新疆牛结节性皮肤病抗体和病原学监测及结果分析

任 娟，李 舵，薛 文，秦 菊，努尔麦麦提·阿穆提，苏晓慧，美热木古丽·巴依待拉提，乌那尔汗·吉斯汗，王 文

（新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830000）

2019 年8 月10 日，经国家外来动物疫病研究中心确诊，新疆维吾尔自治区伊犁哈萨克自治州送检的病料为LSDV 核酸阳性，这是我国首次发现LSD 病例。 牛结节性皮肤病在新疆伊犁州发生后，农业农村部下发了关于做好牛结节性皮肤病防控工作的紧急通知，农业农村部下发了关于做好牛结节性皮肤病防控工作的紧急通知，要求抓紧做好山羊痘疫苗的免疫效力评价工作，在专用疫苗没有研制成功之前，建议借鉴国外做法，采用国家批准的山羊痘疫苗（按照山羊的5 倍剂量）对病牛所在县及其相邻县全部牛只进行紧急免疫。

新疆维吾尔自治区动物疾病预防控制中心自2019 年牛结节性皮肤病在伊犁州发生以来，对全疆14个地（州、市）的牛开展监测，重点地区为伊犁州、博州、塔城地区、阿勒泰地区与哈萨克斯坦接壤的边境县（市）。每年5 月到8 月吸血虫媒活跃季节开展一次主动监测。同时做好被动监测，要求任何单位和个人发现疑似牛结节性皮肤病病例，立即向当地动物疾病预防控制机构报告，当地动物疾病预防控制机构采集病料和全血样品送自治区动物疾病预防控制机构检测。

本文分析2019 年-2021 年的监测数据，掌握高风险区牛结节性皮肤病感染情况，评估新疆牛群免疫状态，及时预警，提出可行的防控措施，为制定牛结节性皮肤病防控政策提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2019 年-2020 年，自治区动物疾病预防控制中心在全区14 个地（州、市）采集血清和抗凝血样品，2021 年在博州、塔城地区、阿勒泰地区、伊犁州采集血清和抗凝血样品，样品数量见下文中各表。

1.2 检测方法与结果判定

1.2.1 检测方法

1.2.1.1 抗体检测 采集全血分离血清用于抗体检测'采用酶联免疫吸附试验方法。

1.2.1.2 病毒核酸检测 采集抗凝血用于病原学检测，采用荧光聚合酶链式反应方法。

1.2.2 结果判定

1.2.2.1 酶联免疫吸附试验结果判定 根据IDVET 羊痘检测试剂盒说明书中对实验有效性和结果判定的说明进行判定。在下列情形下实验有效：阳性对照的平均吸光度值（OD 值）大于0.350，阳性对照与阴性对照平均吸光度值 （OD 值） 比值大于 3。 对于每个样品， 计算其 S／P 百分比 （S／P%)，S／P%=（ODSample-ODNC）÷（ODPC-ODNC）×100，每个样品得出一个 S／P%。 见表 1。

表1 酶联免疫吸附试验结果判定

1.2.2.2 荧光聚合酶链式反应结果判定 根据青岛立见诊断技术发展中心牛结节性皮肤病病毒荧光PCR 检测试剂盒说明书，当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct 值＜40 时，可判定为牛结节性皮肤病病毒核酸阳性；当样品的扩增结果无Ct 值时，可判定为牛结节性皮肤病病毒核酸阴性。

2 结果与分析

2.1 血清学监测结果

2.1.1 各县（市、区）血清学监测结果

2019 年共监测来自全疆21 个县（市、区）的1 315 份血清样品，36 份抗体阳性，抗体阳性率2.74%。见表2。

表2 2019 年各县（市、区）血清学监测结果

续上表

2020 年共监测来自全疆 36 个县 （市、 区） 的 2 549 份血清样品，294 份抗体阳性， 抗体阳性率11.53%。 见表 3。

表3 2020 年各县（市、区）血清学监测结果

续上表

2021 年共监测来自 F、A、L、B 的 14 个县（市、区）的 1 656 份血清样品，237 份抗体阳性，抗体阳性率14.31%。 见表 4。

表4 2021 年各县（市、区）血清学监测结果

2.1.2 全疆各地（州、市）血清学监测结果

2019 年全疆 14 个地（州、市），从 C、D、J、L、M 5 个地（州、市）检出抗体阳性样品共 36 份，另外 9 个地（州、市）未检出抗体阳性样品。 见表5。

表5 2019 年各地（州、市）血清学监测结果

2020 年全疆 14 个地（州、市），从 C、L、F 3 个地（州、市）检出抗体阳性样品共 294 份，另外 11 个地（州、市）未检出抗体阳性样品。 见表6。

表6 2020 年各地（州、市）血清学监测结果

2021 年共监测来自 F、A、L、B 的 1 656 份血清样品，4 个地（州、市）均检出抗体阳性样品，共 237 份抗体阳性，抗体阳性率14.31%。 其中，F 抗体阳性率最高，A 抗体阳性率最低。 见表7。

表7 2021 年各地（州、市）血清学监测结果

2.2 病原学监测结果

2019 年共监测来自全疆14 个地（州、市）的1 722 份抗凝血样品，牛结节性皮肤病病毒核酸均为阴性。2020 年共监测来自全疆14 个地（州、市）的1 523 份抗凝血样品，牛结节性皮肤病病毒核酸均为阴性。2021 年共监测来自F、A、L、B 的1 638 份抗凝血样品，牛结节性皮肤病病毒核酸均为阴性。 见表8。

表8 2019 年-2020 年各地（州、市）病原学监测结果

3 讨 论

全疆开展免疫工作的4 个地（州）为F、A、L、B，从血清学监测结果看，这4 个地（州）抗体阳性率不高。机体对山羊痘活疫苗的免疫应答主要以细胞免疫应答为主，体液免疫应答为辅。 山羊痘活疫苗的缺点是皮内接种操作困难，基层防疫人员容易将疫苗注入皮下或肌肉，会造成免疫效果不佳或免疫失败。

监测样品为一一对应的血清和抗凝血，即同时采集同一头牛的血清和抗凝血分别开展血清学监测和病原学监测。 使用IDVET 羊痘检测试剂盒，无法区分野毒感染抗体和免疫抗体，从病原学监测结果均为阴性，且无临床病例(发热'消瘦，淋巴结肿大'皮肤水肿、局部形成坚硬的结节或溃疡)报告这一点看，疫苗起到了一定的保护作用。 各地（州、市）血清阳性率差异较大，与采样时间、接种疫苗的方法有关。

4 结 论

牛结节性皮肤病是我国新发疫病，目前国内对该病的研究报道不多。 牛结节性皮肤病和羊痘感染机体后，机体的免疫应答都主要以细胞免疫应答为主，所以疫苗免疫的效果不仅限于体液免疫应答的抗体水平高低，更重要的是细胞免疫应答的各种效应性淋巴细胞及多种细胞因子的反应过程。 应更多地从细胞免疫应答的角度探索对疫苗免疫效果进行评价的方法， 转变人们单一地重视体液免疫抗体的保护力，而忽视细胞免疫应答对机体保护作用的做法。