基于TCGA鉴定CCNB2在HCC中的临床意义

董 娟，凌 林

肝细胞癌（HCC）是全球第六大最常见的恶性肿瘤，近几十年来发病率不断上升［1］.研究表明［2］，HCC 的发生和发展中多种分子表达改变起着关键作用.因此，找到可靠的生物标志物来诊断HCC 并开发新的策略是治疗HCC 的途径.

细胞周期蛋白B2（CCNB2）和肿瘤密切相关［3］.CCNB2 是细胞周期蛋白家族成员之一，主要在G2/M 转化中发挥作用，在众多癌症表达中上调［4］.CCNB2 在神经胶质瘤中高表达，并和不良预后相关［5］，而CCNB2 的表达降低则抑制膀胱癌的侵袭和转移［6］.然而，CCNB2在HCC 中研究尚少，本文基于TCGA 数据库鉴定CCNB2 在HCC 中的临床意义，以期为HCC患者治疗提供新的诊断、预后评价，以及靶向治疗的思路.

1 资料与方法

1.1 一般资料

从TCGA（https：//portal.gdc.cancer.gov/）获取374 例肝细胞癌和50 例正常病例的样本数据，包括基因表达量和临床资料.

1.2 方法

（1）CCNB2 在癌症中表达情况使用在线网站TIMER2（http：//timer.cistrome.org/）了解CCNB2 在多种肿瘤中表达情况.利用ggplot2包提取CCNB2 在HCC 癌和癌旁组织中表达量并进行差异分析.

（2）CCNB2 与癌症分期及预后的相关性分析.使用R 软件分析CCNB2 与HCC 的临床资料的相关性，包括年龄、性别、TNM 分期、病理分期.使用Kaplan-Meier Plotter 探讨CCNB2与预后的关系.创建ROC 曲线、时间相关曲线，pROC 包用于分析，ggplot2 用于可视化.临床数据取自TCGA 数据库，p＜0.05 具有统计学意义.

（3）统计分析.R（版本4.1.2）用于数据研究，依据CCNB2 的中位表达将患者分为高、低表达两组.根据数据分布对所有数据采用t检验或用Wilcoxon rank-sum test 进行统计学分析.生存结局包括总生存期（OS）、疾病特异性生存期（DSS）和无进展生存期（PFS）.生存数据中风险评估采用Cox 回归分析，p＜0.05 具有统计学意义.

2 结果与分析

2.1 CCNB2 在HCC 中的表达结果

使用TIMER2 获取了CCNB2 在大多数癌症中的表达结果，与癌旁正常组织相比，在BLCA（膀胱尿路上皮癌）、CHOL（胆管癌）、LIHC（肝细胞肝癌）、LUAD（肺腺癌）等中高表达（图1A）.此外，利用TCGA 中获取的数据分析了CCNB2 在配对样本和非配对样本中的表达情况，显示CCNB2 在HCC 癌组织中表达高于正常组织，p＜0.001 具有统计学意义（图1B、图1C）.

图1 CCNB2 在肿瘤中的表达水平

2.2 CCNB2 表达与HCC 分期的相关性结果

结果表明，CCNB2 的表达与性别无相关性（图2B），与年龄（图2A）、T 分期（图2C）病理分期（图2F）相关，此外，N 分期（图2D）和M 分期（图2E）中基因表达水平与正常组织也存在差异表达，但在癌组织组内差异无统计学意义.还对CCNB2 进行单、多因素分析，分别得出HR（95%CI）：1.269（1.111-1.449），p<0.001和HR（95%CI）：1.307（1.103-1.548），p=0.002，显示CCNB2 可作为独立其他临床特征预测患者预后（图3A、图3B）.以上p<0.05 具有统计学意义.

图2 CCNB2 表达与HCC 不同临床病理特征之间的相关性

2.3 CCNB2 在HCC 中的Kaplan-Meier 生存曲线显示结果

在HCC 中，CCNB2 高表达与较差的OS（p=0.001）、DSS（p=0.002）和PFI（p＜0.001）相关（图4），表明CCNB2 可成为预测HCC 患者的独立预后因子.最后，进一步根据ROC 曲线分析，曲线下面积（AUC）为0.976，显示CCNB2表达预测肿瘤和正常组织具有较高的准确性（图3D）.同时，时间依赖生存曲线显示AUC值均在0.6 以上，表明CCNB2 表达越高，1年、3年、5年的生存可能性越低（图3E）.

图3 HCC 中CCNB2 的单变量分析和多变量分析

图4 CCNB2 高表达和低表达在肝癌中Kaplan-Meier 生存率的比较

3 讨论与结论

CCNB2 参与G2/M 的转化作用，该过程涉及有丝分裂的准备和有序地分配到纺锤体［7-8］.有丝分裂过程失控，会导致包括肝癌在内的多种组织中的肿瘤形成［9］.因此，近年来大量研究发现CCNB2 在肿瘤中的重要作用.例如，在三阴乳腺癌中，CCNB2 过表达和不良预后相关，敲低表达后的癌症细胞侵袭、迁移、增殖能力下降［10］；WANG 等［11］证实了肺腺癌中上游基因可以调控CCNB2 的表达，进而抑制癌症的进展.

在本研究中也发现了高表达的CCNB2 可调控制HCC 的进展.首先使用TIMER2 分析了CCNB2 在不同肿瘤中高表达，进一步基于TCGA 获得的样本数据，验证了CCNB2 在HCC中高表达，暗示高表达CCNB2 是促癌基因.TNM 分期是直接预示HCC 患者预后的关键因素，因此，对临床和病理资料分析，结果表明CCNB2 与年龄、T 分期以及病理分期显著相关.尤其是在T 分期和临床病理分期中，处于更晚期癌症阶段的患者倾向于表达更高水平的CCNB2.因此，接下来分析了高表达的CCNB2对于HCC患者OS、DDS、PFI的影响，显示CCNB2高表达的患者预后较差.鉴于CCNB2 在HCC中的重要作用，建立了ROC 曲线和时间预后模型，显示CCNB2 有很好区分正常组织和肿瘤的能力.CCNB2 表达越高，1年、3年、5年的生存可能性越低，这一结果证实了CCNB2 在诊断和预测生存概率上的价值，有望成为新的生物标记物.

虽然借助于数据库分析了CCNB2 对HCC预后和诊断中的价值，但目前的研究也存在一定的局限性.需要进一步通过人体标本和细胞株研究CCNB2 相关的信号通路，以及如何调节免疫功能.