ ～ Ⅱ期、淋巴结未转移者，表明GLUT-1、HER-2、PCNA、PTEN蛋白表达情况可以作为乳腺癌患者临床分期及淋巴结转移的预测、评估指标。

管洁等[19]对乳腺癌中GLUT-1、p53蛋白表达水平的研究中，乳腺癌患者GLUT-1蛋白阳性表达者术后1年生存率为70.73%，蛋白表达阴性者术后1年生存率为95.65%，阳性者生存率显著低于阴性者；贾晓锋等[20]对乳腺癌中PTEN蛋白表达的研究中，得出PTEN蛋白阳性表达组患者5年生存率为78.3%，与阴性表达组的57.6%比较，生存率显著升高。本研究中，死亡组乳腺癌组织GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白阳性表达率显著高于生存组，PTEN蛋白阳性表达率显著低于生存组，进一步表明GLUT-1、 HER-2、PCNA、PTEN蛋白阳性表达情况和乳腺癌患者的生存率有一定的相关性，能够一定程度上预测乳腺癌患者的预后情况。

综上，乳腺癌组织中GLUT-1、HER-2、PCNA蛋白呈现高表达，PTEN蛋白呈现低表达，并与其临床分期、淋巴结转移及预后情况关系密切，进行乳腺癌组织GLUT-1、PTEN、HER-2、PCNA蛋白表达的检测能够为乳腺癌的诊断与预后评估提供参考，建议临床进一步研究。