磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物辅助改善记忆功能的作用

黄远英，殷光玲

汤臣倍健股份有限公司（广州 510663）

记忆力是指识记、保持、再认识和重现客观事物所反映的内容和经验的能力。辅助改善记忆功能是我国保健食品27个功能之一，适宜人群为“需要改善记忆者”，需要改善记忆者常指3类人群，即记忆力减退的中老年人、长期应用大脑的脑力劳动者及因考试升学等压力需要高效理解记忆的广大青少年[1]。

神经细胞膜中含有大量的磷脂酰丝氨酸，其对神经细胞的维持、修复及功能具有重要作用。研究表明，补充磷脂酰丝氨酸能减缓甚至逆转痴呆或者与衰老相关的学习、情绪、记忆、注意力等的下降[2]。

银杏叶制剂具有提高记忆功能的作用，其主要是通过促进大脑海马胆碱的再摄取，减少M型胆碱受体和α2肾上腺素受体及递质的丢失，从而发挥改善学习和记忆能力的功能[4]。

B族维生素缺乏会导致许多酶系统功能障碍，进而产生一系列神经化学和形态学变化，最终影响脑发育和脑功能[5]。B族维生素对于认知行为的影响，在很大程度上归因于其调节了神经递质的代谢，从而改变了神经系统的化学传导过程。

试验将磷脂酰丝氨酸、银杏叶提取物、B族维生素、亚麻籽油等按一定比例进行复配，制得磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物，对小鼠进行辅助改善记忆功能试验，为开发辅助改善记忆的功能食品提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

健康SPF级昆明种小鼠[长沙市天勤生物技术有限公司，生产许可证SCXK（湘）2009-0012]。

1.2 样品

磷脂酰丝氨酸银杏叶软胶囊内容物，为黄褐色粘稠物，由汤臣倍健股份有限公司提供，日服用建议剂量1.2 g。

1.3 剂量选择和受试物给予方式

试验小鼠按随机分组原则分为低剂量组[0.10 g/（kg·bw）]、中剂量组[0.20 g/（kg·bw）]、高剂量组[0.60 g/（kg·bw）]及对照组（低、中、高剂量分别相当于日服用建议剂量的5，10和30倍）。低、中、高剂量受试液配制时分别取2.00，4.00和12.00 g磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物，加植物油至200 mL，对照组予以等体积的植物油，每天灌胃1次，灌胃体积0.1 mL/（10 g·bw），连续30 d。

1.4 主要仪器与设备

MP150十六道生理记录仪（美国BIOPAC公司）；DSI遥测系统（美国DSI公司）；ZB-200小鼠疲劳转棒仪（成都泰盟仪器有限公司）；MORRIS水迷宫（中国医学科学院药物研究所）；ZZ-6小鼠自主活动测试仪（成都泰盟仪器有限公司）。

1.5 试验方法

1.5.1 跳台试验

体重18～22 g的雄性小鼠，随机分为3个剂量组和1个对照组，每组10只。连续灌胃 30 d 后进行跳台试验。将动物放入反应箱内适应3 min，立即通以36 V交流电刺激小鼠。将小鼠放在绝缘平台上，记录各小鼠第1次跳下平台的潜伏期、5 min内每只小鼠受到电击的次数（跳下平台的错误次数）和各组跳下平台的动物数，以此作为学习成绩。24 h后重复测试，记录第1次跳下平台的潜伏期、3 min内跳下平台的错误次数和各组跳下平台的动物数。停止训练5 d后进行消退试验。

1.5.2 避暗试验

动物选择，试验分组，给受试物的剂量、途径、时间均同跳台试验。连续灌胃30 d后开始进行避暗试验。记录每只鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间（潜伏期）、5 min内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。24 h后同一时间，再进行测验，记录每鼠进入暗室的潜伏期、5 min内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。停止训练5 d后进行消退试验。

1.5.3 水迷宫试验

体重18～22 g的雄性小鼠，随机分为3个剂量组和1个对照组，每组10只。连续灌胃30 d后进行跳台试验。训练期间继续给予受试物。每天训练1次，连续5 d。第1 d训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次，以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上1次。第1天训练时，用挡板在A处挡死，从A点开始训练；第2天从B处开始，此路程训练3 d，至80%的动物在2 min内到达终点；第5天从气垫开始训练；以5 d的总学习成绩进行评价（即各组5 d到达终点的总时间、总错误次数和各组2 min内到达终点的动物数）。停止训练5 d后进行消退试验。

1.6 试验数据统计

试验数据用SPSS软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料用多个试验组和1个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足“方差齐”要求后，用转换所得的数据进行统计处理。

水迷宫试验中到达终点的时间、总错误次数、跳台试验和避暗试验中的潜伏期、错误次数属计量资料，可用方差分析，但需先进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与1个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐性的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane’s T2检验进行两两比较。水迷宫试验中2 min内到达终点的动物数（百分率）、跳台试验中跳下平台的动物数（百分率）、避暗试验中进入暗室的动物数（百分率）为计数资料，用χ2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，改用确切概率法。

1.7 结果判定

1.7.1 跳台试验

若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，差异有显著性，以上三项指标中，任一项指标阳性，均可判定该项试验阳性。

1.7.2 避暗试验

若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5 min内进入暗室的错误次数或5 min内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，以上三项指标中任一项指标阳性，均可判定该项试验阳性。

1.7.3 水迷宫试验

试验组与对照组比，试验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组，或2 min内到达终点的动物数明显多于对照组，且经统计学检验差异有显著性。其中，任一项指标阳性，均可判定该项试验阳性。

1.7.4 结果判定

跳台试验、避暗试验、水迷宫试验3项试验中任2项试验结果阳性。且重复试验结果一致（所重复的同一项试验2次结果均为阳性），可以判定磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物辅助改善记忆功能试验结果阳性。

2 结果与分析

2.1 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠体重的影响

由表1～表3可见，经口连续灌胃给予小鼠不同剂量的磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物30 d，重复2次试验，各剂量组小鼠体重与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表1 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠体重的影响（水迷宫试验）

表2 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠体重的影响（避暗试验）

表3 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠体重的影响（跳台试验）

2.2 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠水迷宫试验的影响

2.2.1 水迷宫试验

由表4可见，经口连续灌胃给予小鼠不同剂量的磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物30 d，重复2次试验，第1次试验结果表明，高剂量小鼠到达终点的时间、到达终点前的错误次数与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；各剂量组小鼠2 min内到达终点的动物数与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。第2次试验结果表明，高剂量小鼠到达终点的时间、到达终点前的错误次数与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；各剂量组小鼠2 min内到达终点的动物数与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表4 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠水迷宫试验

2.2.2 水迷宫消退试验

由表5可见，重复2次水迷宫消退试验，第1次试验结果表明，高剂量组小鼠到达终点的时间与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）。第2次试验结果表明，各剂量组小鼠到达终点的时间、到达终点前的错误次数、2 min内到达终点的动物数与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表5 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠水迷宫消退试验

综合评定，水迷宫试验结果为阳性。

2.3 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠避暗试验的影响

2.3.1 小鼠避暗试验

由表6可见，经口连续灌胃给予小鼠不同剂量的磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物30 d，重复2次试验，第1次试验结果表明，高剂量小鼠测验时进入暗室潜伏期、测验错误次数与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；第2次试验结果表明，高剂量小鼠测验时进入暗室潜伏期与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）。

表6 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠避暗试验

2.3.2 小鼠避暗消退试验

由表7可见，重复2次小鼠避暗消退试验，第1次试验结果表明，高剂量小鼠进入暗室潜伏期与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；第2次试验结果表明，各剂量组小鼠进入暗室潜伏期、错误次数、进入暗室动物数与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表7 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠避暗消退试验

综合评定，避暗试验结果为阳性。

2.4 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠跳台试验的影响

2.4.1 小鼠跳台试验

由表8可见，经口连续灌胃给予小鼠不同剂量的磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物30 d，重复2次试验，2次试验结果表明，各剂量组小鼠训练时与测验时跳下平台的潜伏期、训练时与测验时小鼠跳下平台的错误次数、小鼠跳下平台的动物只数和错误反应率与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表8 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠跳台试验

2.4.2 小鼠跳台消退试验

由表9可见，重复2次小鼠跳台消退试验，2次试验结果表明，各剂量组小鼠跳下平台的潜伏期、小鼠跳下平台的错误次数、跳下平台的动物只数与对照组比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

表9 磷脂酰丝氨酸银杏复合物对小鼠跳台暗消退试验

综合评定，跳台试验结果为阴性。

3 小结

跳台、避暗和水迷宫试验都是通过观察对记忆获得、巩固、再现的影响来观察受试物对记忆各过程的影响效果[6]。分别经口给予小鼠0.10，0.20和0.60 g/（kg·bw）剂量的磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物30 d，对小鼠体重增长无不良影响。水迷宫试验、避暗试验前后2次试验，结果均为阳性，表明能有效改善小鼠的学习记忆能力。按照《保健食品检验与评价技术规范》对辅助改善记忆功能保健食品的判定标准可知，磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物具有辅助改善记忆的作用。

4 结论与探讨

老龄化是不可回避的社会问题，在我国一些省市，65岁以上的老龄人超过20%。预计到2025年，中国老年人口将突破3亿人[7]。研究显示高龄老年人认知能力随年龄增长出现不同程度的减退[8]。2020年发表在《柳叶刀·公共卫生》上的一项全国性横断面研究显示，我国60岁及以上人员轻度认知障碍（MCI）患病率达15.5%。据此推算，我国老年人群中MCI患者约3 877万。因此，应大力研发社会需求量较高、改善老年人记忆减退的产品，以满足时代和民众对改善记忆的需求。

磷脂酰丝氨酸是细胞膜组分之一，它能影响细胞膜的流动性、通透性，并且能激活多种酶类的代谢和合成，具有改善神经细胞功能、调节神经脉冲传导和增进大脑记忆功能。不仅对生理性认知能力、损伤人群的认知能力恢复具有显著、积极的效应，并且在非损伤性认知能力下降的人群研究中被证明也具有提高认知力的作用[9]。陈頔等选取49～65岁退休人员作为研究对象，服用磷脂酰丝氨酸复合物30 d后，试食组试食前后各量表得分、总量表分和记忆商均明显升高（P＜0.01）；试食后试食组与对照组比较，除指向记忆无明显变化外，其他各项得分均明显升高，总量表分和记忆商也显著提高（P＜0.01）。陈红辉等[3]在银杏叶提取物改善学习记忆障碍的试验研究中发现，银杏叶提取物可改善痴呆鼠学习记忆功能障碍。MCI是指介于正常老化的记忆力减退和痴呆之间的认知障碍状态。记忆功能损害（不同的记忆损害类型和损害程度）是MCI最主要或最突出的临床表现，其余受损的认知领域还包括语言功能、注意力、执行功能、视空间功能等方面[10]。余忠海等[4]在为期1年的银杏叶治疗MCI患者试验中发现，银杏叶片具有提高MCI患者记忆商，改善MCI患者总体记忆功能的作用，尤其是在提高短时记忆和瞬时记忆方面表现更加显著。

通过对老年人群维生素营养状况测试分析发现，一些B族维生素的缺乏与老年人认知功能低下有关[5]。一研究观察137位66～90岁老人的维生素营养状况与认知功能之间的关系，结果发现摄入较多VB1、VB2、尼克酸和叶酸的老人具有较高的抽象思维能力。

磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物对改善老年人记忆减退方向具有理论基础，通过动物试验初步证明其具有辅助改善记忆的功能。磷脂酰丝氨酸银杏叶复合物对老年人记忆减退的实际改善功效需要进一步的人体试验研究验证。