反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平及临床意义

李 莉 王 媛 石 芳*

1.陕西省延安市中医医院(716000)；2.延安大学附属医院

据国内相关数据统计，我国不明原因反复自然流产达20%[1]。探讨其发病机制并降低发生率是临床研究重点。miRNA在细胞增殖、凋亡以及胚胎发育中发挥重要作用[2-3]。近年有研究显示，miRNA在反复自然流产患者绒毛中异常表达，可作为不明原因反复自然流产预测的潜在生物标记物[4]。miR-129-5p属于一种新发现的miRNA，有研究发现其表达水平在子宫内膜癌中明显下调[5]。但在反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜表达水平目前尚不清楚。因此，本研究拟探讨反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平及临床意义，为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年10月-2021年9月本院收治的反复不明原因自然流产患者148例为流产组，正常早期妊娠人工流产者80例为对照组。纳入标准：①流产组有≥2次自然流产史；②签署知情同意书；③孕周≤12周。排除标准：①伴有心肝肾等重要脏器疾病；②伴有自身免疫性疾病、内分泌功能异常、感染性疾病以及存在吸毒、酗酒、抽烟等不良习惯；③存在子宫畸形、先天性生殖道畸形；④近期使用甾体类激素药物；⑤认知功能障碍；⑥临床资料不完整；⑦夫妻双方染色体核型异常。本研究已获得院医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1标本采集抽取纳入对象入院后外周静脉血离心取上清液，-20℃保存待测。将清宫后绒毛、蜕膜组织无菌生理盐水漂洗残留血迹，液氮保存，再置入-20℃备用。

1.2.2血清、绒毛和蜕膜miR-129-5p检测①总RNA提取：将待测血清置无RNA酶离心管中，加1ml裂解液充分混匀裂解，采用Trizol试剂盒(美国Invitrogen公司)提取血清中总RNA；将绒毛及蜕膜组织分别加液氮研磨至粉末置于离心管中，采用Trizol试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司)提取总RNA，经分光光度计测浓度及纯度。②逆转录合成：参照M-MLV逆转录试剂盒(加拿大Fermentas公司)将RNA逆转成cDNA。③ qRT-PCR测定：以cDNA为模板，以U6作内参基因，反应条件：92℃预变性10 min，92℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸30s，共进行40个循环。反应结束后收集数据，并Ct值进行分析，以U6为内参基因，采用2-ΔΔCt法计算miR-129-5p相对表达量。

1.2.3实验室相关指标检测采用放射免疫分析法检测血清孕酮(P)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平，采用酶联免疫吸附法检查血清白细胞介素-2(IL-2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平，试剂盒均购于美国R&D公司。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般临床资料

流产组年龄(30.3±3.4)岁(20～40岁)，孕周(8.2±0.3)周(6～11周)，孕次(2.3±0.1)次(1～4次)；对照组年龄(30.4±3.5)岁(21～40岁)，孕周(8.4±0.3)周(5～12周)，孕次(2.3±0.2)次(2～5次)。两组年龄、孕周无差异(P>0.05)。

2.2 血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平

流产组血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平均低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组不同标本中miR-129-5p表达水平比较

2.3 血清P、hCG、IL-2、VEGF水平

流产组血清P、hCG、VEGF水平均低于对照组，IL-2水平高于对照组(均P<0.05)。见表2。

表2 两组血清各指标水平比较

2.4 流产组血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达与血清各指标水平的相关性

Pearson相关分析显示，血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达与P、hCG、VEGF水平均呈正相关，与IL-2水平呈负相关(均P<0.05)。见表3。

表3 流产组各标本中miR-129-5p表达与血清指标水平相关性

2.5 miR-129-5p表达水平诊断反复不明原因自然流产价值

ROC曲线分析显示，血清、绒毛、蜕膜中miR-129-5p诊断反复不明原因自然流产发生均有一定临床意义。见表4。

表4 不同标本中miR-129-5p表达水平对反复不明原因自然流产的诊断价值

3 讨论

不明原因反复自然流产发病机制尚未完全确定，给临床治疗带来困难，早期有效诊断标记物是生殖医学研究热点和难点。

miRNA在滋养层细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成中有重要调节功能[6-7]。研究发现，一些miRNA在正常妊娠胎盘、绒毛和正常子宫内膜中表达有差异[8-9]。miR-129-5p是miR-129的成熟产物，主要通过调控下游靶基因参与疾病的发生发展[10]。既往有研究报道，miR-129-5p过表达可抑制卵巢癌、宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移[11-12]。因此，本次研究探讨反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平及临床意义。结果显示，流产组血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平均低于对照组，表示miR-129-5p表达出现异常。既往研究[13]显示，miR-129-5p在结肠癌组织中相对表达量低；但张绍杰等[14]研究发现，血浆miR-129-5p表达水平在狼疮性肾炎合并微观血瘀证患者升高。

本研究结果显示，流产组血清P、hCG、VEGF水平均低于对照组，IL-2水平高于对照组，说明不明原因反复自然流产患者存在炎症反应且机体孕激素、血管内皮生长因子分泌降低，与杨娟等[15]研究结果一致。本研究相关分析显示，血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平均与血清P、hCG、VEGF水平呈正相关，与IL-2水平呈负相关，说明血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达水平与P、hCG、VEGF、IL-2密切相关，可能通过调控患者体内激素水平、血管生成及炎症反应因子共同参与疾病的病理过程。妊娠期P由妊娠黄体和胎盘滋养层细胞分泌，hCG是胎盘滋养层细胞分泌，而miR-129-5p能够抑制胎盘滋养层细胞凋亡，同时使胎盘新生血管生成受阻[16]，进而降低了患者血清中P、hCG、VEGF水平。本研究经ROC曲线分析，血清、绒毛、蜕膜中miR-129-5p表达水平预测流产的敏感度和特异度均较高，可能作为诊断不明原因反复自然流产的有效标志物。

综上所述，反复不明原因自然流产患者血清、绒毛和蜕膜中miR-129-5p表达异常降低，且与炎症反应、抑制血管生成水平相关；诊断反复不明原因自然流产的敏感度和特异度较高，有望作为诊治反复不明原因自然流产的有效指标。