APP下载

液相色谱-串联质谱法测定草鱼中4种硝基呋喃类代谢物残留量

2022-12-14谢冬霞

现代食品 2022年22期
关键词:呋喃质谱法硝基

◎ 谢冬霞

(深圳三方圆检测监管服务有限公司,广东 深圳 518110)

硝基呋喃类药物作为一种广谱抗生素,以其价格低廉效果好,且不容易产生抗药性的优势在畜禽和水产养殖业中应用广泛[1]。然而,有研究表明,硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有潜在的致畸、致癌、致突变危害,世界上许多国家禁止在食源性动物饲养中使用该类药物,我国农业农村部发布的第250号公告也禁止其在食品动物中使用[2]。硝基呋喃类药物半衰期短,在动物和人体内新陈代谢较快,但该类药物的代谢物在生物体内能以蛋白结合物的形式长期存在,因此通常通过检测其代谢物含量来反映该类药物的残留情况[3-4]。目前,硝基呋喃类代谢物的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等,其中液相色谱-串联质谱法以其选择性高、灵敏度高、重现性好的优势,成为水产品中该类药物代谢物的常用检测方法[5]。本研究基于《食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法》(GB 31656.13—2021)[6],结合实验室设备条件和检测需求,建立了液相色谱-串联质谱法测定草鱼中3-氨基-2-噁唑烷基酮(3-Amino-2-oxazolidinone,AOZ)、5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮(5-morpholinomethy-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)、1-氨基-2-内酰脲(1-aminohydantoin,AHD)、氨基脲(Semicarbazide,SEM)等4种硝基呋喃类代谢物残留量的分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

试验样品:草鱼(购于某农贸市场)。

试剂:4种硝基呋喃代谢物混标(编号80759GA,浓度为100 μg·mL-1)、4种硝基呋喃代谢物同位素混标(编号80760GA,浓度为100 μg·mL-1),均由坛墨质检标准物质中心提供;甲醇(色谱纯,德国默克公司);乙酸铵(色谱纯,北京迪马科技有限公司);乙酸乙酯(色谱纯,德国默克公司);二甲亚砜(色谱纯,天津拉斯维特化工贸易有限公司);2-硝基苯甲醛(色谱纯,北京迪马科技有限公司);无水磷酸氢二钾(分析纯,北京中驰锐精细化工有限公司);盐酸(优级纯,北京化工试剂厂)。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260-6460高效液相色谱质谱联用仪(美国安捷伦公司);HZ-104/35S分析天平(福州华志科学仪器);KQ2200DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HSC-B水浴氮吹仪(天津市恒奥科技发展有限公司);HY-4A数显调速振荡器(上海精密仪器仪表有限公司);DDL5大容量冷冻离心机(长沙英泰仪器有限公司);VORTEX MS3涡旋混合仪(德国艾卡公司)。

1.3 试验方法

1.3.1 样品前处理

称取2.00 g试样于50 mL离心管中,准确加入50 μL混合内标工作液,涡旋1 min,加入5 mL 0.5 mol·L-1盐酸溶液,0.15 mL 0.05 mol·L-1的2-硝基苯甲醛溶液,涡旋1 min,于恒温振荡器中避光振荡16 h。

在振荡后的样液中加入1.0 mol·L-1的磷酸氢二钾溶液调节pH为7.0~7.5,加入8 mL乙酸乙酯,涡旋30 s,于6 000 r·min-1离心机中离心5 min,取上清液至10 mL离心管中,于40 ℃下的氮吹仪中吹干,加入1.0 mL 5%甲醇溶液溶解残留物,再将溶液转移至1.5 mL离心管中,于14 000 r·min-1离心机中离心10 min,取上清液过0.22 μm滤膜后上机分析。

1.3.2 标准系列溶液配制

4种硝基呋喃代谢物混标储备液:准确吸取0.05 mL浓度为100 μg·mL-1的4种硝基呋喃代谢物混标,用甲醇稀释、定容至100 mL容量瓶中,摇匀,配制成50 ng·mL-1的混标储备液。

4种硝基呋喃内标混标工作液:准确吸取1.0 mL浓度为100 μg·mL-1的4种硝基呋喃代谢物同位素混标,用甲醇稀释、定容至100 mL容量瓶中,摇匀,配制成 1 μg·mL-1的混合内标工作液。

基质标准系列溶液:称取6份空白基质,分别准 确 加 入 10 μL、20 μL、40 μL、100 μL、200 μL、400 μL浓度为50 ng·mL-1的4种硝基呋喃代谢物混标储备液及浓度为1 μg·mL-1的混合内标工作液,配制成4种硝基呋喃代谢物标准系列浓度均为0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1,内标浓度为 50 ng·mL-1的基质标准系列溶液。

1.3.3 仪器条件

(1)液相色谱条件。色谱柱:Xtimate C18(150 mm×4.6 mm,3 μm),柱温:35 ℃;流速:0.8 mL·min-1; 进 样 量:10 μL。 流 动 相:5 mmol·L-1乙酸铵的0.1%甲酸水溶液(A)+甲醇(B),梯 度 洗 脱 程 序:0.00~1.00 min,50%A+50%B;1.00~ 1.01 min,10%A+90%B;1.01~ 5.50 min,50%A+50%B;5.50~7.00 min,50%A+50%B。

(2)质谱工作条件。离子源:AJS-ESI;离子模式:正离子;扫描模式:多重反应监测(MRM);雾化室压力:55 psi;鞘气温度:400 ℃;鞘气流量:12 L·min-1;干燥气温度:325 ℃;干燥气流量:10 L·min-1;毛细管电压:4 000 V;喷嘴电压:500 V;监测离子参数情况见表1。

表1 硝基呋喃类代谢物特征离子质谱条件表

2 结果与分析

2.1 方法的线性关系

将配制的基质标准系列溶液在仪器条件下上机测试,以特征离子质量色谱峰外标与内标峰面积的比值作为纵坐标,相对应的基质标准溶液的浓度点作为横坐标,采用色谱工作站自动拟合标准工作曲线,线性回归方程和相关系数见表2,结果表明,4种硝基呋喃代谢物在0.5~20.0 ng·mL-1线性关系良好,相关系数R均大于0.995,满足相关标准对线性关系的规定。

表2 4种组分的线性方程与相关系数表

2.2 检出限与定量限

称取2.01 g阴性草鱼,加入0.5 μg·kg-1标准溶液,按照1.3试样处理过程和仪器条件分析测定,AOZ、AMOZ、AHD、SEM的信噪比分别为586.1、541.0、206.4、23.0,均大于3.0,本方法中AOZ、AMOZ、AHD 和 SEM 的检测限为 0.5 μg·kg-1;称取 2.00 g阴性草鱼,加入1.0 μg·kg-1标准溶液,按照1.3试样处理过程和仪器条件分析测定,AOZ、AMOZ、AHD、SEM的信噪比分别为114.1、142.2、37.4、27.3,均大于10.0,本方法中AOZ、AMOZ、AHD和SEM的定量限为1.0 μg·kg-1,检出限与定量限均满足标准相关要求。

2.3 加标回收率及精密度

称取阴性草鱼样品,分别添加低(1.00 μg·kg-1)、中(2.50 μg·kg-1)高(5.00 μg·kg-1)3 个浓度水平的4种硝基呋喃代谢物混标溶液,按照1.3试样处理过程和仪器分析条件将各浓度水平平行测定6次,考察方法的加标回收情况与精密度(以相对标准偏差RSD表示),试验结果见表3,4种硝基呋喃代谢物在1.00~5.00 μg·kg-1添加水平下,平均回收率在74.3%~88.4%,相对标准偏差RSD在1.2%~5.1%,平均回收率与精密度均符合方法标准规定。

表3 4种组分的加标回收率与精密度试验结果表

3 结论

本研究参照GB 31656.13—2021,建立了液相色谱-串联质谱法测定草鱼中AOZ、AMOZ、AHD和SEM等4种硝基呋喃类代谢物残留量的分析方法,该方法前处理过程简便,分离效果好,分析速度快,可以进行准确定性定量分析,经过方法学验证,该方法线性关系良好,检出限与定量限、加标回收情况及方法精密度都满足相关标准的规定,可以满足食品检验检测机构对水产品中4种硝基呋喃类代谢物多残留的批量快速检测需求。

猜你喜欢

呋喃质谱法硝基
QuEChERS-气相色谱-质谱法测定植物油中16种邻苯二甲酸酯
硝基胍烘干设备及工艺研究
气相色谱-串联质谱法测定PM2.5中7种指示性多氯联苯和16种多环芳烃
高塔硝基肥,科技下乡助农丰收
超声提取/气相色谱-质谱法测定红树林沉积物中蒲公英萜醇
1-O-[3-(2-呋喃基)丙烯酰基]-β-D-吡喃果糖的合成及应用
九硝基三联苯炸药的合成及表征
质谱法测定西安脉冲反应堆99Tc嬗变率
5,5’-二硫双(2-硝基苯甲酸)构筑的钴配合物的合成与晶体结构
一个含呋喃环顺磁性碳硼烷衍生物的合成及其生成机理