培养细胞对照与多组织对照在免疫组化染色中一致性的比较

张玮琦，脱 颖

免疫组化检测是病理医师做出准确诊断的重要依据，需进行严格的质量控制[1]。设立对照是免疫组化染色质量控制的重要组成部分，目前常用的对照包括单组织阳性对照、多组织对照体系对照、组织芯片阳性对照等[2]。然而作为对照的组织标本，由于处理方式不同、固定时间的差异以及不同患者标本蛋白表达异质性等因素的影响，不同批次制作的对照在检测同一抗原时染色强度可能存在差异，对质量控制产生影响。本文采用体外培养的肿瘤细胞制成细胞蜡块作为阳性对照[3]，以检测PAX-8抗原为例，比较其与传统组织对照在染色强度以及不同批次间一致性的差异，结果发现培养细胞对照可以达到与组织对照相似的染色强度，且不同批次间染色一致性优于组织对照，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集2021年5月～2022年1月中山大学附属第一医院病理科存档的临床诊断剩余组织，标本均经10%中性福尔马林固定24～48 h。培养细胞由本实验室提供，该细胞系为稳定传代的肾透明细胞癌细胞。

1.2 仪器与试剂PAX-8一抗试剂购自福州迈新公司；免疫组化染色采用Leica BONDⅢ全自动免疫组化染色仪，行EnVision法染色。

1.3 多组织对照与培养细胞对照的制作多组织对照选取输卵管、肾脏及甲状腺组织，常规脱水浸蜡后切成小块包埋成多组织蜡块；培养细胞对照的制作方法为将培养的细胞消化下来后，用95%乙醇与10%中性缓冲福尔马林(1 ∶1)混合后固定6 h，800 r/min离心弃上清液。沉淀的细胞中加入加热融化的10%琼脂糖，待其冷却凝固后将包含细胞的琼脂块常规脱水、浸蜡、包埋制成细胞蜡块。两种对照均需做多个批次，多组织对照不同批次应选用不同患者来源的组织标本，培养细胞对照不同批次应选用不同传代代数的细胞，以便后续比较两种对照不同批次间一致性的差异。

1.4 免疫组化染色将不同批次的多组织对照与培养细胞对照贴于同一玻片上，放入68 ℃恒温烤箱中烤片1 h，Leica BONDⅢ全自动免疫组化仪染色检测PAX-8，染色条件为RE2修复40 min，一抗孵育25 min，二抗孵育8 min，DAB显色。镜下比较培养细胞对照与多组织对照的染色强度以及不同批次间染色一致性的差异。

2 结果

将收集的不同组织标本制成10批多组织对照，将连续传代6次的培养细胞制成6批培养细胞对照，在Leica BONDⅢ全自动免疫组化仪上进行染色，镜下观察PAX-8的染色强度。结果发现培养细胞对照与多组织对照均可达到强阳性的胞核染色，具有相似的染色强度。不同批次对照之间，培养细胞对照的染色表现出极好的一致性，不同批次间染色强度无明显差异，强阳性胞核染色比例为100%；多组织对照的染色一致性相对较差，对照内的各组织在不同批次间呈现出不同程度的染色强度差异，从强阳性到弱阳性不等(图1)。不同批次的多组织对照中甲状腺滤泡上皮细胞胞核强阳性染色比例为80%，肾小管上皮细胞胞核中至强阳性染色比例为70%，输卵管非纤毛黏液细胞胞核强阳性染色比例为50%。未达到上述染色强度的组织，并不适合作为组织对照(表1)。

表1 两种对照不同批次间PAX-8染色强度的比较

3 讨论

免疫组化染色步骤繁多，设立良好的对照是其结果准确的重要保障[4]。目前常用标本组织的对照来源于日常工作中，较易获取，且具有组织形态，并能够满足日常染色质量控制的需求，被广泛使用。然而，由于组织处理方式的不同、固定时间差异以及不同患者标本的异质性等因素的影响，不同批次的对照间可能存在一定差异，对免疫组化染色的质量控制产生一定影响。

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细胞培养是肿瘤细胞的单克隆增殖技术，细胞代数之间存在极好的一致性。培养细胞对照的制作流程全程可控，其固定液的选择、固定的时间等可能会影响免疫组化染色强度的标本处理过程均受到严格标准化的控制，制作的多组织对照批次间具有极好的一致性，且其染色结果与传统组织对照在染色强度上无明显差异。

综上所述，培养细胞对照与组织对照相比，不同批次间具有更好的一致性，可以使免疫组化结果的质量控制更稳定，更适合于免疫组化整体流程的标准化与规范化，可以作为组织对照的有力补充，尤其适用于日常工作中染色结果不稳定项目的质量控制，有推广价值。