低频率抗-Mur合并抗-M案例分析

王锐 代凤 王英剑

不规则抗体是指除抗A、抗B 以外的血型抗体，多经妊娠或输血免疫产生。它是引起ABO 血型鉴定困难和配血困难的主要原因。而引起临床疑难交叉配血最常见的抗体是Rh 血型系统的相关不规则抗体，该系统不规则抗体可单独存在，也可以联合抗体的形式存在，而有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应[1]。目前，临床工作中不规则抗体的筛查已经作为输血前的常规检查项目，以避免输血反应和输血无效等情况的发生。本院输血科在术前常规检测不规则抗体筛查中，发现1 例抗-M合并抗-Mur抗体的案例。现报道如下。

1 临床资料

患者，女性，31 岁，血型O 型，Rh 分型为ccDEE，临床诊断为重度肺动脉高压，否认输血史，否认生育史。术前常规不规则抗体筛查，分别以试管法室温盐水直接离心、37 ℃孵育15 min 后离心和4 ℃孵育15 min 后离心进行检测发现抗体筛查均阳性。通过对照不规则抗体筛查谱，4 ℃明显增强，可能存在剂量效应，怀疑为抗M 抗体。在4 ℃下，用10 谱细胞对该标本进行抗体特异性鉴定，1-10 号谱细胞凝集强度结果为0、3+、0，3+、2+、3+、0，2+、0、3+，在37 ℃下，用10 谱细胞对该标本进行抗体特异性鉴定，1～10号谱细胞凝集强度结果为0、2+、0、2+、0、2+、0、w、w、2+。同时在4 ℃下，用16 谱细胞对该标本抗体特异性鉴定，1～16 号谱细胞凝集强度结果为2+、3+、3+、w、2+、2+、3+、0，2+、4+、1+、3+、0、0、3+、3+。使用O 型，Rh 表型为ccDEE（与病人同型）的献血员，检测细胞表面M 抗原，选择抗原阳性的细胞，与病人血清1∶1 混匀，在25 ℃吸收1 h 后，取出上清液与M 抗原阳性细胞再次吸收：25 ℃1 h。使用吸收后血清在4 ℃下做重新进行抗体鉴定（10谱细胞）。1～10 号谱细胞凝集强度结果为0、0、0、1+、0、0、0、0、0、4+。先不考虑较弱的凝集，10 号强阳性，对照抗原谱，鉴定结果符合抗-Mur 格局。对照16 谱细胞抗原谱，发现Mur 阳性的10 号细胞，与血清反应也为强阳性：4+，随即使用吸收后的剩余血清，与16 谱细胞中的10 号细胞在4 ℃反应，结果也为4+。血清中很可能存在抗M 合并抗-Mur。应用抗-M 抗体检测病人红细胞表面M 抗原，结果为阴性，同时该病人红细胞洗涤后与抗-Mur 试剂反应，结果为阴性。

2 讨论

MNS 血型系统是最复杂的血型系统之一，其复杂程度仅次于Rh血型系统，也是最具多样性的血型系统之一[2]。Mur 抗原是MNS 系统变异抗原中最常见的一种抗原[3]，作为临床最为重要的稀有血型之一，目前受到国内临床输血界的重视。Mur 阳性血型在白种人中相当少见[4]，但在亚洲人群中却有着相当高的阳性频率[5]。有研究显示泰国人群Mur 抗原频率约为10%。我国香港、广州和台湾地区人群分别为6.28%、6.59%和7.3%[6]。

人体内抗-Mur 多数是在无红细胞刺激的情况下天然产生的，一般为IgM 性质，较少数为IgG 性质，两者可单独或者同时存在[1]。目前，国内报道的抗-Mur 引起的溶血性输血反应并不少见，大多数为IgM 型天然抗体或者为IgM+IgG 型混合抗体，但是由于在低温麻醉情况下，且红细胞的保存温度为2 ℃～6 ℃，输入的红细胞较易与高效价抗-Mur 结合并吸附补体，从而引起抗-Mur 溶血。然而单独在抗人球蛋白介质中IgG 型抗-Mur 引起的溶血性输血反应很少[7]。

在本例案例中，在4 ℃与37 ℃下用10谱细胞对该标本进行抗体特异性鉴定，将实验结果与抗原谱中M 抗原进行比对结果显示，除9号细胞外，其余细胞抗原存在情况与4 ℃鉴定结果均吻合。通过比较4 ℃与37 ℃鉴定结果发现，对于M+N-细胞，4 ℃结果均增强（2+→3+）；对于M+N+细胞，37 ℃结果为阴性（1 孔）、w（1 孔），2+（1 孔）；4 ℃分别增强到2+、2+、3+。M 阴性细胞，除9 号细胞外，其余结果均为阴性。9 号细胞阳性，除了抗-M 抗体外，是否合并其他抗体，为再次验证结果，本次研究用新购的10谱细胞，抗原谱和前一批相同，再次与9 号细胞进行反应，结果显示阴性。故是谱细胞原因还是合并其它未知抗体，由于涉及样本量问题，还需要进一步证明。

在4 ℃下，用16 谱细胞对该标本抗体特异性鉴定，将实验结果与抗原谱进行比对发现，M+N-细胞，凝集效价均为3+；M+N+细胞，凝集效价为2+（4孔），4+（1孔，10号细胞）；M阴性细胞，4号凝集效价为w，11 号为1+。其余结果均为阴性。检测结果与10 孔抗体鉴定基本一致。怀疑为抗-M 抗体合并其它抗体。应用抗-M 抗体检测病人红细胞表面M 抗原，结果为阴性。

在吸收实验结果中，先不考虑可能由于吸收不够充分而产生的较弱的凝集，10 号强阳性，对照抗原谱，鉴定结果符合抗-Mur 格局。但由于涉及样本量问题，可能还需进一步补充4 ℃条件下做吸收试验。对照16 谱细胞抗原谱，发现Mur 阳性的10 号细胞，与血清反应也为强阳性。4+，随即使用吸收后的剩余血清，与16谱细胞中的10号细胞在4 ℃反应，结果也为4+。血清中很可能存在抗-M 合并抗-Mur。在16谱细胞抗体特异性鉴定结果中，M阴性细胞，4 号凝集效价为w，11 号为1+，不能排除除抗-M 和抗-Mur 外的其它高频抗体，但由于实验条件有限，无法进行准确的抗体特异性鉴定。

在本院这例抗-M 合并抗-Mur 的案例中，该患者红细胞洗涤后与抗-Mur 试剂反应，结果为阴性。理想状态下，应使用M 阴性、Mur 阳性细胞，对血清进行吸收，使用吸收后的血清，重做抗体鉴定。并将吸收到细胞上的抗体放散下来，与Mur 阳性细胞反应，以此来确定Mur 抗体的存在。但由于实验条件不足，只能选择M 阳性细胞吸收后检测。在本次案例检测中使用4 ℃来提高抗-M 活性，但可能会受到冷凝集素干扰。可使用酸化血清（pH 6.0）在18 ℃条件下反应，也可增强凝集强度。除了抗-M与抗-Mur，抗体鉴定中10 孔细胞和16 孔细胞两套试剂均检测出有其他非预期的凝集。条件满足的情况下，或许可用M+，Mur+的细胞进行吸收后再测。另外，Mi 系统相关抗体与表型之间存在交叉反应的问题，本次实验细胞的Mi 系列其他抗原并不明确，不能确定非预期凝集是否是Mi 系列其他抗原的原因。

在Mi 系列中，1 种糖蛋白表型红细胞表面往往表达多种低频抗原，当该表型红细胞输入患者体内后，容易刺激机体产生针对多种低频抗原的混合抗体。然而，由于多数实验室缺乏Mi 系列表型明确的红细胞，同时该系列相关抗体与表型之间存在交叉反应的问题，所以这类混合抗体的鉴定工作一直难以开展，这也是该系列混合抗体很容易产生却罕有报道的主要原因。我国目前只有少数厂家的谱细胞含有“Mia”抗原[8]，所以抗-“Mia”经常会被漏检。该患者在本院治疗期间，并未输血，但为了提高输血安全性，抗体筛选谱细胞中包含Mi 系列的红细胞非常重要。