冬眠和非冬眠状态达乌尔黄鼠肾单位及相关功能因子的比较

张修静王恒钟秋梅杨晨希,2王建礼,2*

（1北方民族大学生物科学与工程学院，银川 750021）（2国家民委黄河流域农牧交错区生态保护重点实验室，银川 750021）

肾脏是哺乳动物的主要渗透调节和排泄器官，肾小球与血浆滤过功能有关，肾小管与水分的重吸收有关。肾脏结构及机能与动物的水代谢及栖息环境密切相关(张梦和王德华，2018；袁江玲等，2019;Talmatamaret al.,2020)。有关啮齿动物肾脏适应环境的研究较多，如对阿根廷平原鼠(Tympanoctomys barrerae)(Diaz and Ojeda,1999)、布氏田鼠(Lasiopodomys brandtii)、长爪沙鼠(Meriones unguiculatus)、黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)(张梦和王德华，2018)、子午沙鼠(Meriones meridianus)(袁江玲等，2019)、斯氏鼢鼠(Myospalax smithi)及棕色田鼠(Lasiopodomys mandarinus)(刘莹和王立志，2014)等的研究。肾脏形态指数和组织学指数可在一定程度上反映肾脏浓缩尿液的能力(张梦和王德华，2018)。例如研究适应典型干草原区的布氏田鼠和适应干旱荒漠草原的达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus)肾脏指数，发现前者肾脏浓缩尿液的能力比后者强，可能与冬眠使黄鼠逃避环境水荒的胁迫有关(刘志龙，1992)。在研究肾脏结构适应环境的同时，受全球气候变暖的影响，关于肾脏水代谢调节机理的研究也受到了关注(王德华等，2021)。

肾脏对水的重吸收受多种因素调节，其中水通道蛋白(aquaporins,AQP)和抗利尿激素(antidiuretic hormone,ADH)在调节水平衡中起着重要作用。肾脏是体内AQP含量最高的组织，其中AQP1、AQP2和AQP3在肾脏的表达水平较高，在肾脏尿液生成、重吸收及浓缩过程中有重要作用(侯天德等，2011；黄祖贤，2012)。ADH由下丘脑的室旁核(paraventricular nucleus,PVN)和视上核(supraoptic nucleus,SON)神经元合成，具有收缩血管和抗利尿的作用。ADH通过与V2型受体(V2R)结合介导AQP2以调控集合管和近端小管的重吸收和尿液的浓缩(Knepperet al.,2015)。干旱区生活的长爪沙鼠通过ADH依赖的AQP2上调，促进水分的重吸收(Xu and Wang,2016;Nouriet al.,2020)。一氧化氮(nitric oxide,NO)由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)催化产生。NO含量的变化主要取决于NOS的水平。其中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在肾脏中含量较高，肾脏内皮细胞中的eNOS催化产生的NO可抑制肾素分泌，还可抑制ADH促进肾集合管对水的重吸收作用(Garcíaet al.,1996)。

冬眠是动物应对低温、长期禁食和禁水等不利条件的一种生存策略。动物在冬眠期体温降低，代谢率减少，心率、呼吸频率大幅降低，肾脏血流量减少，尿的生成减少(Zancanaroet al.,1999;Janiet al.,2013)，在出眠期体温恢复至接近正常水平，器官代谢快速恢复，但无代谢损伤(Janiet al.,2013)。因此，冬眠动物已成为研究低温缺血和缺血再灌注条件下肾脏结构和功能适应的天然模型，并对水盐代谢障碍的研究具有重要意义。达乌尔黄鼠是一种典型的贮脂类冬眠动物，冬眠期长达5~6个月。目前已在冬眠模式、能量调节、生殖调节、骨骼肌适应及社会行为等方面开展了研究(杨明等，2011；党凯和高云芳，2016;Xinget al.,2016；王宇，2019；王恒等，2020)，但关于达乌尔黄鼠肾脏如何适应冬眠的研究较少。为此，本研究比较了冬眠状态(冬眠期)和非冬眠状态(活动期及出眠期)达乌尔黄鼠肾小管和肾小球的变化，血清肌酐、尿素和ADH的水平，并检测了水通道蛋白基因(AQP1、AQP2和AQP3)、V2R和eNOS基因的表达，以期了解动物从非冬眠状态到冬眠状态肾脏的水平衡调节机制。

1 研究方法

1.1 实验动物

达乌尔黄鼠捕于宁夏盐池县惠安堡，分为夏季活动期(7月上旬，6只)、冬眠期(12月下旬，6只)和早春出眠期(次年3月中旬，5只)，皆为成体。冬眠组于冬眠前捕获，在室内食物、饮水充足，使室内温度逐渐降为3℃~5℃，并且光照条件变为全黑，诱导其进入冬眠状态(Zancanaroet al.,1999;Sandoviciet al.,2004；孙 小 勇 等，2012)。

1.2 肾组织制片及参数测量

达乌尔黄鼠称重后用2 mL(20%)的乌来糖麻醉，迅速摘取肾脏，去除肾周组织，用生理盐水清洗干净后以吸水纸吸去表面液体，固定于Bouin氏液，经48 h固定后，采用常规石蜡切片，做矢状切，片厚8 μm，HE染色，经梯度酒精脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片。

每只黄鼠取3张接近最大面积切片，在Motic Panthera U显微镜下用Motic Images Plus 3.0显微成像系统测量和拍照。在65倍下，计数皮质部2~3个视野一定面积下肾小球数目，并计算肾小球密度(ind./mm2)；近曲小管管壁上皮细胞胞体较大，细胞分界不清，细胞游离面具有发达的刷状缘，故其管腔较小，形态不规则；远曲小管管径相较于近曲小管细，管腔相对较大且规则，细胞界限较清楚，核近腔侧。据此特点，测量并计算260倍下皮质浅层、中层及髓旁近曲小管相对管径[10×近曲小管管径/(肾小体长径+短径)/2]，皮质浅层、中层及髓旁远曲小管相对管径[10×远曲小管管径/(肾小体长径+短径)/2]，单位面积内皮质部近曲小管数/远曲小管数，以及近髓部近曲小管数/远曲小管数(袁江玲等，2019)。

1.3 血清肌酐、尿素和ADH浓度检测

达乌尔黄鼠麻醉后心脏取血，4℃静置1 h后，3 000 r/min离心15 min，吸取上清液放置在标记好的EP管中，-20°C冰箱保存。血清肌酐和尿素用全自动生化分析仪(迪瑞CS-1200-1)检测。ADH采用酶联免疫试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司)检测。

1.4 目的基因的表达

1.4.1 RNA的提取与反转录

将存于液氮中的达乌尔黄鼠肾脏按照RNA提取试剂盒[TaKaRa，宝生物工程(大连)有限公司]说明书提取总RNA。用1%琼脂糖电泳检测完整性，并用微量紫外分光光度计(Maestro NanoPr,MN-913A)检测总RNA浓度(R=OD260/OD280，比值在1.8~2.0之间)。按照反转录试剂盒[TaKa-Ra，宝生物工程(大连)有限公司]说明书对RNA进行反转录，合成cDNA。反转录条件为37℃，15 min，反转录酶失活反应条件为85℃，5 s，得到的cDNA用于qPCR检测。

1.4.2 引物设计及特异性检测

根据GenBank数据库中公布的北极黄鼠(Spermophilus parryii)、多纹黄鼠(Ictidomys tridecemlineatus)、黄腹旱獭(Marmota flaviventris)及阿尔卑斯旱獭(M.marmota)的相关序列，用Primer Premier 3.0和Oligo 7.0软 件，设 计AQP1、AQP2、AQP3、V2R、eNOS和β-actin基因的引物序列(表1)。引物在北京新时代众合科技有限公司合成。

表1 实验所用引物信息Table 1 Primers information used in the experiment

以肾脏cDNA为模板，PCR扩增反应体系为：cDNA模板2.5 μL，上下游引物各1.5 μL，2×M5 HiPer plus Taq HIFI PCR 25 μL，ddH2O 19.5 μL。反应程序：95℃，预变性3 min，PCR循环参数为94℃变性25 s，55℃退火25 s，72℃延伸10 s，共36个循环。PCR产物经2%琼脂糖电泳检测后用胶回收试剂盒将目的基因切胶纯化，送上海生物工程有限公司进行测序，根据NCBI中的Blast对获得的核酸序列结果进行比对确认。

1.4.3 目的基因的mRNA表达

用荧光定量梯度PCR仪(QT2.2，德国耶拿分析仪器股份有限公司)检测肾脏AQP1、AQP2、AQP3、V2R和eNOS基因的表达。基因扩增的特异性由熔解曲线保证。qPCR反应体系为25 μL：cDNA1 μL，上游引物1 μL(10 μm/L)，下游引物1 μL(10 μm/L)，TB Green Premix Ex TaqⅡ12.5 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR反应条件为：95℃预变性30 s，PCR循环参数为95℃，变性5 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，40个循环。5个目的基因mRNA的相对表达量用2-ΔΔCT方法计算。

1.5 数据统计分析

所有数据用SPSS 20.0处理，用单因素方差分析(One Way ANOVA)比较不同时期肾单位参数、目标基因表达及血清肌酐、尿素和ADH浓度的差异，并用Duncan法进行组间多重比较。数据用平均值±标准误(mean±SE)表示，P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 冬眠和非冬眠状态达乌尔黄鼠肾单位的形态学比较

光学显微镜下观察显示达乌尔黄鼠肾组织整体结构致密，髓放线明显，肾小囊腔隙较小。肾小体分布于皮质浅层、中部和近髓部。近曲小管管径不规则，远曲小管管腔较大且较规则(图1)。单因素方差分析表明，不同时期皮质浅层近曲小管相对管径(RDPS)(F2,14=19.266,P＜0.001)、皮质中层近曲小管相对管径(RDPM)(F2,14=34.061,P＜0.001)、髓旁近曲小管相对管径(RDPP)(F2,14=42.152,P＜0.001)、皮质浅层远曲小管相对管径(RDDS)(F2,14=100.955,P＜0.001)、皮质中层远曲小管相对管径(RDDM)(F2,14=106.727,P＜0.001)及髓旁远曲小管相对管径(RDDP)(F2,14=174.198,P＜0.001)均表现出显著差异，且均表现为活动期最高，冬眠期次之，出眠期最低(P＜0.05)。不同时期皮质部近曲小管数/远曲小管数(CPT/CDT)有显著差异(F2,14=4.229,P=0.037)，冬眠期显著低于活动期和出眠期(P＜0.05)，活动期和出眠期无显著差异(P＞0.05)。近髓质近曲小管数/远曲小管数(JPT/JDT)无组间差异(F2,14=3.075,P=0.078)。冬眠期和出眠期的肾小球密度(GD)显著低于活动期(F2,14=4.055,P=0.041)(表2)。

图1 活动期、冬眠期和出眠期达乌尔黄鼠肾脏的组织结构.a：肾脏矢状切面(标尺=1 000 μm)；b：肾脏皮质(标尺=100 μm)；c：肾脏髓质(标尺=100 μm)；d：夏季活动期肾小球；e：冬眠期肾小球；f：早春出眠期肾小球；g：夏季活动期皮质部肾小管；h：冬眠期皮质部肾小管；i：早春出眠期皮质部肾小管；GL：肾小球；DT：远曲小管；PT：近曲小管.标尺=20 μmFig.1 The renal histological structure of Daurian ground squirrels among the active,hibernating and arousal periods.a:Renal sagittal plane(Scale bar=1 000 μm);b:Renal cortex(Scale bar=100 μm);c:Renal medulla(Scale bar=100 μm);d:Glomerulus in summer active period;e:Glomerulus in winter hibernating period;f:Glomerulus in early spring arousal period;g:Cortical tubule in summer active period;h:Cortical tubule in winter hibernating period;i:Cortical tubule in early spring arousal period;GL:glomerulus;DT:distal convoluted tubule;PT:proximal convoluted tubule.Scale bar=20 μm

表2 活动期、冬眠期和出眠期达乌尔黄鼠肾单位的组织学参数(mean±SE)Table 2 The histological parameters of nephrons in Daurian ground squirrels among the active,hibernating and arousal periods(mean±SE)

2.2 冬眠和非冬眠状态达乌尔黄鼠血清肌酐、尿素和ADH浓度

达乌尔黄鼠血清肌酐(F2,14=8.101,P=0.005)、尿素(F2,14=5.154,P=0.021)和ADH(F2,14=28.024,P＜0.001)浓度具有季节差异。冬眠期血清肌酐和尿素浓度高于活动期和出眠期(P＜0.05)，活动期与出眠期无显著差异(P＞0.05)。冬眠期ADH浓度较出眠期和活动期明显降低(P＜0.05)，出眠期与活动期无显著差异(P＞0.05)(图2)。

图2 活动期、冬眠期和出眠期达乌尔黄鼠血清肌酐、尿素和ADH浓度.图柱上不同字母代表显著性差异，P＜0.05Fig.2 The concentrations of serum creatinine,urine and ADH of Daurian ground squirrels among the active,hibernating and arousal periods.Different letters on the columns indicate significant differences,P＜0.05

2.3 冬眠和非冬眠状态达乌尔黄鼠肾脏AQP1、AQP2、AQP3、V2R和eNOS基因表达

方差分析结果表明，达乌尔黄鼠AQP1(F2,14=4.826,P=0.025)和AQP3(F2,14=28.103,P＜0.001)基因的表达具有季节效应。活动期和冬眠期AQP1基因的表达高于出眠期(P＜0.05)；活动期AQP3基因的表达显著高于冬眠期和出眠期(P＜0.05)，冬眠期与出眠期无显著差异(P＞0.05)。AQP2基因表达无显著差异(F2,14=2.650,P=0.106)，但与活动期相比，冬眠期和出眠期AQP2表达有降低的趋向；V2R基因表达有显著差异(F2,14=4.114,P=0.039)，活动期高于冬眠期(P＜0.05)，且出眠期与冬眠期相比有升高趋向。eNOS基因表达有显著差异(F2,14=4.004,P=0.042)，出眠期显著高于冬眠期与活动期(P＜0.05)(图3)。

图3 活动期、冬眠期和出眠期达乌尔黄鼠肾脏AQP1、AQP2、AQP3、V2R和eNOS基因的表达.柱上不同字母代表显著性差异，P＜0.05Fig.3 The renal gene expression of AQP1,AQP2,AQP3,V2R and eNOS in Duarian ground squirrels among the active,hibernating and arousal periods.Different letters on the columns indicate significant differences,P＜0.05

3 讨论

3.1 肾单位对冬眠状态的响应

肾脏的基本功能单位是肾单位。肾单位由肾小体及与之相连的肾小管构成，肾小体由肾小球和肾小囊组成。血液在肾脏皮质部的肾小体中滤过形成原尿，之后流经皮质和髓质的各级肾小管，经过重吸收和分泌作用，最后以终尿的形式排出。显微观察表明冬眠期达乌尔黄鼠的肾皮质、髓质、肾小体及肾小管结构与其他时期一样，完整且正常。对榛睡鼠(Muscardinus avellanarius)研究发现肾皮质的超微结构在冬眠期保存完好，肾小管结构正常，仅肾小球足细胞和内皮细胞有轻微损伤(Zancanaroet al.,1999)。本研究中，冬眠期和出眠期达乌尔黄鼠的肾小球密度与活动期相比下降。在对中国林蛙(Rana chensinensis)的研究中也发现了类似现象，冬眠期肾小体密度最小，随后逐渐上升，夏季达到最高，随后呈下降趋势(贾迪，2011)。对小鼠和小亚细亚沙鼠(Meriones shawi)研究表明，肾脏表型会响应环境的变化(Hammond and Janes,1998;Elgotet al.,2018)。不同于冬眠，对干旱地区生活的小亚细亚沙鼠在室内进行水剥夺研究发现，其肾脏有增生现象，被认为是肾脏节水的一种补偿(Elgotet al.,2018)。有研究表明冬眠时肾小球滤过要么完全停止如黄鼠和睡鼠(Careyet al.,2003)，要么大幅减少如美洲黑熊(Ursus americanus)(Brownet al.,1971)。肾单位的滤过能力与肾小体或肾小球密度有关，因此，相对少的肾小球数量暗示肾脏对血液的滤过率减弱，肾小球功能降低。此外，本研究发现冬眠期皮质部和髓旁近曲小管相对管径和远曲小管相对管径更窄，而且单位面积内皮质部近曲小管数与远曲小管数之比更少。近曲小管截面数更少说明其较短(袁江玲等，2019)。近曲小管和远曲小管具有重吸收水分的功能，较窄或较短的肾小管可能与冬眠期流经肾小管的原尿及尿输出的减少有关。进入冬眠期的动物为适应环境，在机体及器官机能状态上出现的某些变化，均与其形态学改变相适应(郝泗城等，1994)。不同时期达乌尔黄鼠肾小球密度和肾小管相对管径的变化可能是对滤过、水分重吸收及尿量生成的一种调节。

3.2 肾脏功能因子对冬眠状态的响应

通过测量血清肌酐可以间接反映肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)，升高的血清肌酐能够反映GFR下降(Janiet al.,2013)。本研究发现，冬眠期达乌尔黄鼠血清肌酐明显升高，间接表明冬眠降低了GFR，GFR减少有利于水分保存，代表其生理上对环境的一种适应。对榛睡鼠(Zancanaroet al.,1999)、欧洲黄鼠(Spermophilus citellus)(Sandoviciet al.,2004)、多纹黄鼠(Janiet al.,2011)和北极黄鼠(Riceet al.,2020)的研究也发现冬眠期血清肌酐增加，GFR减少。GFR的减少主要在于肾血液流量的减少(Janiet al.,2013)，例如，与活动期相比，黑熊在冬眠期肾脏血液流量减少约36%，GFR减少约68%(Brownet al.,1971)，尿量减少95%(Riceet al.,2020)。一些研究发现冬眠动物的肾脏有效肾血浆流量(effective renal plasma flow,ERPF)在正常值的5%~10%以下(Sandoviciet al.,2004)。此外，本研究发现冬眠期达乌尔黄鼠血清尿素浓度较高。尿素是蛋白质的代谢产物，在肝脏合成，随血液循环到达肾脏后被肾小球滤过清除，尿素含量除了可以反映肾功能，还在尿液浓缩过程中起重要作用。研究发现，冬眠期(1月)榛睡鼠的血浆尿素氮较活动期(6月)高(Zancanaroet al.,1999)。大鼠血清中尿素氮的浓度随着禁水时间的延长显著升高，尿素的上升除受机体缺水的影响，也可能与摄食量减少和蛋白质代谢增加有关(侯天德等，2011)。冬眠期的达乌尔黄鼠禁食和禁水时间较长，致使血液中积累了较高水平的尿素。血清肌酐和尿素作为肾功能的常规指标，其水平可以表示肾脏功能情况。与非冬眠状态相比，冬眠的达乌尔黄鼠具有较低的肾功能。与此结果相似，冬眠的美洲黑熊历经数月的低肾功能和低代谢率，但没表现出代谢损伤效应(Srivastavaet al.,2019)。正如Andrews指出，冬眠是动物组织器官应对极端条件的一系列生理代谢性适应，这些适应可能会导致其偏离大多数动物正常情况下的生理稳态(Andrews,2019)。最近研究发现，冬眠期独特的氮循环代谢途径可提供必需和非必需氨基酸以合成蛋白质并抑制氨的毒性(Riceet al.,2020)。

AQP是一组特异性转运水的蛋白质家族，帮助水分子快速通过细胞膜，参与水的分泌、吸收及细胞内外渗透压平衡。对双峰驼(Camelus bactrianus)、子午沙鼠和牦牛(Bos grunniens)的免疫组织化学研究发现，AQP1蛋白在肾脏皮质和髓质部位有大量表达，是肾脏近曲小管、髓袢与集合管水分重吸收的重要蛋白(黄祖贤，2012；张春燕等，2014；李娟等，2021)，高渗透压可诱导其表达水平上升(黄祖贤，2012)。本研究发现，不同时期3种AQP基因的表达并不同步。冬眠期AQP1和AQP2基因表达与活动期无显著差异，暗示冬眠期对水重吸收能力的维持。水分摄入的减少会引起血浆钠和渗透压的增加，冬眠期动物具有较高的血浆钠离子浓度和渗透压(Janiet al.,2013)，这可能维持了达乌尔黄鼠AQP1和AQP2基因的较高表达。干旱地区生活的达尔文叶耳鼠(Phyllotis darwini)、长爪沙鼠和小亚细亚沙鼠在经历不同时长的水剥夺后，与正常饮水组相比，肾皮质的AQP2免疫活性蛋白上调(Gallardoet al.,2005;Xu and Wang,2016;Elgotet al.,2018)。该结果与本研究结果不同，暗示了活动状态下水剥夺后动物的保水机制可能与冬眠状态的保水机制有差异。有研究认为活动状态下的水剥夺会迫使动物改变代谢策略，诱导动物增加食欲，促进代谢水的生成(Takeiet al.,2012)。出眠期由于水分的再次摄入，渗透压恢复可能引起AQP1基因表达的暂时性降低，AQP2基因的表达也有降低的趋向。活动期AQP3基因的表达显著高于冬眠期和出眠期，暗示其在夏季水分转运中具有重要作用。这可能与AQP3属于水—甘油通道蛋白有关，其不仅允许水分子通过，还允许一些中性溶质，比如甘油、二氧化碳及尿素等通过(Ishibashiet al.,2011；刘永辉等，2020)。

ADH作用于肾脏远曲小管和集合管，促进对水分的重吸收，使尿液浓缩。血浆ADH升高，与肾脏远曲小管和集合管上的受体V2R特异结合，可促进AQP2蛋白的表达，增加水的重吸收(Knepperet al.,2015；张广霞等，2016)。本研究发现冬眠期达乌尔黄鼠血清ADH浓度和肾脏V2R基因表达较活动期降低，出眠期有恢复升高的趋向，可能与冬眠期禁水、排尿减少有关。由于ADH还具有使血压升高的功能，因此，血压降低也可能是冬眠期ADH下降的一个原因。对多纹黄鼠的研究也发现了类似结果，与活动状态相比，冬眠状态的多纹黄鼠血浆ADH减少，苏醒后又恢复到正常水平。这与冬眠期肾功能降低一致，此时GFR最小，ADH的作用被认为不是必要的。苏醒后血压和肾功能恢复到活动水平，且产生和分泌尿液，此时需要ADH的抗利尿作用(Fenget al.,2019)。研究发现小亚细亚沙鼠经历长时间的水剥夺后PVN和SON的ADH蛋白表达增加(Elgotet al.,2018)，这些发现再次暗示了动物在活动状态下水剥夺的水平衡调节机制可能与冬眠时的调节机制不同。

肾脏中eNOS产生的NO是关键的血管舒张因子和保护因子。免疫组织化学研究表明，与活动期相比，冬眠期和出眠期欧洲黄鼠肾小球的eNOS蛋白表达显著减少，但组织间隙的eNOS蛋白表达无显著变化，后者暗示了管周血量供应的维持(Sandoviciet al.,2004)。本研究发现，达乌尔黄鼠冬眠期和活动期肾组织的eNOS基因表达无显著变化，但出眠期eNOS基因表达明显升高，暗示出眠期肾血流的恢复性供应可能影响了eNOS蛋白的合成。动物在冬眠期会通过自身的调节和内源性产热机制周期性地觉醒，返回到常温状态，整个睡眠被若干次短暂的阵间觉醒分隔(杨明等，2011)。如达乌尔黄鼠每次阵间觉醒时长平均为1.36 d(孙小勇等，2012)，北极黄鼠阵间觉醒时长为12~24 h(Karpovichet al.,2009)。阵间觉醒期间肾脏ERPF、GFR及尿的生成会快速而短暂地恢复(Sandoviciet al.,2004;Janiet al.,2013;Riceet al.,2020)。因此，不能排除阵间觉醒对上述基因表达的影响。

综上所述，本研究中肾单位、血清肌酐和尿

素的变化暗示达乌尔黄鼠在冬眠状态下具有较低的肾功能。达乌尔黄鼠活动期、冬眠期和出眠期肾脏AQP1、AQP3及V2R基因表达的差异暗示其在水平衡调节方面对冬眠与非冬眠状态的生理性适应。这些可塑性反应与动物活动期、冬眠期及出眠后肾血流量、肾灌注压及尿生成的周期性变化有关。本研究结果增进了对动物肾脏适应冬眠这一特殊习性的认识。研究发现美洲黑熊冬眠(晚秋)与出眠(早春)相比，肾脏中有169个编码的基因有差异性表达，其中101个基因下调，68个基因上调(Srivastavaet al.,2019)。因此，动物肾脏对冬眠的生理性适应，涉及到多种基因表达的变化，可能需要多种调节因子的整合，关于这一问题还需进一步研究。