食品中兽药残留检测卡与试剂盒检测技术

王宏业

(七台河市检验检测中心，黑龙江 七台河 154600)

0 引言

食品检测是一项系统化的复杂工作，内容比较繁杂。食品种类越来越多，食品检测内容也在逐渐增加，不同的食品，其检测标准和要求也存在很大差别，传统的单一的检测方法已逐渐被淘汰。应健全检测规范，积极运用先进的检测技术，探索新的检测模式，完成食品检测工作。目前，我国食品检测工作中存在的主要问题是食品检测方法不当，检测技术落后，检测标准和技术不规范，检测人员责任心不强，不能抓住关键环节，食品检测监督力度不到位。应提高食品检测技术水平，健全食品检测管理体系，抓住食品检测的重点环节。

在食品检测流程上，应对食品样本进行检测，为食品监管部门提供食品检测数据，对食品质量进行有效监管，促进食品工业稳定发展，为食品市场供给合格的产品，不断提升食品质量，保证消费者合法权益。在食品检测机构方面，提升检测水平和检测设备性能，针对检测重点环节，提升检测管理水平。优化食品检测工作流程，进行检测业务受理，客户将采集样本送检，进行检测任务派发，检测机构进行样品接收、制备、流转、检测，形成原始记录，对检测结果进行审核，编制、审核批准检测报告，对检测报告存档管理，提升食品检测结果的准确性，保证食品检测质量。抓住食品检测流程的基本环节，加强样本采集、样本接收、样本制备、样本流转等环节的管理。加强检测流程质量管控力度，制定检测流程改进方案，提升食品检测效率。

食品检测技术人员要掌握兽药残留快速检测基本方法和基本操作技能，熟悉兽药的基本类型，熟悉检测原理，了解如何获得兽药残留的有关标准依据和检测试剂制造商信息，更好地掌握食品中兽药残留控制途径、技术方法、标准等。

以食品中兽药残留检测为例，研究检测适用范围，检测必备的仪器、材料和试剂，掌握检测的主要步骤及检测中应注意的问题等。

1 盐酸克仑特罗检测卡检测技术

A.检测适用范围。盐酸克仑特罗检测卡检测方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中的盐酸克仑特罗含量的检测。

B.检测基本原理。运用抗原抗体的特异反应及侧向色谱和胶体金技术进行尿液中克仑特罗分子的快速定性检测。

C.检测主要仪器。食品加工机，低速离心机，电子秤(精度0.1 g)，250 μL单道微量移液器(移液枪)。

D.检测材料与试剂。盐酸克仑特罗检测卡、检测试剂A(3%三氯乙酸溶液)、检测试剂B(0.1 mmol/L氢氧化钠溶液)、pH试纸、剪刀、10 mL试管(或离心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.检测的主要操作步骤：从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1 h内尽快使用。把肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工机中，用一字刀粉碎，称取5 g粉碎样本置于试管中，加入5 mL检测试剂A。盖上盖，摇匀，浸泡约10 min。用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2 min (3 000 r/min)，用移液枪移取250 μL上清液转移入2 mL检测管中，加入约l滴检测试剂B，调整pH值至7左右。将盐酸克仑特罗检测卡片置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加样孔内，待紫红色条带出现后，测试结果在5 min时读取，进行结果判定。

F.灵敏度。灵敏度(阈值)：按照每种检测卡控制浓度确定。盐酸克仑特罗有控制规格，判断前向供应厂家咨询控制阈值。

G.检测中应注意的几个问题：一是猪组织及尿液采用不同型号的检测卡，使用时必须分类使用。二是使用盐酸克仑特罗(尿液)检测卡对猪尿液检验时，直接把猪尿液代替样品处理液用于检测。三是肉及内脏中脂肪会造成假阳性结果，取样时需剔除肉眼可见的脂肪。四是盐酸克仑特罗检测卡必须在常温下使用，不能对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉直接进行检测。五是自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照，可用与阈值接近的几个浓度阶梯来校验检测卡的灵敏度。

2 莱克多巴胺检测卡检测技术

A.检测适用范围。此类方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中莱克多巴胺含量的检测。

B.检测基本原理。本试剂运用竞争抑制胶体金免疫色谱的原理。

C.检测的主要仪器。食品加工机，低速离心机，电子秤(精度0.1 g)，250μL单道微量移液器(移液枪)。

D.检测材料与试剂。莱克多巴胺检测卡、检测试剂A(3%三氯乙酸溶液)、检测试剂B(0.1 mmol/L氢氧化钠溶液)、pH试纸、剪刀、1.5 mL离心管、10 mL试管(或离心管)、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.检测的主要操作步骤：铝箔包装袋中取出检测卡，在1 h内尽快使用。把肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工机中，用一字刀粉碎，称取5 g粉碎样本置于试管中，加入检测试剂A 5 mL。盖上盖，摇匀，浸泡约10 min。用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2 min (3 000 r/min)，用移液枪移取250 μL上清液转移入2 mL检测管中，加入约l滴检测试剂B，调整pH值至7。把莱克多巴胺检测卡片置于清洁平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加样孔内。等待紫红色条带的出现，测试结果应在5 min时读取，进行结果判定。

F.灵敏度。灵敏度(阈值)：按照每种检测卡控制浓度确定，按莱克多巴胺目前的控制规格，判断前向供应厂家咨询控制阈值。

G.检测中应注意的问题：一是根据猪组织和尿液采用不同的检测卡，必须区别使用。二是使用莱克多巴胺(尿液)检测卡对猪尿液进行检验时，直接把猪尿液代替样品处理液用于检测。三是肉及内脏中脂肪会造成假阳性结果，取样时应剔除肉眼可见的脂肪。四是莱克多巴胺检测卡须在常温下使用，不能对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉直接检测。五是自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照，可用与阈值接近的浓度阶梯来校验检测卡的灵敏度。

3 氯霉素检测卡检测技术

A.检测适用范围。氯霉素检测卡主要应用于牛乳、尿样、肝、肉、饲料、乳粉及其制品中氯霉素含量的检测。

B.检测基本原理。采用高度特异性的免疫色谱检测技术，通过单克隆抗体竞争结合氯霉素偶联物和牛乳中可能含有的氯霉素。卡片上含有被事先固定于膜上测试区(T)的氯霉素偶联物和被胶体金标记的抗氯霉素单克隆抗体。

C.检测的主要仪器：低速离心机。

D.检测材料与试剂：氯霉素检测卡、检测反应试剂杯、吸管、1.5 mL离心管、一次性塑料吸管、一次性手套等。

E.检测的主要操作步骤：以牛乳氯霉素检测为例，把采集的样品进行编号，放于常温(20℃～30℃)室内，低温牛乳的流动性差，不适合试纸色谱检测。用一次性吸管取1 mL摇匀原乳，加入离心管内，扣紧离心管盖，对称放人离心机转头内，3 000 r/min离心3～4 min，直至离心管溶液顶部出现明显的脂肪层，离心效果较差时可考虑使用较高转速的离心机，控制速度在7 000～10 000 r/min。把吸管插入离心管脂肪层液面下5 mm处，准确定量吸取脱脂牛乳样品至吸管刻度线位置。从塑料筒内取出需要数量的反应小杯，撕去杯面的密封膜。把吸取的牛乳全部滴入反应小杯中，用吸管将反应小杯中的溶液进行反复吸放，直至小杯底部及四壁的红色物质全部溶解并混合均匀后，等待约2 min，即得待检样品。必须注意的是：本品的灵敏度高低与混匀后等待的时间正相关，提高灵敏度可适当延长混匀后等待的时间(反应时间)。从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1 h内应尽快地使用。用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加样孔(S)内。加样后开始计时，待紫红色条带出现后，测试结果在5 min时读取，进行结果判定。

F.灵敏度。灵敏度(阈值)：按每种检测卡控制浓度确定，根据氯霉素控制规格，判断前向供应厂家咨询控制阐值。

G.检测中应注意的问题：一是家禽组织、尿液或饲料必须采用不同类别的检测卡。二是使用氯霉素(尿液)检测卡对家禽尿样进行检验时，直接将猪尿液代替样品处理液用于检测即可。三是检测家禽肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果，取样时应剔除肉眼可见的脂肪。四是氯霉素检测卡应在常温下使用，不能对刚屠宰的禽肉或冷冻禽肉直接检测。五是自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照，可用与阈值接近的几个浓度阶梯来校验检测卡的灵敏度。

4 牛乳中青霉素酶活性检测试剂盒检测技术

A.检测适用范围。可检测到牛乳样品中残留的青霉素酶。

B.检测的主要仪器。温育器，冰箱或保温箱，单道微量移液器。

C.检测材料与试剂。微量移液器吸嘴(盒装96支)，含特定浓度青霉素G的玻璃瓶装试剂，试剂筒(包括8孔微孔试剂和8条测试条)，阴性质控试剂(不含抗生素和酶的原乳干粉)。

D.检测的主要操作步骤：吸取400 μL牛乳样品加到含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶中，混合均匀。40℃±3℃温育45 min。吸取200 μL温育后牛乳样品加到装有冻干试剂的微孔中，混合均匀。40℃±3℃温育3 min。测试条插入到微孔中，40℃士3℃下继续温育3 min，判读结果。

E.检测中应注意的问题：一是试剂盒必须保存在℃～8℃的阴凉干燥处。使用前从冰箱取出，恢复至室温后方可使用。二是阴性质控需要用1 mL。纯净水还原，混合均匀。阴性质控加纯净水还原后需在20℃保存，防止反复冻融。三是该方法不能用于检测酸奶。四是要确保待测牛乳样品是抗生素检测结果阴性。

F.检测结果判定。其一，阳性(+)牛乳样品中掺有青霉索酶：若牛乳样品中含有青霉素酶，青霉素G因其降解，不能抑制青霉素受体与测试条俘获带的结合，则测试条的检测线(T线)区出现红色条带，而控制线(C线)区会发生浅红色的条带。其二，阴性(-)牛乳样品中不含青霉素酶：若牛乳样品中未掺杂青霉素酶，或青霉素酶含量少于可检测到的范围，玻璃瓶中的青霉素G会与青霉素受体结合，将抑制青霉素受体与俘获带的结合，因此，在测试条上只有控制线(c线)区的一个条带显色。其三，温育结束后，10 min内读取结果。如超过15 min，检测结果无效，测试条干燥后颜色深度会增加。若发现阳性检测结果，必须进行验证。

5 链霉素ELISA试剂盒在检测中的应用

A.目的要求。理解链霉素ELISA试剂盒在蜂蜜、牛乳及组织中链霉素检测中的现实意义。

B.原理方法。应用抗原抗体反应原理，采用竞争抑制法构建用于定量测定蜂蜜、肉类及牛乳中链霉素残留的一种ELISA试剂。

C.检测的主要器材。恒温箱(孵箱)，单道微量移液器，塑料吸嘴，洗瓶；酶标仪，洗板机；动物性制品，乳制品等。

D.主要操作步骤：熟悉试剂盒说明书。把试剂盒内的预包被孔条(通常是由12条可拆卸板条组成，每条8孔)，按需要取出8孔条平衡到室温，操作过程所需的试剂一同取出平衡到室温。把准备好的供试样品溶液、标准品、阳性对照、阴性对照等分别定量取到反应微孔内进行孵育，用配套洗液清洗反应微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入酶标记物，按要求孵育一定时间，用配套洗液清洗反应微孔。微孔去除多余水分后，逐孔定量加入TMB，按要求避光孵育一定时间，直接判读定性结果或在酶标仪上读取OD值。

6 结语

运用食品中兽药残留检测的盐酸克仑特罗检测卡检测技术、莱克多巴胺检测卡检测技术、氯霉素检测卡检测技术、牛乳中青霉素酶活性检测试剂盒检测技术、链霉素ELISA试剂盒检测技术，明确了其检测适用范围、基本原理、仪器、材料与试剂、主要操作步骤和应注意的问题，以提升食品检测技术水平。