毛大丁草化学成分的研究(Ⅱ)

黄鸿运， 吴莹莹， 马 雪， 杨 畅， 巩仔鹏， 刘春花， 李勇军*

(1.贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学药学院，贵州 贵阳 550004；3.贵州医科大学，贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004)

毛大丁草Gerberapiloselloides(Linn.) Cass.为菊科大丁草属多年生被毛草本植物，主要分布于云南、四川、贵州等地区，用于治疗感冒发热、止咳祛痰、痢疾、小儿食积、尿路结石等疾病[1]，收录于2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》[2]，主要含香豆素类、萜类、糖苷类、甾醇类等化合物[3]，具有止咳、平喘、化痰、抗肿瘤等药理作用[4-6]，常与其他中药配伍成复方制剂，如醒脾养儿颗粒[7]。为了更好地开发利用毛大丁草，阐明药效物质基础，为醒脾养儿颗粒质量提升奠定基础，本实验在前期报道的基础上[8]对该植物化学成分作进一步研究，以期为其相关后续开发提供参考。

1 材料

BSM 220.4电子天平(上海卓精电子科技有限公司)；ZF7三用紫外分析仪(巩义市予华仪器有限责任公司)；JEOL-ECS 400 MHz核磁共振波谱仪(日本电子株式会社)；UHPLC-QTOF质谱仪(美国Agilent公司)；Q Exactive Plus LC-MS(美国赛默飞公司) BUCHIR-200旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；D-101型大孔树脂(天津市海光化工有限公司)；柱层析硅胶及薄层层析硅胶板(青岛海洋化工有限公司)；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(瑞士Pharmacia Biotech公司)。所用试剂均为分析纯。

毛大丁草由贵州健兴药业有限公司提供，经贵州医科大学生药学教研室刘春花副教授鉴定为菊科大丁草属植物毛大丁草Gerberapiloselloides(Linn.) Cass.的干燥全草，标本(编号20191230)保存于贵州省药物制剂重点实验室。

2 提取与分离

取干燥的毛大丁草全草10 kg，70%乙醇加热回流提取3次，每次2.5 h，合并后减压浓缩，得浸膏1 099 g，加适量水混悬后过D-101大孔树脂，依次以2.5倍柱体积水、8倍柱体积85%乙醇洗脱，减压浓缩，得水部位548 g、85%乙醇部位341 g。

85%乙醇部位以二氯甲烷-甲醇(100∶0～1∶1)梯度洗脱，得到9个流分Fr.1～9。Fr.2经硅胶，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～1∶1)梯度洗脱，得到9个流分Fr.2.1～2.9，Fr.2.5经硅胶，石油醚-乙酸乙酯(9.5∶0.5～8∶2)梯度洗脱，得化合物1(43 mg)，Fr.4经Sephadex LH-20，得7个流分Fr.4.1～4.7，Fr.4.4经Toyopearl HW-40C凝胶，得Fr.4.4.1, 经硅胶、Toyopearl HW-40F，得化合物2(3 mg)；Fr.4.7经Toyopearl HW-40F、硅胶、Sephadex LH-20，得化合物3(69 mg)。Fr.3经Sephadex LH-20，得到4个流分Fr.3.1～3.4，Fr.3.2经凝胶、硅胶，得化合物12(10 mg)、14(40 mg)。Fr.6经Sephadex LH-20，得到5个流分Fr.6.1～6.5，Fr.6.1析出黄色粉末，得化合物4(425 mg)；Fr.6.2经凝胶、硅胶，得化合物5(6 mg)。Fr.7经Sephadex LH-20，得到5个流分Fr.7.1～7.5，Fr.7.1经凝胶、MCI，得化合物6(85 mg)、7(15 mg)、8(142 mg)。Fr.8经Sephadex LH-20，得到6个流分Fr.8.1～8.6，Fr.8.2经Toyopearl HW-40C，得到4个流分Fr.8.2.1～8.2.4，Fr.8.2中析出黄色沉淀，洗去杂质，得化合物9(500 mg)；Fr.8.2.2经硅胶，乙酸乙酯-甲醇(22∶1)洗脱，得化合物10(47 mg)，Fr.8.2.3经硅胶，二氯甲烷-甲醇(20∶1)洗脱，经凝胶，得化合物11(46 mg)、13(66 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色固体, ESI-MSm/z: 455[M-H]-, 分子式C30H48O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.26 (1H, t,J=4.0 Hz, H-12), 3.25(1H, dd,J=4.0, 12.0 Hz, H-3), 3.03(1H, t,J=4.0 Hz, H-18), 0.75, 0.77, 0.79, 0.90, 0.91, 0.92, 0.99, 1.13(1H, s, 7×CH3);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.5 (C-1), 27.3 (C-2), 79.2 (C-3), 38.9 (C-4), 55.3 (C-5), 18.2 (C-6), 32.6 (C-7), 39.4 (C-8), 47.8 (C-9), 37.2 (C-10), 23.0 (C-11), 122.8 (C-12), 143.7 (C-13), 41.7 (C-14), 27.8 (C-15), 23.5 (C-16), 46.7 (C-17), 41.1 (C-18), 46.0 (C-19), 30.8 (C-20), 33.9 (C-21), 32.7 (C-22), 28.2 (C-23), 15.7 (C-24), 15.5 (C-25), 17.3 (C-26), 26.1 (C-27), 183.6 (C-28), 33.0 (C-29), 23.7 (C-30)。与文献[9]报道一致，故鉴定为齐墩果酸。

化合物2：黄色固体, ESI-MSm/z: 227[M-H]-, 分子式C13H8O4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.51 (2H, d,J=8.8 Hz, H-4, 5), 7.44 (2H, d,J=3.2 Hz, H-1, 8), 7.30 (2H, dd,J=9.2, 3.2 Hz, H-3, 6);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 108.3 (C-1, 8), 153.7 (C-2, 7), 124.5 (C-3, 6), 119.4 (C-4, 5), 149.3 (C-4a, 10a), 121.0 (C-8a, 9a), 175.8 (C=O)。与文献[10]报道一致，故鉴定为2,7-二羟基呫吨酮。

化合物3：黄色粉末, ESI-MSm/z: 579[M-H]+, 分子式C28H36O13。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 6.66 (2H, s, H-2′, 6′), 6.60 (2H, s, H-2″, 6″), 5.03 (1H, d,J=3.6 Hz, H-1‴), 3.76 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.75 (6H, s, 3″, 5″-OCH3);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 53.8 (C-1), 85.5 (C-2), 71.3 (C-4), 53.7 (C-5), 85.2 (C-6), 71.3 (C-8), 131.4 (C-1′), 147.9 (C-3′), 103.6 (C-2′, 6′), 134.8 (C-4′), 133.6 (C-1″), 104.2 (C-2″, 6″), 137.3 (C-4″), 152.7 (C-5″), 102.7 (C-1‴), 74.2 (C-2‴), 76.6 (C-3‴), 70.0 (C-4‴), 77.3 (C-5‴), 61.0 (C-6‴), 56.5 (3′, 5′-OCH3), 56.0 (3″, 5″-OCH3)。与文献[11]报道一致，故鉴定为丁香树脂醇-4″-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：黄色粉末, ESI-MSm/z: 431[M-H]-, 分子式C21H20O10。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.96 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.89 (1H, s, H-3), 6.83 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.44 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.07 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 3.17～3.73 (6H, m, H-2″～6″);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 164.3 (C-2), 103.1 (C-3), 182.1 (C-4), 161.4 (C-5), 99.5 (C-6), 163.0 (C-7), 94.9 (C-8), 157.0 (C-9), 105.4 (C-10), 121.1 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 99.9 (C-1″), 73.1 (C-2″), 76.5 (C-3″), 69.5 (C-4″), 77.2 (C-5″), 60.6 (C-6″)。与文献[12]报道一致，故鉴定为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色粉末, ESI-MSm/z: 732[M+H]+, 分子式C40H77NO10。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.47 (1H, d,J=9.2 Hz, N-H), 4.12 (1H, m, H-1″), 4.12 (1H, m, H-2), 3.87 (1H, m, H-2′), 3.79 (1H, m, 1-Hb), 3.68 (1H, m, 6″-Hb), 3.66 (1H, m, 1-Ha), 3.48 (1H, m, 6″-Ha), 3.39 (1H, m, H-3), 3.36 (1H, m, H-4), 1.24 (s, CH2), 0.87 (6H, t,J= 6.8 Hz, 2×CH3);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 69.0 (C-1), 49.9 (C-2), 74.1 (C-3), 70.5 (C-4), 130.3 (C-8), 129.7 (C-9), 173.8 (C-1′), 70.9 (C-2′), 103.5 (C-1″), 73.5 (C-2″), 76.5 (C-3″), 70.0 (C-4″), 76.9 (C-5″), 61.1 (C-6″), 13.9 (CH3), 34.4, 32.3, 32.1, 31.7, 31.3, 29.1, 29.1, 28.9, 28.7, 28.6, 25.5, 24.4, 22.1 (CH2)。与文献[13]报道一致，故鉴定为1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基棕榈酰胺]-8-十八烯-1,3,4-三醇。

化合物6：黄色粉末, ESI-MSm/z: 447[M-H]-, 分子式C21H20O11。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.44 (1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-6′), 7.42 (1H, d,J=1.6 Hz, H-2′), 6.91 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.78 (1H, d,J=2 Hz, H-8), 6.72 (1H, s, H-3), 6.45 (1H, d,J=2 Hz, H-6), 5.07 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 3.18～3.74 (6H, m, H-2″～6″);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 164.4 (C-2), 103.1 (C-3), 181.8 (C-4), 161.1 (C-5), 99.5 (C-6), 162.9 (C-7), 94.7 (C-8), 156.9 (C-9), 105.3 (C-10), 121.4 (C-1′), 113.5 (C-2′), 145.7 (C-3′), 149.8 (C-4′), 115.9 (C-5′), 119.0 (C-6′), 99.9 (C-1″), 73.1 (C-2″), 76.4 (C-3″), 69.6 (C-4″), 77.1 (C-5″), 60.6 (C-6″)。与文献[14]报道一致，故鉴定为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7：黄色粉末, ESI-MSm/z: 375[M-H]-, 分子式C17H20N4O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 11.20 (1H, s, H-3), 7.91 (1H, s, H-9), 7.88 (1H, s, H-6), 2.49 (3H, s, H-7a), 2.41 (3H, s, H-8a);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 155.2 (C-2), 159.6 (C-4), 130.5 (C-6), 135.5 (C-7), 145.7 (C-8), 117.2 (C-9), 47.4 (C-1′), 68.9 (C-2′), 73.6 (C-3′), 72.6 (C-4′), 63.3 (C-5′), 136.6 (C-4a), 133.9 (C-5a), 18.5 (C-7a), 20.5 (C-8a), 131.9 (C-9a), 150.7 (C-10a)。与文献[15]报道一致，故鉴定为核黄素。

化合物8：黄色粉末, ESI-MSm/z: 593[M-H]-, 分子式C27H30O15。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.42 (2H, m, H-2′, 6′), 6.91 (1H,m, H-5′), 6.73 (1H, s, H-3), 6.70 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.46 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.06 (1H, d,J=6.0 Hz, H-1″), 4.55 (1H, d,J=3.6 Hz, H-1‴), 1.08 (3H, d,J=6.0 Hz, H-6‴);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 164.5 (C-2), 103.1 (C-3), 181.7 (C-4), 161.1 (C-5), 100.1 (C-6), 162.8 (C-7), 94.7 (C-8), 156.8 (C-9), 105.3 (C-10), 121.4 (C-1′), 113.5 (C-2′), 145.6 (C-3′), 149.8 (C-4′), 116.0 (C-5′), 119.1 (C-6′), 100.4 (C-1″), 72.0 (C-2″), 75.6 (C-3″), 70.7 (C-4″), 76.2 (C-5″), 66.0 (C-6″), 99.5 (C-1‴), 69.6 (C-2‴), 70.2 (C-3‴), 73.1 (C-4‴), 68.2 (C-5‴), 17.6 (C-6‴)。与文献[16]报道一致，故鉴定为木犀草素-7-O-β-D-芦丁糖苷。

化合物9：黄色粉末, ESI-MS m/z: 541[M-H]-, 分子式C24H30O14。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.00 (2H, d,J=9.2 Hz, H-3′, 5′), 6.84 (2H, d,J=9.2 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (1H, d,J=8.8 Hz, H-6), 6.70 (1H, dd,J=8.8, 3.2 Hz, H-5), 6.53 (1H, d,J=2.8 Hz, H-3), 4.76 (1H, d,J=7.6 Hz, H-1‴), 4.64 (1H, d,J=8 Hz, H-1″), 3.11～3.67 (10H, m, H-2″～6″, H-2‴～6‴);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 143.6 (C-1), 144.0 (C-2), 109.4 (C-3), 150.5 (C-4), 112.1 (C-5), 117.0 (C-6), 151.8 (C-1′), 118.2 (C-2′, 6′), 117.5 (C-3′, 5′), 153.0 (C-4′), 101.5 (C-1″), 73.3 (C-2″, C-2‴), 76.6 (C-3″), 69.7 (C-4″, C-4‴), 77.1 (C-5″), 60.7 (C-6″, C-6‴), 101.2 (C-1‴), 76.5 (C-3‴), 77.0 (C-5‴)。与文献[17]报道一致，故鉴定为4-(4-O-β-glucopyranosyl-phenoxy)-1-O-β-glucopyranosyl-1,3-benzenediol。

化合物10：白色粉末, ESI-MSm/z: 295[M+Na]+, 分子式C12H16O7。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 6.97 (2H, d,J=9.2 Hz, H-3, 5), 6.70 (2H, d,J=9.2 Hz, H-2, 6), 4.74 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1′), 3.37-3.90 (6H, m, H-2′～6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 152.5 (C-1), 116.7 (C-2, 6), 119.5 (C-3, 5), 153.9 (C-4), 103.7 (C-1′), 75.1 (C-2′), 78.1 (C-3′), 71.5 (C-4′), 78.1 (C-5′), 62.6 (C-6′)。与文献[18]报道一致，故鉴定为熊果苷。

化合物11：淡黄色粉末, ESI-MSm/z:577[M-H]-, 分子式C27H30O14。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.95 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.95 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.77 (1H, d,J=2 Hz, H-8), 6.45 (1H, d,J=2 Hz, H-6), 5.07 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 4.55 (1H, s, H-1‴), 1.07 (3H, d,J=6.4 Hz, H-6‴);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 164.4 (C-2), 103.2 (C-3), 182.1 (C-4), 162.9 (C-5), 99.5 (C-6), 161.3 (C-7), 94.8 (C-8), 157.0 (C-9), 105.4 (C-10), 121.1 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 116.1 (C-3′, 5′), 160.9 (C-4′), 100.6 (C-1″), 72.1 (C-2″), 75.6 (C-3″), 70.6 (C-4″), 76.2 (C-5″), 66.1 (C-6″), 99.9 (C-1‴), 69.6 (C-2‴), 70.4 (C-3‴), 73.1 (C-4‴), 68.4 (C-5‴), 17.9 (C-6‴)。与文献[19]报道一致，故鉴定为芹菜素-7-O-β-D-芦丁糖苷。

化合物12：黄色粉末, ESI-MSm/z: 489[M-H]-, 分子式C28H42O7。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42 (1H, s, H-2′), 5.25 (1H, brs, H-6), 4.42 (1H, d,J=8.4 Hz, H-12), 3.32 (1H, m, H-3), 2.08 (3H, s, H-21), 2.02 (3H, s, H-7′), 1.34 (3H, s, H-18), 1.03 (3H, s, H-17), 0.97 (6H, d,J=6.8 Hz H-5′, 6′);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.7 (C-1), 30.6 (C-2), 71.5 (C-3), 41.8 (C-4), 140.4 (C-5), 117.8 (C-6), 34.1 (C-7), 74.2 (C-8), 43.6 (C-9), 36.9 (C-10), 24.2 (C-11), 71.7 (C-12), 57.7 (C-13), 88.3 (C-14), 33.0 (C-15), 32.0 (C-16), 91.7 (C-17), 9.6 (C-18), 18.5 (C-19), 209.4 (C-20), 27.2 (C-21), 166.9 (C-22), 112.9 (C-23), 166.0 (C-24), 16.6 (C-25), 38.2 (C-26), 20.9 (C-27), 21.0 (C-28)。与文献[20]报道一致，故鉴定为告达亭。

化合物13：白色粉末, ESI-MS m/z: 541[M-H]-, 分子式C24H30O14。1H-NMR (400 MHz, D2O)δ: 5.04 (1H, d,J=7.4 Hz, H-1), 5.58 (1H, m, H-2), 3.61 (1H, m, H-3), 3.56 (1H, m, H-4), 3.51 (1H, m, H-5), 3.77 (1H, dd,J=12.5, 5.3 Hz, H-6), 3.94 (1H, dd,J=12.5, 2.1 Hz, H-6), 7.06 (1H, d,J=3.0 Hz, H-2′), 7.00 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5′), 7.12 (1H, dd,J=8.8, 3.0 Hz, H-6′);13C-NMR (100 MHz, D2O)δ: 102.3 (C-1), 74.1 (C-2), 77.1 (C-3), 70.5 (C-4), 76.6 (C-5), 61.6 (C-6), 151.4(C-1′), 120.8 (C-2′), 126.9 (C-3′), 149.8 (C-4′), 117.9 (C-5′), 119.2(C-6′)。与文献[21]报道一致，故鉴定为di(β-arb)。

化合物14：无色针晶, ESI-MSm/z: 247[M+H]+,分子式C14H14O4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.60 (1H, d,J=9.2 Hz, H-4), 6.76 (1H, s, H-5), 6.17 (1H, d,J=9.2 Hz, H-3), 5.23 (1H, t,J=7.2 Hz, H-2′), 3.33 (2H, d,J=7.2 Hz, H-1′), 1.74 (3H, s, H-4′), 1.69 (3H, s, H-5′);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 162.0 (C-2), 111.9 (C-3), 145.4 (C-4), 119.0 (C-5), 125.7 (C-6), 146.7 (C-7), 130.4 (C-8), 141.4 (C-9), 112.1 (C-10), 28.0 (C-1′), 121.4 (C-2′), 134.0 (C-3′), 26.0 (C-4′), 18.0 (C-5′)。与文献[22]报道一致，故鉴定为fipsomin。

4 结论

本实验从毛大丁草中分离鉴定出14个化合物，其中化合物1～3、5、8～9、12～14为首次从大丁草属作为中分离得到。前期报道，化合物1具有保肝、抗糖尿病、白血病和皮肤病等作用[23-25]；化合物6是天然黄酮，具有抗炎、抗病毒、解热、增强毛细管舒张、降低胆固醇等作用[26-27]；化合物10能抑制黑色素的生成，加速黑色素分解，并可抗氧化、抗癌[28-30]，在化妆品、医药市场具有较大应用前景。上述结果丰富了毛大丁草化学成分库，为研究该植物药效物质基础奠定了基础。