一例芦花鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与治疗

严熬生，陈亚强

(1.重庆市黔江区鹅池镇农业服务中心，重庆 400000；2.重庆三峡职业学院，重庆 400000)

0 引言

禽大肠杆菌是禽大肠杆菌病的主要病原，是危害养禽业的重要细菌性病原，主要通过呼吸道和消化道感染家禽，并导致家禽多系统混合感染，甚至引起急性死亡[1-2]。2021年6月，重庆市万州区某芦花鸡场的130羽30日龄雏鸡发生了鸡大肠杆菌病感染，发病初期，病鸡主要出现萎靡不振而后逐渐变成食欲废绝，所有发病鸡均羽毛松乱，部分病鸡闭目嗜睡、出现呼吸困难、排白色稀粪等症状，同时，病鸡还出现扎堆现象。随着病情加深，病鸡逐渐出现死亡，5 d内死亡了12羽雏鸡，剩余病鸡体重下降，出现脱水症状(皮肤干燥、干瘪)。该鸡场出现病情后，经阿莫西林拌料、氟苯尼考饮水治疗无效，后就诊于重庆三峡职业学院动物疫病检测诊断中心。笔者通过对病死鸡的临床症状分析、病理剖检、实验室诊断等，确诊为鸡大肠杆菌病后，提出了相应的治疗方案，现将该病例报告如下。

1 材料与方法

1.1 病料采集

剖检12羽病死鸡，临床观察各组织、器官病变，无菌采集病死鸡脾脏﹑肝脏、心脏作为检测病料。

1.2 主要试剂

麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基、LB培养基、微量生化鉴定管、药敏纸片(庆大霉素、阿米卡星、头孢噻肟、泰妙菌素、恩诺沙星、环丙沙星、硫酸粘菌素、氟苯尼考、氨苄西林、红霉素、卡那霉素)均购自杭州微生物试剂有限公司；10日龄20羽健康芦花鸡雏鸡采购自重庆市铭森昇祥农牧科技有限公司。

1.3 细菌分离

将采集的肝脏、脾脏、心脏病料无菌切开，选取洁净面划线接种于麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝培养基，置于生化培养箱37℃培养18 h，取出并观察菌落形态，然后挑取单菌落纯化接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18 h，取出并挑取单菌落进行革兰氏染色后镜检。同时将纯化后的单菌落挑取置于LB液体培养基，置于摇床，37℃培养18 h，然后用甘油保存至-20℃，备用。

1.4 生化鉴定

将纯化后的菌落挑取置于五糖(葡萄糖﹑蔗糖﹑乳糖、麦芽糖、甘露醇)发酵试验、IMViC、尿素酶鉴定管，按照说明书进行生化鉴定[3]。

1.5 致病性试验

将20羽健康芦花雏随机分为试验组和对照组，每组10羽雏鸡。试验组用分离纯化细菌的LB液体培养物(大肠杆菌浓度为2.0×109CFU/mL)，0.2 mL/羽皮下注射；对照组用生理盐水，0.2 mL/羽皮下注射。2组雏鸡分开饲养，定时观察发病及死亡情况。出现死亡的雏鸡，进行剖检，观察组织器官病变，并无菌采集脾脏、肝脏、心脏作为病料，重复以上方法进行细菌分离鉴定。

1.6 药敏试验

采用K-B纸片扩散法[4]，将纯化菌接种于LB培养基，将药敏纸片贴于培养基表面，37℃培养18 h，测量抑菌圈直径(低敏：小于10 mm；中敏：11～15 mm；高敏：大于15 mm)。

2 结果

2.1 病理变化

剖检见心包炎、心水肿、心包囊充满淡黄色的纤维素性渗出物，腹膜水肿，肝脏表面有纤维素性渗出物，膈肌下有炎性积液。

2.2 细菌分离

在麦康凯琼脂培养基上培养出圆形光滑、边缘整齐的红色菌落，在伊红美蓝琼脂培养基上培养出圆形光滑、带金属光泽的紫黑色菌落。通过显微镜镜检为红色短杆菌，判定为革兰氏阴性短杆菌。分离菌镜检如图1所示。

图1 分离菌镜检结果

2.3 生化鉴定

分离菌能够分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，并能够产酸产气，蔗糖发酵试验只产酸不产气；分离菌不能利用枸橼酸盐，M-R试验为阳性，吲哚试验为阳性，V-P、尿素酶试验为阴性(见表1)。结合病鸡临床症状、病理变化、镜检结果、生化特性及致病性试验结果，确定分离菌为大肠杆菌。

表1 生化鉴定结果

2.4 致病性试验

对照组的10羽雏鸡未出现任何临床症状，正常存活。试验组的10羽雏鸡注射菌液12～24 h开始不同程度出现症状，主要表现为精神萎靡、腹泻、食欲下降或废绝，24～48 h陆续出现死亡，发病率和死亡率为100%，病理剖检发现有心脏水肿、心包积液，腹腔有积液，且肝脏表面呈灰白，有部分纤维素性渗出，病死鸡气囊有浑浊的渗出物。采集心脏、肝脏、脾脏进行细菌分离，并进行生化鉴定，结果同接种菌一致，表明分离菌为致病性大肠杆菌，本次疫情是致病性大肠杆菌引起的禽大肠杆菌病。

2.5 药敏试验

分离的大肠杆菌对阿米卡星、头孢噻肟、恩诺沙星高度敏感，对环丙沙星、硫酸粘菌素中度敏感，对庆大霉素、泰妙菌素、氟苯尼考、卡那霉素、氨苄西林和红霉素低度敏感，其中氟苯尼考、氨苄西林和红霉素抑菌圈为0 mm，如表2所示。

表2 药敏试验结果

3 防治措施

3.1 药物治疗

全群用头孢噻肟钠按照200 g/kg进行拌料，用10%恩诺沙星按照l00 mg/kg进行饮水，隔天交叉轮换用药，连用5 d；对于个别临床症状严重病鸡，按照20 mg/(kg体重)肌注阿米卡星；饮水中添加2.5%的口服补液盐以及2%葡萄糖，以维持病鸡电解质平衡，给予病鸡能量。

3.2 消毒措施

对病鸡舍用1:200过硫酸氢钾进行紧急消毒[5]，对鸡饮用水进行消毒，每50 L水加入1 g漂白粉，看其大肠杆菌是否超标或是否存在致病性大肠杆菌，检测结果表示饮水大肠杆菌菌落数处于正常范围。

3.3 饲养管理

对出现临床症状的病鸡进行紧急隔离，对病情严重的雏鸡及病死鸡作深埋或高温高压化制无害化处理；安排专人定时巡查，观察病鸡及整个鸡群情况，严禁人员从病鸡舍到健康鸡舍，严控生物安全。

用药6 d后再无发病死亡，疫情得到控制，连续采取措施后，发病雏鸡均恢复正常采食和饮水。

4 讨论与分析

大肠杆菌是环境常在菌，常常由于环境改变而致病，禽大肠杆菌病是家禽较为常见的疾病，不仅可以引起卵黄炎、输卵管炎、腹膜炎、肉芽肿、蜂窝织炎、皮肤感染、骨髓炎、关节炎、肿头综合症、气囊炎、多浆膜炎、肝周炎、心包炎、眼球炎等诸多感染，也可引起家禽腹泻，同时禽大肠杆菌还被认为是人源致病性大肠杆菌的重要来源，对公共卫生安全构成威胁[6]。芦花鸡由于其耐粗饲等特点，除了在山东养殖较多以外，川、渝两地丘陵山区引进饲养较多，而且多为林下养殖，包括饮水在内的饲养环境普遍复杂，容易受到大肠杆菌侵害，所以在生产上不仅要防止外源性侵入，做好芦花鸡的引种管理工作，还需要加强饲养管理，严格控制环境卫生，尤其是饮水消毒[7]。

大肠杆菌病多发生在冬夏季，王娟等[8]研究发现在每年4—8月份高温潮湿多雨季节，以及12月份—次年1月的湿冷季节，禽大肠杆菌病的发病率最高。川、渝两地夏季湿热，冬季湿冷，易发生大肠杆菌病，所以应在夏季注重消毒频次的合理安排，尽可能降低环境湿度，散养芦花鸡舍应为半开放式，注重通风和遮光；在冬季应注意保暖，芦花鸡舍采用塑料薄膜进行覆盖，气温较高时开放通风不超过3 h/d[9]。

张荣民[10]对肉鸡产业链大肠杆菌进行亲缘关系分析，发现种鸡场—商品鸡场—屠宰场—超市来源的部分大肠杆菌亲缘关系相近，同时鸡群、家燕、饲养员、犬、苍蝇和污水来源的部分大肠杆菌亲缘关系也相近，表明大肠杆菌可在养殖单元动物、昆虫、水等媒介上进行传播。经前期调研发现，川、渝两地多数芦花鸡养殖场饮水主要采用山泉水，养殖场内饲养犬、猫等动物，这些都给大肠杆菌的传播提供了媒介，所以，从根源上减少大肠杆菌病的发生，主要还是要做好硬件条件的建设，修建饮用水池、粪污处理系统以及防蚊、防虫设施。

药敏试验为定向准确用药提供了科学参考[11]，本次药敏试验结果表明，目前传统的庆大霉素、环丙沙星、硫酸粘菌素等抗大肠杆菌药物对防控大肠杆菌效果甚微，大肠杆菌已产生了诸多耐药性，防控形势逐渐严峻。因此，在临床上切忌在没有确诊和药敏试验前直接用药，否则不仅会增加用药成本，同时会耽误病情时间，造成更大的传播。治疗时应根据药敏试验结果有针对性用药。