贵州地区581 例男性人乳头瘤病毒疑似患者感染状况及基因型别分析

耿见忠

贵州安康医学检验中心，贵州贵阳 550016

人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）属乳头瘤病毒科，是一种通过直接或间接接触污染物品或性传播感染的人类双链脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）病毒，不但具有宿主特异性，且具有组织特异性，能通过感染人类的皮肤及黏膜上皮细胞，引起人类皮肤的各种乳头状瘤或疣和生殖道上皮增生性损伤。现已发现有一百多种基因型[1]，其中感染人类生殖道及肛门的人乳头瘤病毒可根据基因型别、致病力大小或致癌危险性大小分为低危型HPV 和高危型HPV。持续性的高危型HPV 感染是男性和女性感染相关癌症的主要原因[2]。低危型HPV 感染与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变等良性病变相关[3]。由于HPV 与宫颈癌的相关性，关于HPV 感染与女性生殖疾病的关系有大量报道，而针对男性HPV 感染流行情况的关注较少。大多数HPV 感染患者无临床症状或表现为亚临床感染状态，男性成为HPV 重要的传染源。本研究回顾性分析581 例男性的HPV 基因分型，为贵州地区男性预防治疗HPV 感染及分析其亚型分布情况提供科学依据，也为国内HPV 疫苗研制提供数据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016 年1 月至2020 年4 月送检至贵州安康医学检验中心的581 例疑似尖锐湿疣男性患者样本，患者来自贵州省不同地区的48 家医院性或皮肤门诊等科室，按照不同年龄分为五组：年龄＜21 岁61例（10.50%），21～＜31 岁247 例（42.51%），31～＜41 岁154 例（26.51%），41～＜51 岁84 例（14.46%），≥51岁35 例（6.02%）。所有送检样本均由临床医生采集，患者自愿接受HPV23 分型检测，未排除女方因素所引起的HPV 感染。本研究经贵州安康医学检验中心伦理委员会审核批准（批准号：[2021]L001）。

1.2 仪器和试剂

Hema9600 基因扩增仪由珠海黑马医学仪器有限公司提供；亚能生物技术（深圳）有限公司提供的人乳头瘤病毒基因分型（23 型）检测试剂盒，该试剂盒同时检测23 种HPV 亚型，包括18 种高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83；5 种低危型：6、11、42、43、81。

1.3 方法

1.3.1 HPV DNA 提取 充分搅动挤压宫颈刷，将宫颈刷上的脱落细胞洗脱下来，然后将1 ml 含有脱落细胞的保存液转移到1.5 ml 离心管中。以转速13 000 r/min、离心半径8.5 cm 离心10 min。弃上清，保留管底细胞，加入50 μl 裂解液悬浮沉淀，沸水浴加热10 min 后，取出离心管，置于高速离心机中以转速13 000 r/min、离心半径8.5 cm 离心10 min，上清即为标本DNA 溶液。

1.3.2 HPV DNA 扩增及杂交 取DNA 提取物上清液5 μl，阴性质控品和阳性质控品同步处理，反应总体系为25 μl。PCR 反应条件：50℃15 min；95℃10 min；94℃30 s，42℃90 s，72℃30 s，共40 个循环；最后72℃延伸5 min。扩增完成后95℃变性10 min，将变性产物转移至全自动核酸分子杂交仪上进行杂交、孵育和显色。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计数资料用率（）表示，多组间比较采用χ2检验或Fisher 精确概率法，以P＜0.05 为差异有统计学意义，组间两两比较以P＜0.005 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 检测结果

581 例送检样本中有445 例HPV 阳性，总感染阳性率为76.59%（445/581），其中单一低危型HPV 感染阳性率为23.41%（136/581）；单一高危型HPV 感染阳性率为6.37%（37/581）；高危低危混合型HPV 同时感染阳性率39.59%（230/581），占整个检出阳性样本的51.69%。低危型HPV 多重感染阳性率和高危型HPV多重感染阳性率分别3.44%（20/581）、3.79%（32/581）（表1）。

表1 HPV 感染分布情况

2.2 HPV 感染的基因亚型分析

445 例感染者23 种HPV 亚型均被检出，检出率前五位HPV 亚型依次是HPV6 亚型33.91%（197/581）、HPV11 亚型32.53%（189/581）、HPV52 亚型12.91%（75/581）、HPV16 亚型10.84%（63/581）、HPV55 亚型9.47%（55/581）（表2）。

表2 23 种HPV 亚型检出分布情况

2.3 不同年龄组HPV 亚型感染情况

不同年龄组的单一感染阳性率、混合感染阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；＜21 岁年龄组的单一感染阳性率低于21～＜31 岁年龄组、31～＜41岁年龄组，混合感染阳性率高于31～＜41 岁年龄组，差异有统计学意义（P＜0.005）。不同年龄组的HPV 感染阳性率、低危感染阳性率及高危感染阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表3）。

表3 不同年龄组HPV 感染类型分布情况[n（%）]

2.4 不同年龄组主要HPV 亚型分布情况

不同年龄组的HPV11 型、HPV16 型感染阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；各年龄组的HPV16 型感染阳性率两两比较，差异无统计学意义（P＞0.005），其中＜21 岁年龄组和31～＜41 岁年龄组及41～＜51 岁年龄组的HPV16 型感染阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=6.683、7.410，P=0.006、0.006）；21～＜31 岁年龄组的HPV11 型感染阳性率高于31～＜41 岁年龄组及41～＜51岁年龄组，差异有统计学意义（P＜0.005）。各年龄段的HPV6 型感染阳性率、HPV52 型感染患者阳性率及HPV81 型感染阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表4）。

表4 不同年龄组主要HPV 亚型分布情况[n（%）]

3 讨论

男性HPV 感染除引起尖锐湿疣外，还可引起男性泌尿系统及其他系统肿瘤，如部分口腔癌及肛门癌、阴茎癌等[4]。有文献报道男性HPV 感染可影响男性精液质量，导致男性特发性不育等[5]。由于不同人群和地域HPV 感染分布比较复杂，本研究采用PCR 扩增及反向斑点杂交技术进行HPV23 基因分型检测，其中检测18 种高危型分别为HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、82，5种低危型HPV6、11、42、43、81，对贵州省581 例男性疑似尖锐湿疣患者皮损拭子或组织进行基因分型检测和分析。

本研究中，581 例男性患者HPV 阳性检出率为76.59%（445/581），与黄泽棋等[6]报道佛山地区阳性率77.6%（388/500）基本一致，高于张永乐等[7]报道浙江地区阳性率39.18%（228/582）、姜玲波等[8]报道山东省地区57.3%（1621/2 830）及袁利群等[9]湖南长沙地区23.23%（115/495）。HPV 阳性检出率在不同地域存在差异性，主要原因可能与不同的样本类型有关，另外本研究只检测常见的23 种亚型，而HPV 亚型数量有100 多种，取材样本量少、未能取到足够量的样本等均可导致地域分布差异。对445 例阳性患者的感染类型进行分析，感染类型以低高危型混合感染检出为主，感染阳性率为39.59%（230/581），略低于戴永刚等[10]报道的单一感染43.33%（116/269），与张永乐等[7]报道的8.61%（50/582）、程连娜等[11]报道的5.33%（13/244）有较大差异。单一感染（包括单一低危型和单一高危型）感染阳性率为29.78%，与程连娜等[11]报道的31.15%（76/244）基本一致，低于钟文英等[12]报道的62.46%（441/706），提示贵州地区男性HPV 感主要混合感染为主，建议同时检测高危型和低危型，减少漏检。

贵州地区男性HPV 检出率较高的7 种HPV 亚型分别是HPV 6、11、52、16、81、59、42 型，与国内其他地区[7，13-14]报道的男性感染率较高的7 种HPV 亚型不一致，对HPV 感染各亚型进行分析，其中低危型依次为：HPV6 型、HPV11 型、HPV81 型。其中HPV6/11 阳性率为66.44%（386/581），高于张永乐等[7]报道的23.02%（138/582）；低于余雪姣等[15]关于衢州地域男性尖锐湿疣患者的HPV6/11 阳性率81.09%（459/566），虽然不同地区之间阳性率有差异，但男性HPV 感染亚型均以HPV6 和HPV11 感染为主。高危HPV 分别为HPV16型、HPV52 型、HPV59 型。高危型与贵州地区女性HPV感染亚型比较[16-17]分析，HPV16、52 型排名一致，提示男性HPV 感染与女性感染存在一定关联，但由于本研究未排除女方因素所引起的HPV 感染，其关联性及感染因素有待进一步研究。据报道四价疫苗（HPV6/11/16/18 型）可预防90%的外阴部尖锐湿疣[18]。九价疫苗（HPVV6/11/16/18/31/33/45/52/58）早在2016年纳入美国国家免疫规划，能减少女性宫颈癌发病率90%以上[19]，男性接种疫苗可以进一步阻断HPV 的传播。但国内对男性HPV 疫苗关注较少，本研究为男性HPV 感染提供流行病材料。

本研究中按照5 个年龄段进行统计分析，各年龄段的HPV 感染阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但是21～＜41 岁的感染率略高于其他年龄段，与国内报道[4，6-7，20-22]基本一致，与该年龄段性活跃、机体免疫状态等因素有关[23]。各年龄段单一感染和混合感染阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中＜21 岁年龄组的混合感染阳性率（38/61）最高，提示低年龄组更容易发生混合感染。对各年龄段主要HPV 亚型分布情况进行分析，各年龄段的HPV11 型及HPV16 型感染阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中＜20 岁和21～＜31 岁年龄组高于其他年龄组，提示低年龄段更容易感染HPV11 型及HPV16 型，其原因有待进一步研究。

综上所述，贵州地区男性疑似尖锐湿疣患者HPV 感染以低危感染为主，以多重感染和单一低危感染为主要感染类型；HPV 感染主要以低危6、11 型为主，高危HPV 以52、16 和59 型为主。本研究分析本地区男性HPV 感染状况及基因分型，加强本地区HPV 的筛查工作，为HPV 疫苗提供一定流行病学依据，为男性自身相关疾病的防治提供指导性意义。