贵港地区男女珠蛋白生成障碍性贫血基因型特点与血液学表型分析

李 腾，李 燕，郭 静，江梅平，谭超莉，黄家亮

贵港市妇幼保健院遗传实验室，广西贵港 537100

珠蛋白生成障碍性贫血(原名地中海贫血，简称地贫)是人类珠蛋白基因遗传缺陷所致的慢性溶血性贫血，是由于珠蛋白基因的缺陷或点突变使血红蛋白(Hb)中的珠蛋白肽链有一种或多种合成减少或不能合成，导致红细胞寿命缩短的遗传性溶血性贫血[1]。地贫是一组严重威胁人类健康的遗传性血液病，目前全世界尚缺乏有效的治疗方法，阻断患儿出生、减少遗传病患的数量成为当下最有效的预防措施。因此，研究地贫遗传特点和分布情况对开展有效的预防有重要作用。本研究收集广西贵港地区38 625例来本院行地贫基因检测的成年男女静脉全血标本，对贵港地区的常见地贫基因型分布情况和血液学特点进行分析。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年1月至2021年7月贵港地区38 625例来本院做地贫基因检测的成年男女作为研究对象，其中男18 684例，女19 941例。

1.2仪器与试剂 BC6800血液分析仪及配套试剂；法国希比亚Sebia 2毛细管电泳仪；厦门至善Lab-Aid 824核酸提取仪及配套试剂；美国ABI9700 PCR扩增仪；深圳益生堂生物有限公司缺失型α试剂；亚能生物技术有限公司非缺失型α、β试剂。

1.3方法

1.3.1血液常规检测及Hb电泳 取2 mL 乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉全血进行血常规及Hb电泳以检测各项指标。

1.3.2常见的地贫基因检测 取200 μL EDTA-K2抗凝静脉全血进行核酸提取，取提取后的DNA标本4 μL于缺失型和非缺失型试剂中，采用ABI7900扩增后，采用跨越断裂点的PCR(Gap-PCR)结合琼脂糖凝胶电泳检测4种常见的缺失性基因( --SEA、-α3.7、-α4.2、--THAI)；采用单管多重PCR-反向斑点杂交(PCR-RDB)检测3种α-地贫点突变基因(αCSα、αQSα、αWSα)和我国常见的17种β-地贫点突变基因(CD41-42、βE、IVS-Ⅱ-654、CD71-72、CD31、CD43、-32、CD27-28、-29、-30、CD14-15、IntM、IVS-Ⅰ-5、Cap、IVS-Ⅰ-1)检测。

2 结 果

2.1贵港地区α、β-地贫基因分布情况 贵港地区男女均以α-地贫基因为主，见表1。在α-地贫中，男女检出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、αCSα/αα，且均以 --SEA/αα为主，见表2。在β-地贫中，男女检出率最高的前4位基因型均是β41-42M/βN、β17M/βN、β28M/βN、β654M/βN，且均以β41-42M/βN为主，见表3。在αβ-复合型地贫中，男女检出率最高的前4位基因型均是 --SEA/αα合并β41-42M/βN、-α3.7/αα合并β41-42M/βN、 --SEA/αα合并β17M/βN、 --SEA/αα合并β28M/βN，且均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN为主，见表4。

表1 α、β-地贫基因检出率

表2 男女α-地贫前6位基因型分布情况

表3 男女β-地贫前6位基因型分布情况

表4 男女αβ-复合型地贫前四位基因型分布情况

2.2α、β-地贫男女Hb、MCV、MCH、HbA2对比分析 在α-地贫中，静止型和轻型男女的Hb、MCV、MCH差异有统计学意义(P<0.05)，静止型男女HbA2差异无统计学意义(P>0.05)，见表5、6。中间型和重型只有男女Hb的差异有统计学意义(P<0.05)，见表7、8。在β-地贫中，β0杂合和β+杂合只有Hb男女血液学表型的差异有统计学意义(P<0.05)，见表9、10。

表5 α静止型男女性血常规及电泳结果

表6 α轻型男女性血常规及电泳结果

表7 α中间型男女性血常规及电泳

表8 --SEA/αCSα重型男女性血常规及电泳结果

表9 β0杂合男女血常规及电泳结果

表10 β+杂合男女血常规及电泳结果

3 讨 论

通过地贫基因携带率分析，本研究发现贵港地区α-地贫的检出率(43.99%)远大于β-地贫检出率(19.27%)，与广西[2]、广东[3]地区α-地贫阳性率大于β-地贫阳性率一致，而与何建维等[4]报道的重庆地区β-地贫阳性率大于α-地贫阳性率不一致。

从α-地贫基因类型分析，广西贵港地区男女α-地贫基因类型主要为 --SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα，检出率分别为25.14%、6.94%、3.57%占据α-地贫的前3位，且以 --SEA/αα为主。这与重庆[5]、贵阳[6]、福建[7]地区的α-地贫基因构成相同，同时与广东[8]、广西[2]地区同样一致，但与莫亚虹等[9]报道海南地区育龄夫妇常见的α-地贫基因为-α3.7/αα、 --SEA/αα的结果不一致。这表明α-地贫基因存在地域性差异，但整体差异性不大。

从β-地贫基因类型分析，贵港地区男女β-地贫基因类型居前6位的分别为CD41-42(-TCTT)、CD17(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、βE，检出率分别为9.66%、3.92%、2.52%、1.24%、0.88%、0.50%，这与国内报道中国人最主要的6种β-地贫基因CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD17(A→T)、-28(A→G)、CD71-72(+A)、CD26(G→A)不完全一致，但均以CD41-42(-TCTT)为主。与重庆[5]、贵阳[6]地区的β-地贫基因突变类型以CD17(A→T)为主，CD41-42(-TCTT)次之，姚莉琴等[10]报道的云南地区婚检人群常见的β-地贫基因型为βE、CD17(A→T)、CD41-42(-TCTT)为主不同。与广东[11]、广西[12]β-地贫基因突变类型一致，均以CD41-42(-TCTT)为主，CD17(A→T)次之，这表明β-地贫基因存在地域性差异,但在广西、广东地区差别不大。男性检出率大于女性，一定程度上是因女性易受生育期[13]、月经期[14]等导致血常规异常的影响，从而使筛查上出现假阳性较多。

本研究通过比较分析α静止型、α轻型、α中间型、α重型、β0杂合、β+杂合的男女Hb、MCV、MCH、HbA2，发现除了α静止型、α轻型血液学表型Hb、MCV、MCH均存在较大差异外，其他几项差异基本均表现在Hb上，考虑主要与不同类型的地贫发生溶血时，Hb的分解产物刺激造血系统存在差异有关[15-16]。

综上所述，贵港地区成年男女性人群α-地贫均以--SEA/αα为主，β-地贫均以β41-42M/βN为主，αβ复合型均以 --SEA/αα合并β41-42M/βN为主，基因类型具有多样性，类型分布具有区域性差异，且男性检出率高于女性。α静止型、α轻型男女间的血液学表型差异有统计学意义(P<0.05)，而α中间型、α重型、β0杂合、β+杂合的血液学表型差异无统计学意义(P>0.05)。因此，针对贵港地区男女地贫基因检测制订不同的血液学表型筛查标准，能有效地提高检出率，减少资源浪费。