基于量子点技术的非洲猪瘟抗体现场快速检测试剂盒（QAIS）研究

非洲猪瘟（African swine feve，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染家猪和野猪引起的一种急性、发热和高传染性疾病，死亡率可达100%，被世界动物卫生组织（OIE）列为需要通报的动物疫病，被我国列为一类动物疫病。我国作为世界上生猪养殖与猪肉制品消费第一大国，2018 年8 月以来爆发的非洲猪瘟疫情给我国生猪养殖业造成了巨大的经济损失。目前世界范围内尚无有效疫苗或药物治疗方法，因此早期快速检测是预防和控制非洲猪瘟最重要的手段之一。

目前，基于TaqMan 的实时荧光定量PCR（RTqPCR）和酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA）是广泛使用的ASFV 诊断方法，也是欧盟参考实验室和世界动物卫生组织（OIE）所推荐的诊断方法。这两种诊断方法的实施必须借助于实验室的特殊仪器及专业技术人员操作来完成，不能广泛应用于养猪场的现场快速检测。近年来，随着非洲猪瘟出现亚急性或慢性感染，基于金纳米颗粒、乳胶微球或荧光染料微球的横向流动免疫分析方法等被用于实时检测血清中的ASFV抗体，但其灵敏度和稳定性还需要进一步提高，而且不能准确定量血清中ASFV 抗体含量。因此，目前没有一个ASFV 血清学诊断技术产品能够满足早期、敏感、定量现场诊断的需求。

近日，在《Analytica Chimica Acta》刊登了题为“Rapid and ultra-sensitive detection of African swine fever virus antibody on site using QDM based-ASFV immunosensor (QAIS)”的研究论文，该文章报道了一种针对ASFV 血清抗体的量子点荧光检测试纸条，配合手持式荧光免疫分析仪，可实现对ASFV 抗体进行快速、灵敏、特异、简便、定量的现场检测。该产品为养殖场提供了快速准确监测非洲猪瘟的解决方案。

本研究中QDM 与ASFV 抗原P30 和P54 通过化学反应制备的双重探针经过优化后显著提高了ASFV 血清抗体量子点荧光检测试纸条的检测敏感性，其检测限可达到1∶64 000，高于目前市售的阻断ELISA 试剂盒和胶体金检测试纸条50 倍～500 倍。该产品与猪的其他病原，如PRRSV、PRV、PCV2、FMDV、CSFV、HPS（2 型、8 型、10 型）、Mhp、Mhs、Mf、SIV（H3N2）的标准阳性血清无交叉反应，具有良好的特异性。本试纸条对151 份临床样本（113 份ASF 阴性血清，38 份ASF 阳性血清）的双盲检测结果，其符合率达到98.7%。该试纸条对ASFV 抗体全程检测仅需25 min，比常规ELISA 检测缩短1 个多小时，并且在室温或37 ℃条件下保存4 周后的检测结果依旧稳定，批内和批间重复性试验的变异系数（CV 值）均小于8.7%。因此本试纸条具有良好的稳定性和重复性，配合手持荧光免疫分析仪可以满足猪舍现场检测的要求。